刘雪
- 作品数：5 被引量：0H指数：0
- 供职机构：北京工业大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 负载Ad5-HIVgag/env的DC疫苗在小鼠体内的免疫原性研究
- 2016年
- 目的 用Ad5-HIV gag/env负载小鼠树突状细胞（Dendritic cell,DC）,探索其在小鼠体内诱导的HIV Gag/Env特异性细胞免疫应答.方法 贴壁法分离纯化BALB/c小鼠DCs,并用细胞因子诱导DC细胞成熟,采用流式细胞术鉴定其纯度.利用重组腺病毒Ad5-HIV gag/env感染DC细胞,制备DC疫苗.用所制备DC疫苗免疫小鼠,在免疫后的不同时间点,用ELISPOT方法检测小鼠体内HIV特异性细胞免疫应答水平.结果 成功培养出Ad5-HIVgag/env负载的DC疫苗;免疫荧光以及流式细胞术检测到Gag/Env抗原可在DC内有效表达;上述DC疫苗免疫小鼠后能诱导高水平HIV特异性细胞免疫反应.结论 Ad5-HIV gag/env负载的树突状细胞疫苗可以在小鼠体内诱导较强的HIV特异性细胞免疫反应.
- 刘超何小周刘雪徐柯曾毅冯霞
- 关键词：树突状细胞疫苗HIV-1HIV-1
- HIV-1特异性单抗2G12单价抗体的构建及活性分析
- 2015年
- 目的构建单价抗体并与IgG比较结合活性及中和活性的差异。方法对IgG1抗体重链恒定区基因进行改造,分别构建N端截短型的IgG1重链恒定区基因IgG1-tH和去除绞链区二硫键及CH2、CH3区的稳定非共价键的2G12重链基因2G12-HM。将IgG1-tH与2G12抗体重链和轻链基因表达质粒共转染293T细胞,表达含有完整Fc的单价抗体;将2G12-HM和轻链基因表达质粒共转染293T细胞,表达半分子型的单价抗体。通过非还原SDS-PAGE对表达抗体的大小进行鉴定,并用ELISA和微量中和实验比较原型2G12抗体和单价抗体的结合活性及中和活性。结果以HIV-1中和抗体2G12为模型通过基因改造成功表达了两种单价抗体,一种为完整的重链、轻链以及N端截短型的重链分子组成的包含1个Fab和1个Fc的单价抗体2G12-tH;另一种为1条重链和1条轻链组成的半分子型单价抗体2G12-HM。两种抗体均可与抗原有效结合,且与IgG分子相比差异无统计学意义。中和实验结果发现IgG抗体能中和的,病毒两种单价抗体也均能中和。结论成功构建了两种单价抗体,与IgG相比其结合活性和中和活性无明显变化。
- 冯一帆刘雪徐柯冯霞曾毅余双庆
- 关键词：人类免疫缺陷病毒中和活性
- HIV-1单价抗体的构建与活性分析
- 引言：近年来，一些具有广谱中和活性的HIV 单抗的发现及其相应抗原表位的阐明，给HIV 中和抗体疫苗的研究带来了新的希望。由于HIV 病毒的高度变异性，只用一种抗体作用病毒，病毒很容易发生逃逸，因而达不到理想的治疗效果，...
- 刘雪余双庆冯霞徐柯曾毅
- 从人类免疫缺陷病毒1型感染者中筛选中和抗体的研究
- 2016年
- 目的利用B细胞培养和RT-PCR技术从我国人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者中筛选出具有广谱中和活性的人单克隆抗体。方法本研究采集HIV-1感染者抗凝全血,分离出外周血单个核细胞,用磁珠分选纯化记忆性B细胞,在体外选择3T3-hCD40L作为饲养细胞,并使用细胞因子白细胞介素(IL)-2和IL-21诱导记忆性B细胞分泌IgG,用HIV假病毒微量中和的方法进行筛选。从有中和活性的孔中分别扩增出B细胞IgG的轻链和重链基因,并将其克隆到含IgG恒定区基因的载体上。然后将携带重链和轻链基因的质粒进行大量表达,得到人单克隆抗体,并进行抗体结合活性、中和活性及与抗原Gp120亲和力的鉴定。结果从我国3例HIV-1感染者记忆性B细胞中筛选出3株对HIV-1Env抗原有结合活性的单克隆抗体。其中8E7和55B3主要与Gp120结合,19GF3与Gp120和FLSC均可结合且结合活性无明显差异;基因变异大的8E7抗体对A、B、C三种亚型的假病毒均有一定的中和活性,55B3对SF162有中和活性,19GF3未检测到中和活性;这三种单抗的亲和力都很强,8E7、19GF3、55B3与抗原Gp120的KD值分别为6.45×10^(-10) mol/L、1.12×10^(-10) mol/L、2.76×10^(-10) mol/L。结论成功建立了在96孔板中高效刺激人B细胞在体外分泌IgG的方法,并利用HIV假病毒微量中和实验和RT-PCR技术筛选得到对HIV-1具有中和活性的人单克隆抗体。
- 刘雪王琬玓冯霞徐柯余双庆曾毅
- 关键词：结合活性中和活性
- HIV-1中和抗体的筛选与单价抗体的研究
- 广谱中和抗体就是能够中和一种病毒的很多不同毒株的抗体，在预防和治疗病毒感染中起到非常重要的作用，成为预防HIV的第一道防线。因此寻找具有广谱中和活性的单克隆抗体一直是HIV-1治疗和疫苗研究的一个重要方向。近年来随着B细...
- 刘雪
- 关键词：人类免疫缺陷病毒感染单克隆抗体中和活性
