罗艳红
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：湖南师范大学医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Mir-148a慢病毒表达载体构建及其稳定表达细胞系的筛选
- 2016年
- 目的:构建人源性mir-148a慢病毒过表达载体,并筛选过表达mir-148a稳定细胞株U251、U87、BT325,鉴定mir-148a在稳定细胞系中的表达水平。方法:设计并合成mir-148a上下游引物,PCR扩增mir-148a基因片段,经过酶切后克隆至慢病毒载体上,构建p GC-FU-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin-mir-148a过表达载体,在293T细胞中与p Helper1.0、p Helper2.0包装产生慢病毒,测定mir-148a慢病毒滴度。用构建好的慢病毒感染神经胶质瘤细胞系U251、U87、BT325,用嘌呤霉素筛选,筛选稳定细胞系后q RT-PCR检测mir-148a的表达情况。结果:测序结果证明mir-148a慢病毒载体构建成功并获得了相应的慢病毒。嘌呤霉素筛选后获得稳定表达mir-148a的U251、U87、BT325细胞系,mir-148a表达水平在三种细胞中分别升高167.38倍、7.19倍、11.46倍。结论:成功构建了mir-148a的慢病毒载体,筛选得到了mir-148a过表达稳定胶质瘤细胞系U251、U87、B325。
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- 关键词：慢病毒载体神经胶质瘤细胞QRT-PCR
