文兰
- 作品数：9 被引量：15H指数：3
- 供职机构：南华大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省教育厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人巨细胞病毒UL123基因外显子2,3诱饵质粒的构建与鉴定
- 2006年
- 目的构建和鉴定人巨细胞病毒(HCMV)UL123基因外显子2,3(ie1-exon2,3)的诱饵质粒,并评价其用于筛选胎儿脑文库的可行性。方法以重组质粒pTW IN1/ie1为模板扩增ie1-exon2,3,克隆入pBT质粒,转化E.coli XL1-B lue MRF'Kan,经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子,提取阳性重组质粒转化入细菌双杂交系统报告菌株,诱导表达重组融合蛋白,用SDS-PAGE和W estern B lot对表达产物进行鉴定,并进一步鉴定重组子自身激活作用。结果在细菌双杂交系统中成功构建了细菌双杂交诱饵质粒pBT/ie1-exon2,3,并在报告菌株中表达了重组融合蛋白rIE1-N85/λC1,且pBT/ie1-exon2,3无自身激活作用。结论成功构建了无自激活作用的诱饵质粒pBT/ie1-exon2,3,可用于筛选胎儿脑文库。
- 马琼山文兰陈利玉罗敏华邬国军
- 关键词：巨细胞病毒外显子质粒
- 358株肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药性分析被引量：4
- 2013年
- 目的分析肺炎克雷伯菌的临床分布及耐药情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法采用回顾性调查的方法对358株肺炎克雷伯菌的标本来源及耐药性进行分析。结果 358株肺炎克雷伯菌中,产ESBLs阳性142株,阳性率为39.7%;ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌对所测抗菌药物耐药性显著高于产ESBLs阴性菌,并且出现2株对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌。结论产ESBLs肺炎克雷伯菌在医院感染中十分流行,多重耐药明显。
- 文兰刘双全谢小平
- 关键词：肺炎克雷伯菌超广谱Β-内酰胺酶耐药性
- 人巨细胞病毒UL123基因全长及其外显子4的克隆与表达被引量：2
- 2006年
- 【目的】克隆人巨细胞病毒（HCMV）UL123基因cDNA全长（iel）及其外显子4（iel-exon4），构建原核表达重组质粒，诱导立即早期蛋白1（IE1）及其C-端86-491氨基酸（IE1-C86-491）表达，并鉴定表达产物。【方法】分别用RT-PCR和PCR法将iel和iel-exon 4从感染了HCMV的人胚肺成纤维细胞（HEL）中扩增出来，再分别克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端，转化大肠杆菌，经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子，在低温和低IPTG浓度下诱导重组子表达可溶性重组融合蛋白rIE1／intein2和rIE1-C86-491／intein2，用SDS-PAGE和Western Blotting对表达产物进行鉴定。【结果】经PCR、限制性酶切和测序鉴定重组质粒pTWIN1／iel和pTWIN1／iel-exon4构建成功，sDS-PAGE和Western Blotting分析表明融合蛋白在大肠杆菌中表达。【结论】成功克隆并表达了iel和iel-exon4。
- 文兰陈利玉邬国军傅鹰罗罗敏华赵俊琴
- 关键词：基因表达
- 人巨细胞病毒立即早期蛋白功能的研究进展被引量：2
- 2006年
- 人巨细胞病毒基因表达分为立即早期、早期和晚期三个时相。立即早期基因的表达在病毒基因和宿主细胞基因的表达和调控方面有重要作用,并能够影响宿主细胞周期进程。本文对立即早期蛋白调节病毒复制以及影响细胞周期进程方面的功能作一综述。
- 文兰陈利玉
- 关键词：HCMV病毒复制细胞周期凋亡
- 人巨细胞病毒UL123基因外显子4诱饵质粒的构建与鉴定
- 2010年
- 目的构建和鉴定人巨细胞病毒(HCMV)UL123基因外显子4(ie1-exon4)的诱饵质粒,并评价其用于细菌双杂交系统筛选文库的可行性。方法以重组质粒pTWIN1/ie1为模板扩增ie1-exon4,克隆入pBT质粒,转化E.coliXL1-BlueMRF’Kan,经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子,提取阳性重组质粒,再转化入细菌双杂交系统报告菌株,诱导表达重组融合蛋白,用SDS-PAGE和WesternBlot对表达产物进行鉴定,并进一步鉴定重组子自身激活作用。结果细菌双杂交诱饵质粒pBT/ie1-exon4构建成功,并在报告菌株中表达了重组融合蛋白rIE1-C86-491/λC1,且pBT/ie1-exon4无自身激活作用。结论成功构建了无自激活作用的诱饵质粒pBT/ie1-exon4,可用于筛选文库。
- 文兰李一柯陈利玉罗敏华
- 关键词：人巨细胞病毒克隆
- 人巨细胞病毒蛋白IE1及pp65在HEL细胞中表达的时空特性被引量：1
- 2006年
- 目的 研究HCMV感染HEL细胞后，病毒蛋白IE1及pp65在不同时间点的亚细胞分布及其表达量-时效变化相关性。方法 HCMV感染HEL细胞后，吸附2h，维持培养0、2、4、6、10、22及46h后，用病毒蛋白IE1的单克隆抗体及蛋白pp65的单克隆抗体做免疫细胞化学染色，检测此两种蛋白的胞内分布；同时运用图像分析系统对此检测结果进行灰度值测定，并利用方差分析分析此测定结果。结果 IE1蛋白仅在核内检测到；表达趋势是：4～6hp．i．呈表达上升趋势，6～8hp．i．又下降。pp65首先于仅在核内被检测到，之后也分布于胞浆中。pp65表达于2～8hp．i．表达增多，8～24hp．i．呈胞内稳定表达，24-48hp．i．表达降低。结论 IE1蛋白及pp65表达的亚细胞分布具有时空特异性；两种蛋白的表达量上都表现为量-时效相关性；本研究间接反映了病毒复制增殖的连续过程。
- 傅鹰陈利玉罗敏华李建华文兰
- 关键词：HCMVPP65蛋白HEL细胞
- 人巨细胞病毒UL123基因的克隆、表达和细菌双杂交诱饵质粒的构建与鉴定
- 目的：在IMPACT-TWIN蛋白纯化系统中克隆和表达人巨细胞病毒(HCMV)ULl23基因(iel)外显子4(iel-exon4)及其cDNA全长，并对表达产物进行鉴定;在细菌双杂交系统中克隆和表达HCMViel-ex...
- 文兰
- 关键词：人巨细胞病毒基因克隆原核表达
- 文献传递
- 老年女性泌尿系感染病原菌分布及耐药性监测被引量：3
- 2013年
- 目的了解老年女性泌尿系感染病原菌的分布及耐药情况,指导临床合理用药。方法对医院2010～2012年泌尿系感染的老年女性患者中段尿进行细菌培养及药敏分析。结果医院老年女性泌尿系感染的细菌以革兰氏阴性菌为主,占59.2%,常见致病菌有大肠埃希菌、粪肠球菌、肺炎克雷伯菌和金黄色葡萄球菌。真菌感染比例较高,为23.1%.大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南敏感,对头孢哌酮/舒巴坦和阿米卡星的耐药率较低,为4.8%～23.8%,而对其它抗菌药物耐药率较高;革兰阳性球菌对万古霉素敏感,对阿米卡星和呋喃妥因的耐药率低,为2.6%～17.9%。结论泌尿系感染病原菌的培养和耐药性监测,对临床合理用药具有重要意义。
- 文兰刘双全谢小平
- 关键词：老年女性泌尿系感染病原菌耐药性
- 老年糖尿病患者尿路感染的病原菌分布及耐药性监测被引量：3
- 2013年
- 目的：了解我院老年糖尿病患者尿路感染的病原茵分布及耐药情况，指导临床合理用药。方法：选择我院2010-2012年收治的477例老年糖尿病合并尿路感染患者为研究对象，对其中段尿进行细菌培养及药敏分析。结果：本院老年糖尿病患者尿路感染的细菌以革兰氏阴性菌为主，占67．5％，常见致病菌为大肠埃希菌、肠球菌、肺炎克雷伯茵和表皮葡萄球菌，并发现有2种细菌混合感染及真菌并存感染。革兰阴性菌对亚胺培南、阿米卡星和头孢哌酮／舒巴坦的耐药率较低，而对其他抗菌药物的耐药率较高；革兰阳性茵对万古霉索、阿米卡星和呋喃妥因的耐药率较低，表皮葡萄球菌对万古霉素敏感。结论：本院老年糖尿病患者尿路感染的主要病原菌是大肠埃希菌，其对亚胺培南、阿米卡星和头孢哌酮／舒巴坦的耐药率较低，临床可参考应用。
- 文兰谢小平蒋艳姜孝新
- 关键词：老年糖尿病尿路感染病原菌耐药性
