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HIV结构蛋白p24与三基序蛋白22胞内定位及出胞研究被引量：1: 2016年; 比较p24-DsRed1、p24-DsRed2、p24-DsRed-Monomer三种荧光蛋白的表达强弱,观察p24-DsRed1与TRIM22-EGFP结合物在细胞中的分布特点。构建pDsRed1-N1-p24及pDsRed2-N1-p24真核表达载体,转染HEK293T细胞,经荧光显微镜比较三种p24-DsRed荧光偶联蛋白的表达强度。选择荧光强度最强的pDsRed1-N1-p24与pEGFP-N3-TRIM22共转染HEK293T细胞,荧光显微镜观察两者结合物在细胞中的分布特点。结果显示,经荧光显微镜检测,转染48h后红色荧光蛋白强度由大到小依次为p24-DsRed1、p24-DsRed2、p24-DsRedm。在HEK293T细胞中共转染p24-DsRed1和TRIM22-EGFP,发现两者存在共定位关系,有意思的是两者的结合体能以出胞形式脱离细胞。结果表明,p24-DsRed1荧光蛋白强度显著高于p24-DsRed2和p24-DsRedm,TRIM22-p24结合物能以出芽形式脱离细胞。; 孙大康宋向芹安新业程艳丽; 关键词：DSRED 出芽

pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体的构建及在HEK293T细胞中的表达被引量：2: 2015年; 目的构建pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体,观察其在293T细胞中的表达特点。方法用RT-PCR法扩增出TRIM22基因编码序列,克隆至真核表达载体pEGFP-N3,通过菌落PCR、双酶切及测序进行鉴定。将pEGFP-N3-TRIM22载体转染293T细胞,通过流式细胞仪、荧光显微镜观察TRIM22-EGFP的表达;通过激光共聚焦,经Lyso Tracker Deep Red及DAPI分别染色溶酶体及细胞核,观察TRIM22-EGFP在293T细胞的分布特点。结果经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,成功构建pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体。流式细胞仪检测发现,转染细胞中TRIM22-EGFP+细胞约70%左右。荧光显微镜检测发现,TRIM22-EGFP在293T细胞中能以弥散、小斑点或大颗粒团块3种形式存在。激光共聚焦检测发现,在不同的293T细胞中TRIM22-EGFP可分别优势表达于细胞核、细胞浆,或者在胞核及胞浆均有大量表达。结论 TRIM22-EGFP能以弥散、小斑点或大颗粒团块形式分布于细胞核或细胞浆中。; 安新业程艳丽孙大康孟玮李彩玉; 关键词：真核表达载体

三基序蛋白34(TRIM34)与微核染色体共定位并阻碍染色体在有丝分裂中期向赤道板的移动被引量：3: 2016年; 目的观察三基序蛋白34（TRIM34）与微核是否存在共定位关系,及对微核染色体在有丝分裂时移动的影响。方法构建并鉴定TRIM34-p EGFP-N3真核表达载体,转染TRIM34-p EGFP-N3载体至HEK293T细胞,经4’,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色,用荧光显微镜观察TRIM34与微核间是否存在共定位关系。通过激光共聚焦显微镜技术结合Mito TrackerDeep Red线粒体示踪剂,进一步明确TRIM34、微核与线粒体间的位置关系。观察TRIM34-微核结合体在HEK293T细胞有丝分裂中期与赤道板的位置关系。结果经测序鉴定,成功构建TRIM34-p EGFP-N3真核表达载体。TRIM34-p EGFP-N3载体转染HEK293T细胞后,通过荧光显微镜发现TRIM34与微核可能存在共定位关系。经激光共聚焦显微镜技术进行后续检测发现,存在共定位关系的TRIM34小体与微核间在外形上较一致。TRIM34-微核结合体与线粒体未见明显的共定位关系。在有丝分裂中期,结合TRIM34的微核染色体不能移动至赤道板。结论 TRIM34可以结合微核染色体,阻碍后者在有丝分裂中期向赤道板的移动。; 孙大康安新业纪冰程艳丽高洪莲田明明; 关键词：微核

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程艳丽