宋革
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 马铃薯Y病毒单克隆抗体的制备及其检测应用被引量：11
- 2016年
- 马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是危害农作物的重要病毒之一,在全球广泛传播并造成了严重的经济损失,而建立特异、灵敏的检测技术是防控PVY的关键。本研究以提纯PVYN病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术获得4株能分泌PVY单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3B2、3E4、20B2和25C2),杂交瘤细胞分泌的腹水单抗的效价在10^(-6)~10^(-7)之间,Western blot分析发现3B2、3E4和20B2这3株单抗仅与感染PVY的叶片中1条分子质量约为30ku的蛋白有特异性反应。该蛋白的分子质量与PVY的外壳蛋白亚基大小相符,推测制备的这3个单抗能识别PVY的外壳蛋白亚基,而25C2单抗与感染PVY的病叶组织中约55ku的蛋白有特异性反应。进而以制备的单抗为核心建立了检测植株中PVY的ACP-ELISA、dot-ELISA、tissue blot-ELISA和IC-RTPCR这4种血清学方法。特异性分析结果表明,这4种血清学方法检测感染PVY的样品呈阳性反应,而检测健康的烟草和马铃薯及感染马铃薯S病毒、马铃薯X病毒、马铃薯卷叶病毒、马铃薯A病毒的样品呈阴性反应;灵敏度分析结果表明,ACP-ELISA和dot-ELISA检测马铃薯病叶的灵敏度分别达1∶81 920倍和1∶10 240倍稀释(g/mL),而具有最高检测灵敏度的IC-RT-PCR方法在感病植物组织稀释到1∶5 242 880倍(g/mL)时仍能检测到病毒。用建立的血清学方法对2015年采自云南的30个田间马铃薯样品进行检测,结果发现其中有20样品感染PVY,且血清学方法的检测结果与RT-PCR结果一致。抗PVY特异、灵敏单抗的制备及血清学检测方法的建立,为我国作物上PVY的检测和诊断、脱毒种薯生产、抗病育种和科学防控提供了物质和技术支撑。
- 宋革郭玉双饶黎霞周雪平吴建祥
- 关键词：马铃薯Y病毒单克隆抗体DOT-ELISATISSUEIC-RT-PCR
- 西瓜花叶病毒(WMV)单克隆抗体的制备及其应用被引量：3
- 2016年
- 【目的】制备抗西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)的特异性单克隆抗体,并以其为核心建立能快速有效地检测WMV的血清学方法,从而为中国田间西瓜花叶病毒病的诊断和检测、预测预警及科学防控体系的建立提供物质和技术支撑。【方法】用提纯的WMV病毒粒子免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和细胞培养、抗体筛选和细胞克隆等杂交瘤细胞技术,获得能稳定分泌抗WMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株,将杂交瘤细胞注射入BALB/c小鼠腹腔制备其单抗腹水,并以制备的单抗为核心建立能准确、特异、灵敏地检测田间植物中WMV的ACP-ELISA、DAS-ELISA、dot-ELISA、Tissue blot-ELISA和IC-RT-PCR方法,以及能检测单头传毒介体蚜虫体内WMV的dot-ELISA方法。【结果】3株能稳定分泌WMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2C8、15A8和16C12)及其单抗腹水被制备,3株杂交瘤细胞分泌的单抗腹水的间接ELISA效价均达到了10^(-6)以上,抗体类型及亚类均为IgG1、kappa轻链。Western blot分析发现,这3个单抗均与WMV的外壳蛋白亚基有特异性反应。灵敏度分析结果表明,ACP-ELISA、DAS-ELISA、dot-ELISA和IC-RT-PCR方法检测WMV病叶的灵敏度分别达到1﹕163 840、1﹕327 680、1﹕5 120和1﹕1 310 720倍稀释(w/v,g/m L)。特异性分析结果表明,以这3个单抗为核心建立的ACP-ELISA、DAS-ELISA、dot-ELISA、Tissue blot-ELISA和IC-RT-PCR 5种血清学检测方法均能与感染WMV的病叶发生特异性免疫反应,而与感染小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)的植物样品、健康白南瓜、西瓜、葫芦和烟草的植物组织均呈阴性反应,且dot-ELISA方法还能特异性地检测单头蚜虫体内的WMV,而在检测无毒蚜虫时呈阴性反应。利用建立的血清学检测方法对采自浙江省、
- 陈浙宋革周雪平吴建祥
- 关键词：单克隆抗体DAS-ELISADOT-ELISAIC-RT-PCR
