余双庆
- 作品数：39 被引量：51H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金中国综合性艾滋病研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 表达HIV-1 gag和env基因的多载体疫苗在动物体内免疫原性研究
- 艾滋病对人类医学提出了空前的挑战,在过去20多年里,科学家已经做了大量尝试来研究预防性疫苗,但还没有任何一个临床方案获得成功。随着对HIV感染的深入研究以及免疫学的发展,有越来越多的研究表明细胞免疫应答尤其是Gag特异性...
- 余双庆
- 关键词：HIV-1B亚型疫苗
- 含HIV-1 gp120基因的重组腺相关病毒和重组腺病毒疫苗联合免疫的研究被引量：3
- 2004年
- 目的 探讨含HIV 1gp12 0基因的重组腺相关病毒 (rAAV)和重组腺病毒 (rAdV)疫苗在BALB c小鼠中联合免疫的效果。方法 将密码子优化的HIV 1gp12 0基因分别插入腺相关病毒(AAV)和腺病毒 (AdV)载体质粒 ,构建含该基因的rAVV和rAdV载体疫苗。将两种疫苗以不同的联合方式免疫BALB c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中的gp12 0特异性抗体 ,细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)应答。结果 两种重组病毒均可表达目的基因gp12 0 ;在小鼠体内两种重组病毒联合免疫可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应 ,但用rAAV初免 2次 ,再用rAdV加强 3次所诱发的CTL和血清IgG反应最强。
- 冯霞余双庆陈国敏吴小兵左建民董温平周玲曾毅
- 关键词：GP120联合免疫HIV-1重组腺相关病毒载体疫苗抗体反应
- 表达HIV-1 B亚型env基因的质粒DNA及腺病毒载体疫苗的免疫原性研究被引量：4
- 2010年
- 目的 构建表达中国B亚型HIV-1流行株env基因的DNA及重组腺病毒载体疫苗,将其用于预防或治疗HIV感染.方法 构建质粒DNA疫苗pVR-gp160及重组腺病毒载体疫苗rAdV-gp160.将这两种疫苗以不同的方式免疫BALB/c小鼠,分别采用ELISPOT方法 和ELISA方法 检测免疫小鼠中HIV-1 Gp120特异性细胞免疫反应及抗体反应.结果 DNA疫苗单独免疫及DNA疫苗初免/腺病毒疫苗加强免疫的联合免疫方案皆可诱导较高水平的Gp120特异性细胞免疫反应;而在体液免疫方面,各实验组产生的Gp120特异性抗体水平都较低.结论 所构建的DNA疫苗及rAdV疫苗能有效表达Gp160蛋白,并可有效激活机体的细胞免疫反应.
- 杨海儒张凌斐冯霞余双庆庄著伦李红霞曾毅
- 关键词：艾滋病疫苗腺病毒科
- Ad5F35-LMP2重组腺病毒免疫效果的研究被引量：2
- 2007年
- 目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2），免疫恒河猴的特异性细胞和体液免疫的效果。方法分别使用高剂量（1．5×10^10TCID50/只）、中剂量（1．5×10^9TCID50/只）、低剂量（1．5×10^8TCID50/只）Ad5F35-LMP2重组腺病毒，同时设对照组（PBS4．0 ml／只）。肌内注射免疫恒河猴，每个月一次，共免疫3次，第0、4、8、12周时使用Elispot方法检测猴外周血EBV—LMP2细胞毒性T细胞应答，同时应用免疫酶方法检测血清中LMP2抗体。结果3个剂量Ad5F35-LMP2腺病毒免疫恒河猴均可以诱导出有效的细胞免疫应答及一定的抗体应答，免疫应答水平的高低与病毒剂量的高低有一定的关系，较高剂量产生的细胞及体液免疫应答水平比低剂量的高。结论Ad5F35-LMP2非复制型重组腺病毒疫苗可以有效的诱导恒河猴产生EBV—LMP2特异性细胞和体液免疫反应。
- 莫武宁周玲吴小兵王湛唐安洲黄光武余双庆王琦叶树清杜海军曾毅
- 关键词：腺病毒疱疹病毒4型膜蛋白质类恒河猴
- 北京市人类免疫缺陷病毒-1 B亚型分子的流行特征被引量：2
- 2013年
- 目的分析北京市HIV-1B亚型的分子流行特征。方法采集北京市2006年至2010年新发现的HIV—1B亚型感染者抗凝血，反转录套式PCR扩增病毒gag基因，并进行系统进化和Entropy核苷酸多态性差异分析。结果成功扩增167份标本，其中欧美B亚型10份，B’亚型14份，中国B亚型101份。B’亚型进化簇内存存多条来自泰国和印度的序列，中国B亚型独立成簇，进化簇内无其他围家的序列。中国B亚型存在4个业簇，71．1％的病例为男男性传播。以欧美B进化簇为参照，B’亚型和中国B亚型进化簇分别存在55和94个有明显差异的核苷酸位点。结论北京市存在3种类型的HIV-1B亚型，其中1种为本土株。
- 叶景荣苏雪丽郝明强辛若雷卢红艳白立石余双庆冯霞闫红贺雄曾毅
- 关键词：HIV-1逆转录聚合酶链反应
- 表达HIV-1CRF01_AE gp145的rMV MVA疫苗构建及免疫原性评价被引量：1
- 2015年
- 目的 构建携带密码子优化型HIV-1 CRF01_AE gp145基因的重组改良型痘苗病毒安卡拉株（MVA）载体疫苗,并对其免疫效果进行初步评价.方法 利用前期研究获得并改造的HIV-1CRF01_AE env共享基因,去除其胞内区序列得到gp145基因,将此基因克隆至重组MVA载体系统的穿梭质粒pSC11上,以穿梭质粒转染提前感染了野生型MVA病毒的BHK-21细胞,通过同源重组获得携带gp145基因的重组MVA疫苗,即rMVA-AEgp145.经鉴定证实重组MVA疫苗可表达Gp145蛋白后,在BALB/c小鼠中进行rMVA-AEgp145疫苗单独免疫的效果评价.结果 重组MVA疫苗可有效表达Gp145蛋白,单独免疫BALB/c小鼠能诱导较高水平的细胞免疫反应.结论 成功构建了表达HIV-1 CRF 01_AEgp145基因的重组MVA疫苗,在小鼠体内单独免疫可以诱导较强的env特异性CTL应答。
- 湛倩倩陈丹瑛叶景荣余双庆徐柯曾毅冯霞
- 关键词：艾滋病疫苗
- HIV-1B/C重组型外膜蛋白env基因序列分析及表型预测
- 2014年
- 目的 克隆并分析HIV-1B/C重组型外膜蛋白env基因序列,根据其氨基酸序列进行表型预测,为疫苗的抗原设计奠定基础.方法 采集北京地区HIV-1 B/C重组型的抗凝全血标本,分离血浆和提取基因组DNA,采用巢式PCR方法扩增rev-env基因,对扩增产物进行序列测定.根据核苷酸序列推导出相应的氨基酸序列,并对重要的Env功能结构域进行深入的分析和比较.结果 从12例B/C重组型HIV-1感染者中成功克隆到7个rev-env基因,序列分析发现其中6个有完整的开放读码框（ORF）,全部为CRF_07B/C重组型.6个Env蛋白氨基酸N糖基化位点和数目没有显著变化;CD4受体结合位点高度保守;根据V3环氨基酸序列及静电荷数目预测全部使用CCR5辅助受体;GP120/GP41剪切位点高度保守,预测所有GP160前体都能有效剪切;对几个已知中和抗体的中和位点分析推测全部的6个序列都对2G12、2F5中和不敏感;对4E10、PG9及PG16中和敏感.结论 有必要进一步阐明env基因型与相关功能的关系,这将为疫苗和药物研究提供依据.
- 汪孟冉陈丹瑛何小周叶景荣余双庆徐柯曾毅冯霞
- 关键词：HIV-1
- HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因改造及其重组DNA疫苗的构建被引量：4
- 2014年
- 目的 构建表达含有密码子优化的HIV-1 CRF01_AE亚型env基因的DNA疫苗,为多载体艾滋病治疗性疫苗的应用提供候选疫苗.方法 对HIV-1感染者血液样本进行型别分析,分型得到的AE亚型标本采用亚型特异性引物克隆env基因,通过序列比对获得其共有序列,对该序列按照哺乳动物密码子使用的偏嗜性进行优化,将人工合成的优化基因克隆至pVR载体,构建DNA疫苗.通过Western Blot方法比较优化前后env基因的表达.结果 成功获得32条具有完整的开放性阅读框的env克隆,型别分析确认均为CRF01_AE亚型.成功对其共有序列进行了优化、合成并构建了DNA疫苗pVR-mod.AE env,该疫苗与野生型的env基因（wt.AE env）相比可以高水平表达env基因,且不依赖Rev的存在.结论 对HIV-1中国流行株CRF01_AE env基因的优化改造及重组DNA疫苗的构建是成功的.
- 陈丹瑛汪孟冉何小周叶景荣余双庆李秦剑徐柯曾毅冯霞
- 关键词：艾滋病疫苗密码子
- HIV11C亚型Gp120蛋白表达、纯化及其抗体制备的研究
- 2009年
- 目的制备HIV-1C亚型Gp120蛋白及其抗体。方法用PCR技术从表达C亚型HIV-1全长gp160基因的质粒上扩增gp120基因羧基末端部分片段，其长度为612个核苷酸，编码204个氨基酸。将测序鉴定正确的gP120基因片段克隆到原核表达载体pET-30a上，以包涵体的形式在大肠埃希菌B121（DE3）中高效表达，Gp120蛋白c端融合6×His标签便于纯化。将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔制备C亚型Gp120特异性兔多克隆抗体，用间接ELISA法测定抗体滴度，并用WesternBlot方法验证该抗体是否可识别在哺乳动物细胞内表达的C亚型Gp160蛋白。结果成功地获得高纯度的C亚型Gp120融合蛋白，用其制备的多克隆抗体滴度可达1：204800，该抗体可特异性识别在COS-1细胞中瞬时表达的C亚型Gp160蛋白。结论获得了高纯度的C亚型Gp120融合蛋白及其高效价的抗体。
- 杨海儒冯霞余双庆张晓光张晓梅陈国敏李泽琳曾毅
- 关键词：HIV病毒包膜蛋白质类抗体病毒
- 北京市HIV-1 B’／C重组型分子流行特征分析被引量：2
- 2013年
- 目的分析北京市HIV-1B’／C重组型毒株的分子流行特征。方法采集北京市2006-2010年新发现B’／C重组型HIV-1感染者的抗凝全血标本，分离血浆和提取病毒RNA，用反转录／巢式聚合酶链式反应扩增病毒gag基因，并进行系统进化分析。结果成功扩增了159例标本，CRF07-BC147例，CRF08-BC12例，CRF07-BC系统进化树中存在3个主要的亚簇，IDU-Max亚簇包含89例样本，静脉吸毒传播占71．9％，同参考株97CN001组间离散率为2．8％；IDU-Min亚簇包含22例样本，静脉吸毒传播占77．3％，组间离散率为2．8％；MSM亚簇包含34例样本，男男同性传播占67．6％，组间离散率为3．1％；3个亚簇内均无其他国家的序列，只有IDU—Max亚簇包含1条来自中国台湾的序列；核苷酸多态性分析结果显示，以IDU．Max亚簇为参照，IDU．Min和MSM亚簇分别有32和41个位点的核苷酸组成存在著性差异。结论首次观察到北京市流行的CRF07-BC病毒株中存在3个独立的亚簇，异性传播和静脉吸毒传播序列混杂分布，而男同传播病例则聚集成1个亚簇，应当继续对B’／C重组型分子流行特征进行监测。
- 叶景荣董晓根卢红艳郝明强苏雪丽辛若雷余双庆冯霞闫红贺雄曾毅
- 关键词：HIV分子流行病学
