李悦
- 作品数：3 被引量：0H指数：0
- 供职机构：湖南师范大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省研究生科研创新项目湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Mir-148a慢病毒表达载体构建及其稳定表达细胞系的筛选
- 2016年
- 目的:构建人源性mir-148a慢病毒过表达载体,并筛选过表达mir-148a稳定细胞株U251、U87、BT325,鉴定mir-148a在稳定细胞系中的表达水平。方法:设计并合成mir-148a上下游引物,PCR扩增mir-148a基因片段,经过酶切后克隆至慢病毒载体上,构建p GC-FU-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin-mir-148a过表达载体,在293T细胞中与p Helper1.0、p Helper2.0包装产生慢病毒,测定mir-148a慢病毒滴度。用构建好的慢病毒感染神经胶质瘤细胞系U251、U87、BT325,用嘌呤霉素筛选,筛选稳定细胞系后q RT-PCR检测mir-148a的表达情况。结果:测序结果证明mir-148a慢病毒载体构建成功并获得了相应的慢病毒。嘌呤霉素筛选后获得稳定表达mir-148a的U251、U87、BT325细胞系,mir-148a表达水平在三种细胞中分别升高167.38倍、7.19倍、11.46倍。结论:成功构建了mir-148a的慢病毒载体,筛选得到了mir-148a过表达稳定胶质瘤细胞系U251、U87、B325。
- 李悦罗艳红谌思王照飞彭小宁
- 关键词：慢病毒载体神经胶质瘤细胞QRT-PCR
- 重组人Grn的克隆与表达
- 2015年
- 目的 :构建人Grn基因原核表达载体并观察其表达。方法 :从人单核细胞系THP-1细胞c DNA中扩增出Grn片段,通过酶切与连接,将Grn片段构建到p GEX-4T-2质粒载体上,再转化入感受态细胞TOP10,菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析,测序正确的重组质粒再转化入感受态细胞DE3中表达蛋白,用Western blot鉴定结果。结果 :构建的p GEX-4T-2表达载体作PCR和双酶切鉴定,证实其中有目的片段完整插入,插入片段测序结果与Grn序列设计完全一致,将其转化入DE3中,Western blot结果表明在细菌裂解上清有分子质量为91KD的融合蛋白。结论 :重组人Grn的克隆与表达成功,为进一步研究Grn的功能奠定了基础。
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- 关键词：基因克隆基因表达
- STAB1表达与多形性胶质母细胞瘤病人生存的关联
- 2014年
- 目的:前期的研究发现Stab1为GBM的一个特异性差异表达基因,本文通过对其他GBM表达公共数据库的进一步挖掘结合实验验证从而推测STAB1的表达与GBM生存之间的关系。方法:对TCGA数据库中的GBM基因表达谱芯片数据进行Cox回归分析和生存分析;用免疫组织化学实验方法检测湖南省第二人民医院病理科1999—2012年间GBM肿瘤31例中STAB1的表达情况,并分析其与GBM生存之间的关系。结果:用Cox回归分析和生存分析以及结合免疫组化实验发现STAB1的表达与GBM的生存有显著相关性(HR=1.96,P=1.98e-04),为GBM预后的一个危险因素。在GBM病人中,STAB1阳性表达组生存时间显著低于阴性表达组。结论:结合STAB1潜在促进血管生成的功能,本文从临床关联的角度进一步说明STAB1在GBM中的重要性。
- 粟艳林谌思李悦陈秋霞彭小宁
- 关键词：多形性胶质母细胞瘤COX回归数据挖掘
