- 肺基底细胞样鳞癌与小细胞癌的细胞形态学对比被引量：2
- 2016年
- 目的探讨肺基底细胞样鳞癌（BSC）与小细胞癌的细胞形态学特点及免疫组织（细胞）化学染色在鉴别诊断中的意义。方法收集经组织学证实的肺BSC及小细胞癌各17例，包括支气管刷片、细针穿刺涂片及肺泡灌洗液。对两组涂片中的细胞团和单个细胞的比例、细胞团的排列及形态、拉丝及挤压假象、细胞核最大径、细胞质、细胞核形态、核染色质分布、核仁、单个角化细胞、坏死、凋亡小体及核分裂象等17个形态学特征进行观察和比较；免疫组织（细胞）化学染色采用EnVision法，对两组25个病例进行了标记，其中10例BSC穿刺样本采用扩增阻滞突变系统（ARMS）进行了表皮生长因子受体（EGFR）基因外显子18、19、20、21突变的检测。结果BSC组15／17呈黏附紧密的细胞团，小细胞癌组14／17呈现单个散在或三五成群、排列松散的细胞簇；BSC的细胞核相对于小细胞癌要略大一些，15／17的BSC细胞核最大径为9～11μm；而13／17的小细胞癌细胞核最大径为7～9μm；小细胞癌具有特征性胡椒盐样核（15／17），核铸型（17／17），挤压及拉丝现象明显（14／17），而BSC16／17可见针尖大小核仁；此外BSC较小细胞癌更易出现单细胞角化（9／17）。BSC组与小细胞癌组之间上述细胞形态学特点的比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。细胞块的免疫组织化学染色显示BSC特征性表达CK5、p40和p63，而小细胞癌则表达甲状腺转录因子（TTF）1、嗜铬粒素A（CgA）、突触素和CD56，PAX5在小细胞癌也有局灶阳性表达。10例BSC未检测出EGFR基因突变，均为野生型。结论细胞多黏附成团、细胞核较小、细胞略增大，少见拉丝、挤压现象及显著的核铸型，具有针尖大小的小核仁，可以出现单细胞角化是BSC区别于小细胞癌的重要细胞形态学特点；免疫组织化学染色对于细胞病理学鉴别二者很有
- 何淑蓉白玉萍宫环邸婧陈岚戴维德胡松涛刘冬戈
- 关键词：肺肿瘤小细胞肺癌受体表皮生长因子
- 痰液标本无细胞上清游离DNA二代测序建库、检测方法
- 本发明公开了一种痰液标本无细胞上清游离DNA二代测序建库、检测方法。所述痰液标本cfDNA二代测序建库方法包括以下步骤：1)提取、质控：对痰液标本进行化痰处理，离心，从上清液中提取痰液标本的cfDNA，对所述cfDNA进...
- 王征刘东戈王逸菲李琳李晓光崔娣杨丽邸婧何磊孙铭君
- 实性低分化肺癌167例的病理分型及其表皮生长因子受体基因突变和间变性淋巴瘤激酶检测被引量：4
- 2018年
- 目的探讨实性低分化肺癌通过免疫组织化学和特殊染色进一步病理分型，及其表皮生长因子受体（EGFR）基因突变和间变性淋巴瘤激酶（ALK）检测情况。方法回顾分析北京医院2014年4月至2017年4月非小细胞肺癌827例，对于其中的167例实性低分化肺癌，通过黏液特殊染色（淀粉酶处理的过碘酸雪夫染色）和免疫组织化学10种抗体[细胞角蛋白（CK）7、波形蛋白、Ki-67、CK5/6、p40、甲状腺转录因子1、Napsin A、CD56、嗜铬粒素A、突触素]进一步病理分型；采用扩增阻滞突变系统（ARMS）法对EGFR基因第18、19、20、21号外显子进行基因突变检测；用免疫组织化学Ventana ALK（D5F3）检测ALK的突变并用荧光原位杂交（FISH）验证。结果167例患者中女性79例，男性88例；年龄35～77岁，中位年龄62岁。镜下〉10%的癌组织排列呈巢片状，缺乏腺癌、鳞状细胞癌（简称鳞癌）和神经内分泌癌典型的形态学排列的病例，通过免疫组织化学和特殊染色分型为腺癌64例（38.32%）、鳞癌34例（20.35%）、大细胞神经内分泌癌21例（12.57%）、复合型大细胞神经内分泌癌5例（2.99%）、腺鳞癌2例（1.20%）、大细胞癌41例（24.55%）；Ki-67阳性指数5%～65%。5例（2.99%，5/167）腺癌成分中可见EGFR突变（19del 3例、L858R 2例），2例（1.20%，2/167）腺癌免疫组织化学Ventana ALK（D5F3）阳性，经FISH验证有基因重排。结论缺乏形态分化特征的实性低分化肺癌可以通过免疫组织化学和特殊染色进一步分型和进行分子病理学检测，从而寻找分子靶点为患者提供更为精准的治疗，改善预后。
- 方芳方芳王玉霞胡松涛杨丽邸婧刘东戈
- 关键词：DNA突变分析
- 全基因组拷贝数变异评分在肺腺癌诊断及预后预测中的价值被引量：1
- 2020年
- 目的:探讨全基因组拷贝数变异(WGCNV)检测和评分系统在肺腺癌诊断和预后预测中的价值。方法:应用显微微切割技术获取76例肺腺癌患者肿瘤组织标本91份和癌旁正常对照组织样本20份,通过全基因组扩增(WGA)富集DNA并构建测序文库,进行二代测序。评估肺腺癌手术和恶性胸水细胞学标本的肿瘤细胞核级别改变,在肿瘤核细胞大小、核分裂象计数、细胞核不典型性和不典型核分裂4个方面进行分级。评价WGCNV评分的预测预后的价值,根据受试者工作特征(ROC)曲线分析WGCNV评分在肺腺癌中的诊断价值。结果:20例癌旁正常肺组织样品WGCNV改变作为正常对照,所有肿瘤标本WGCNV评分为0~9.95分,中位WGCNV评分为2.7分。核级别评分与WGCNV评分之间存在正相关(r=0.78090,P<0.0001)。中评分组(1.74~4.23分)相对低评分组(<1.74分)的风险比为4.11(95%CI为0.72~23.57),高评分组(>4.23分)相对低评分组的风险比为2.07(95%CI为0.30~14.12),中、高评分组风险呈上升趋势。ROC曲线分析显示,当临界值为0.01时,诊断肺腺癌的灵敏度和特异度分别为97.8%和95.0%,阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)分别为99.0%和90.1%,ROC曲线下面积(AUC)为0.981,WGCNV评分具有较好的诊断肺腺癌的价值。当临界值为1.8时,鉴别浸润性腺癌与原位腺癌及微浸润性腺癌的灵敏度和特异度分别为78.1%和94.4%,PPV和NPV分别为98.0%和52.0%,AUC为0.896。结论:WGCNV评分系统在肺腺癌标本中有一定的诊断和预测预后价值。
- 张琳何磊李晟磊杜俊邸婧杨丽刘成龙尹良玉成殷宫玉艳武旺刘东戈王征
- 关键词：腺癌细胞核预后
- 肺腺癌患者血浆和肿瘤标本中表皮生长因子受体基因T790M位点突变检测一致性研究被引量：4
- 2018年
- 目的探讨肺腺癌患者血浆和肿瘤标本中表皮生长因子受体（EGFR）基因T790M位点突变检测结果的一致性。方法收集12例可手术切除（I～ⅢA期）及100例进展期（ⅢB～IV期）肺腺癌患者的组织或细胞学肿瘤标本，其中11例标本为吉非替尼获得性耐药患者，并配对采集患者外周血标本。同期获得50例健康志愿者外周血标本。肿瘤标本采用扩增受阻突变系统方法检测EGFR基因突变。配对血浆标本采用二代测序环化单分子扩增和重测序技术检测循环肿瘤DNAEGFR基因突变。结果100例进展期肺腺癌患者血浆和肿瘤标本中，EGFR基因T790M位点突变的敏感度、特异度和一致率分别为50．O％、72．9％和72．0％，L858R位点突变的敏感度、特异度和一致率分别为91．7％、100．0％和98．O％，19外显子缺失突变的敏感度、特异度和一致率分别为79．2％、100．0％和95．0％。50例健康志愿者血浆中T790M突变[（1．0±0．0）拷贝]7例（14．0％），未检出L858R突变和19外显子缺失突变。12例可手术切除肺腺癌患者血浆中，T790M突变[（1．2±0．2）拷贝]4例（33-3％）．未检出L858R和19外显子缺失突变。100例进展期肺腺癌患者血浆中，T790M位点突变28例（28．0％），拷贝数为（34．0±22．7）拷贝。11例获得性吉非替尼耐药患者血浆中，T790M突变5例，拷贝数为（268．2±119．9）拷贝。结论进展期肺腺癌患者血浆及肿瘤标本中，检测T790M位点的敏感度、特异度和一致率低。健康志愿者血浆中存在T790M突变，可能提示T790M位点突变为EGFR信号传导路径的调节者，且在健康人群中具有一定的生理功能。
- 杜俊王征杨丽邸婧张建光王天阳刘东戈
- 关键词：腺癌受体表皮生长因子点突变
- 中老年结直肠癌患者POLE、POLD1基因突变分子分型与临床病理特征分析被引量：1
- 2023年
- 目的探讨携带POLE、POLD1基因突变的中老年结直肠癌患者的临床病理、分子病理改变特征。方法回顾性收集北京医院2020年10月至2022年9月诊断结直肠癌的45岁及以上中老年患者276例,通过二代测序检测及生物信息分析,筛选携带POLE、POLD1基因胚系有害突变及体细胞变异,并将276例患者分为:有害突变组6例,意义不明变异组18例,野生型组252例。同时收集患者的临床、病理特征,分析与其他分子病理检测结果的相关性,包括肿瘤突变负荷(TMB)、微卫星不稳定性状态(MSI)、基因共突变情况等。结果276例结直肠癌患者成功进行二代测序检测,所有患者中未检测出POLE、POLD1基因胚系突变,18例(6.5%,18/276)患者携带POLE基因突变,其中6例(2.2%,6/276)为有害突变,12例(4.3%,12/276)为意义不明变异,余为POLE基因野生型患者。10例(3.6%,10/276)患者携带POLD1基因突变,均为意义不明变异。5例(1.8%,5/276)同时携带两种基因突变。6例有害突变组患者与意义不明变异组及野生型组患者相比显示肿瘤分期早(P<0.05),发生低级别肿瘤出芽现象多见(P<0.05)。而有害突变组及意义不明变异组患者与野生型组患者比较,均更多见于结肠癌患者(P<0.05)及组织学表现低分化组(P<0.05)。有害突变组患者TMB中位数257.76muts/Mb,意义不明变异组患者TMB中位数74.4 muts/Mb,野生型组患者TMB中位数5.81muts/Mb,3组间TMB-H状态比较差异有统计学意义(均P<0.01)。有害突变组、意义不明变异组及野生型组患者检出MSI-H状态分别为1例(16.7%,1/6)、14例(77.8%,14/18)及18例(7.1%,18/276),而意义不明变异组患者MSI-H状态高于野生型组及POLE基因有害突变组患者(均P<0.01)。有害突变组患者KRAS、NRAS、BRAF、PIK3CA基因共突变发生频率高于意义不明变异组及野生型组患者(均P<0.05)。结论有害突变组、意义不明变异组结直肠癌患者存在独特临床病理特征,意义不明变异组�
- 王逸菲何磊杜俊崔娣杨丽邸婧刘东戈王征
- 关键词：结直肠肿瘤
- 细胞学标本间变性淋巴瘤激酶蛋白表达及基因融合检测规范化流程被引量：3
- 2015年
- 目的：研究细胞学标本间变性淋巴瘤激酶（ ALK）蛋白表达及基因融合检测的规范化流程。方法收集北京市7所三级甲等医院晚期肺腺癌细胞学标本，按照设计的规范化流程检测ALK蛋白表达及基因融合状态。制作福尔马林固定石蜡包埋（ FFPE）细胞学蜡块，应用免疫组化（ IHC）方法鉴别肿瘤细胞的来源与分型；应用Ventana IHC ALK（ D5F3）检测ALK蛋白的表达；应用实时荧光定量PCR（ qRT-PCR）方法检测表皮生长因子受体（ EGFR）基因野生型标本中ALK基因融合，并对无法制作细胞学蜡块的细胞学标本进行ALK基因融合检测；Ventana IHC ALK（ D5F3）检测阳性标本应用荧光原位杂交（FISH）方法验证ALK基因的融合状态。分析Ventana IHC ALK（D5F3）检测阳性并采用克唑替尼治疗患者的疗效。结果229例细胞学标本符合肺腺癌诊断，其中207例标本采用至少1种方法检测并获得ALK蛋白表达和基因融合检测结果，检测率为90．4％（207／229）。203例标本成功制作FFPE细胞学蜡块，应用Ventana IHC ALK（D5F3）检测ALK蛋白表达的成功率为100．0％，阳性率为10．3％（21／203）。98例EGFR基因野生型肺腺癌FFPE细胞学标本采用qRT-PCR方法检测ALK基因融合，96例检测成功（97．96％）。以qRT-PCR方法为标准，Ventana IHC ALK（D5F3）检测ALK蛋白表达的灵敏度为100．0％，特异性为98．7％。2种检测方法一致率为94．7％（ Kappa＝0．967， P＜0．001）。 FISH方法对Ventana IHC ALK（ D5F3）表达阳性的结果进行验证，2例寡肿瘤细胞学标本无法获得明确判读结果。6例Ventana IHC ALK（ D5F3）检测ALK蛋白表达阳性的患者选用克唑替尼治疗，有效5例。2例细胞学蜡块应用4％甲醛固定72 h后，Ventana IHC ALK（ D5F3）染色强度明显减弱；10例患者分别用FFPE细胞学蜡块标本切片和刮取细胞学甩片中细胞提取总RNA，qRT-PCR检测ALK基因融合结�
- 王征武晓楠石远凯韩晓红程刚李琳穆新林张予辉崔娣张力樊再雯朱广卿马凌云杨丽邸婧刘冬戈
- 关键词：肺肿瘤腺癌间变性淋巴瘤激酶细胞学技术
- 痰液标本中cfDNA的提取方法
- 本发明涉及DNA的提取方法领域，提供一种痰液标本中cfDNA的提取方法，其包括制备痰液中的cfDNA的提取样本和将提取样本使用提取cfDNA的试剂盒进行cfDNA的提取，所述痰液中cfDNA的提取样本的制备方法包括如下步...
- 王征刘东戈张琳施红孙明君崔娣李琳徐燕王孟昭邸婧阮力宋庆涛
- 文献传递
- 用2015 WHO肺肿瘤分类诊断肺穿刺活检标本及相关肿瘤驱动基因的突变检测被引量：12
- 2019年
- 目的应用2015版WHO肺肿瘤分类对肺的小活检标本的诊断标准探讨肺穿刺活检标本的病理诊断及其表皮生长因子受体(EGFR)等主要肿瘤驱动基因的改变情况。方法回顾性分析北京医院2015年7月至2018年7月肺穿刺活检标本806例的临床资料、病理切片、免疫组织化学切片、特殊染色切片,应用2015版WHO肺肿瘤分类对其中483例肺癌标本的诊断标准重新分类并且收集整理相关基因突变检测结果进行总结分析。结果3年穿刺活检诊断为肺癌的病例数共483例。女性221例,男性262例;年龄37~85岁,中位年龄65岁。可分为:小细胞癌40例(8.28%);大细胞神经内分泌癌11例(2.28%);混合性神经内分泌癌3例(0.62%);不典型类癌2例(0.41%);腺癌208例(43.06%);非小细胞肺癌,倾向腺癌92例(19.05%);鳞状细胞癌66例(13.66%);非小细胞肺癌,倾向鳞状细胞癌42例(8.70%);非小细胞癌,非特指型16例(3.31%);非小细胞肺癌,提示腺鳞癌3例(0.62%)。检测202例的EGFR基因突变,有突变的107例(52.97%)。133例腺癌中,EGFR突变86例(64.66%);52例非小细胞肺癌,倾向腺癌中检出EGFR突变18例(34.62%)。27例EGFR酪氨酸激酶抑制剂靶向药物治疗后耐药的患者22例检测出T790M突变,354例非小细胞肺癌中免疫组织化学Ventana ALK(D5F3)阳性3例,经EML4-ALK融合基因荧光PCR验证证实。38例检测了ROS1的病例有1例患者ROS1基因融合。1例伴有梭形细胞癌分化的非小细胞肺癌患者检测出MET基因第14号外显子剪接突变。结论应用2015版的WHO肺肿瘤分类对肺的小活检标本新的诊断标准可以更好地诊断肺穿刺活检标本,以期更精准地指导治疗,改善预后。
- 方芳方芳乔旭柏杨丽邸婧胡松涛刘东戈
- 关键词：肺肿瘤基因融合
- 液体活检技术检测肺腺癌患者脑脊液表皮生长因子受体基因突变的研究被引量：2
- 2019年
- 目的通过建立液体活检技术检测肺腺癌脑脊液标本(CSF)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测流程,研究肺腺癌脑转移患者EGFR基因突变检测模式并分析检测结果在临床治疗中的可能价值。方法回顾性研究,收集26例携带EGFR基因敏感突变(L858R突变和19号外显子缺失突变)肺腺癌患者CSF标本,肺腺癌患者均经一代EGFR小分子抑制剂(EGFR-TKIs)治疗后进展,影像学提示脑转移。同时收集5例临床和病理细胞学证实为非肿瘤患者CSF标本。应用本研究建立的CSF标本液体活检检测流程对无细胞上清标本进行EGFR基因突变检测。结果80.8%(21/26)肺腺癌患者CSF无细胞上清标本检测到EGFR敏感突变,13例(61.9%)21号外显子L858R位点突变,8例(38.1%)19号外显子缺失突变。所有CSF无细胞上清标本均未检测出T790M位点突变。5例非肿瘤患者CSF标本均未检测出EGFR基因突变。结论应用本研究建立的液体活检检测流程可完成CSF无细胞上清标本EGFR基因突变检测,且检测灵敏度和特异性较高。可能由于一代EGFRTKIs药物特点,耐药后脑转移CSF标本中T790M检出率低,CSF标本检测T790M位点突变在指导临床应用三代EGFRTKIs治疗方面价值有限。
- 杜俊邸婧杨丽刘畅何磊刘冬戈王征
- 关键词：肺肿瘤肿瘤转移DNA突变分析
