王欣玲
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 斯氏按蚊性别决定基因fruitless的鉴定及其性别可变剪接分析
- 2017年
- 目的 分离、鉴定和分析斯氏按蚊性别决定基因fruitless（Anstfru）.方法 通过生物信息学方法与分子生物学方法获得了Anstfru基因的全长.通过RT-PCR方法验证Anstfru的性别可变剪接模式与时间表达特点.通过与已知物种FRU蛋白比较,分析斯氏按蚊FRU蛋白结构特点与分子进化特征.结果 分离并鉴定Anstfru基因全长,其在雌、雄蚊中通过可变剪切形成性别特异性mRNA.Anstfru在1～2龄阶段幼虫阶段开始表达,表达量随后逐渐升高,在成蚊中表达量最高.FRU蛋白具有保守的BTB与锌指功能结构域区.结论 Anstfru具有保守的昆虫性别决定基因fru表达特征与功能结构域,对其深入研究将为其最终应用于蚊虫雌雄分离技术,推动昆虫不育技术（Sterile insect technique,SIT）在蚊媒传染病防治上的应用.
- 王衍海王欣玲顾金保
- 关键词：斯氏按蚊FRUITLESS性别决定基因
- 鼻病毒非结构蛋白2B诱导细胞发生内质网应激被引量：1
- 2015年
- 为探讨鼻病毒非结构蛋白2B诱导内质网应激和细胞凋亡的机制,本研究构建了鼻病毒非结构蛋白2B的真核表达载体p2B-GFP,通过转染BHK-21细胞检测相关标志蛋白的变化情况。结果显示,非结构蛋白2B定位表达于BHK-21细胞内质网,诱导内质网应激标志蛋白Grp78、CHOP的表达增加,并使活化转录因子6(ATF6)的转录活性增加,还诱导BHK-21细胞发生核浓缩而凋亡,使凋亡标志蛋白PARP发生降解而减少。结果提示,鼻病毒非结构蛋白2B可诱导细胞发生内质网应激,并经该途径诱导细胞凋亡。
- 迟苗苗宋娟宋芹芹于洁罗小暖张璐王欣玲韩俊
- 关键词：鼻病毒内质网应激凋亡
- 转染RNA拯救CVB3方法的建立
- 2024年
- 目的建立转染RNA拯救CVB3的方法,为优化CVB3的分离鉴定和体外培养提供技术参考。方法比较Qiagen 57704、Qiagen 52904和Trizol三种核酸提取试剂提取CVB3基因组RNA的效率及Lipofectamine 2000和Lipofectamine 3000两种转染试剂转染病毒RNA的效率;探究提取RNA时增加洗脱次数对病毒拯救效率的影响;比较使用HeLa细胞、Vero细胞和HEK293T细胞拯救CVB3的效率。由此确定转染病毒RNA拯救CVB3的最适条件。结果Qiagen 57704、Qiagen 52904、Tizol试剂盒提取RNA拯救病毒的噬斑数分别为13.33±1.53、150.00±15.00、1.67±0.58,三种方法提取CVB3 RNA拯救病毒RNA的效率差异具有统计学意义(F=268.920,P<0.001);Lipofectamine3000、Lipofectamine2000转染病毒RNA形成的噬斑数分别为74.50±3.00、22.00±5.00,差异具有统计学意义(P<0.01);HEK293T细胞培养病毒拯救CVB3的效率高于HeLa细胞和Vero细胞,三种细胞拯救病毒的拷贝数分别为6.09×10^(7)±8.00×10^(5)、5.18×10^(3)±6.17×10^(2)、0,差异具有统计学意义(F=17383.644,P<0.001),同时发现提取RNA时通过多次洗脱可以提高病毒拯救的效率。结论本研究成功建立了一种优化的转染RNA拯救CVB3的方法,选用Qiagen 52904核酸提取试剂盒、增加洗脱次数、使用Lipofectamine 3000转染试剂、HEK293T细胞转染等方法,可以有效提升病毒的拯救效率。
- 李梅王欣玲宋芹芹迟苗苗韩俊宋娟
- 关键词：柯萨奇病毒B3病毒分离转染病毒拯救
- 柯萨奇病毒B3型感染引起HeLa细胞内源性小干扰RNA的变化被引量：1
- 2020年
- 探究柯萨奇病毒B3型(Coxsackie virus type B3,CVB3)感染的细胞是否诱导内源性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)的产生。以CVB3接种HeLa细胞,在细胞培养箱(5%CO 2、37℃)孵育1 h。随后加入含2%血清的细胞维持液,继续培养3 h和6 h后收集细胞。用高通量测序(二代测序)试剂盒提取细胞RNA,并反转录合成cDNA,构建文库,上机测序。过滤数据,去除插入片段过长的序列、低质量序列、poly A序列和小片段序列,与已知的小RNA数据库比对鉴定siRNA。通过茎-环反转录-聚合酶链反应,证实内源性siRNA在感染CVB3后的表达。结果显示,感染CVB33 h和6 h后,HeLa细胞产生了多种内源性siRNA。其中内源性siRNA(novel_sir3502和novel_sir2806)在感染后3 h和6 h均可持续表达。经比对,novel_sir3502和novel_sir2806均可以识别45S和28S核糖体前体RNA。结果提示,CVB3感染可能干扰核糖体成熟。
- 姚海兰宋娟王欣玲王瑞芳宋芹芹史冰田韩俊
- 关键词：HELA细胞
- 安徽阜阳冬季手足口病患者合并病毒感染的调查研究被引量：2
- 2016年
- 目的 研究安徽阜阳2013年冬季手足几病患儿合并其他病毒感染情况.方法 根据手足口病病例诊断标准诊断收集2013年11月-2013年12月安徽阜阳手足口病住院病例及资料,采集患儿血清.使用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测血清标本中的细小病毒B19、I型单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒和副流感病毒的IgM抗体.整理分析患儿合并病毒感染情况.结果 2013年11月-2013年12月45份手足口病患儿血清腺病毒IgM阳性30例（67.7％）,呼吸道合胞病毒IgM阳性8例（17.8％）,细小病毒B19 IgM阳性8例（17.8％）,巨细胞病毒IgM阳性3例（6.7％）,单纯疱疹病毒IgM阳性l例（2.2％）,血清中未检测出现副流感病毒IgM抗体.同时发现多例合并两种以上病毒IgM阳性现象.结论 2013年阜阳地区冬季手足口病合并腺病毒、呼吸道合胞病毒和细小病毒B19等为主的感染.
- 于洁牛军伟谢涵坤宋娟宋芹芹夏冬王欣玲罗小暖朱红梅韩俊
- 关键词：手足口病疾病传播腺病毒B19呼吸道合胞病毒
- 建立荧光定量PCR方法鉴定1例入境人员携带伊科普玛病毒基因
- 2017年
- 目的 建立用于检测伊科普玛病毒（Ekpoma virus,EKV）基因的实时荧光定量PCR（qPCR）的检测方法.方法 根据GenBank中EKV-1和EKV-2基因的保守序列,设计引物和探针,建立检测EKV-1和EKV-2基因的qPCR方法;使用建立的EKV-1和EKV-2病毒qPCR的检测方法,对1名入境人员携带伊科普玛病毒血清和全血样本的检测.结果 建立了检测EKV-1和EKV-2病毒Taqman探针的荧光定量qPCR检测方法,成功检测出1名安哥拉入境人员血清和全血样本中携带EKV-2基因.结论 建立的qPCR检测方法可用于血液标本中EKV-1和EKV-2的检测.
- 夏冬宋娟罗小暖宋芹芹王欣玲武桂珍韩俊
- 关键词：实时荧光定量PCR
