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pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体的构建及在HEK293T细胞中的表达被引量：2: 2015年; 目的构建pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体,观察其在293T细胞中的表达特点。方法用RT-PCR法扩增出TRIM22基因编码序列,克隆至真核表达载体pEGFP-N3,通过菌落PCR、双酶切及测序进行鉴定。将pEGFP-N3-TRIM22载体转染293T细胞,通过流式细胞仪、荧光显微镜观察TRIM22-EGFP的表达;通过激光共聚焦,经Lyso Tracker Deep Red及DAPI分别染色溶酶体及细胞核,观察TRIM22-EGFP在293T细胞的分布特点。结果经菌落PCR、双酶切及测序鉴定,成功构建pEGFP-N3-TRIM22真核表达载体。流式细胞仪检测发现,转染细胞中TRIM22-EGFP+细胞约70%左右。荧光显微镜检测发现,TRIM22-EGFP在293T细胞中能以弥散、小斑点或大颗粒团块3种形式存在。激光共聚焦检测发现,在不同的293T细胞中TRIM22-EGFP可分别优势表达于细胞核、细胞浆,或者在胞核及胞浆均有大量表达。结论 TRIM22-EGFP能以弥散、小斑点或大颗粒团块形式分布于细胞核或细胞浆中。; 安新业程艳丽孙大康孟玮李彩玉; 关键词：真核表达载体

Trim22对脂多糖诱导的巨噬样细胞促炎细胞因子的负向调节作用被引量：2: 2011年; 目的:构建人Trim22的重组逆转录病毒载体,观察过表达Trim22对脂多糖(LPS)诱导的巨噬样细胞促炎细胞因子产生的影响。方法:经PCR法扩增,把Trim22克隆入逆转录病毒载体MSCV2.2 IRES-GFP(MSCV),并对重组载体进行菌落PCR、双酶切及测序鉴定。用Lipofectamine将MSCV、GAG-POL、VSV-G载体共转染至293T包装细胞。用病毒上清感染U937细胞,通过流式细胞仪分选GFP阳性细胞。用佛波酯诱导U937细胞分化为巨噬样细胞,LPS刺激后观察过表达Trim22对促炎细胞因子表达的影响。结果:经测序等鉴定,成功构建MSCV-Trim22逆转录病毒表达载体。病毒上清感染U937细胞后,经流式细胞仪分选获得稳定表达Trim22的U937细胞。LPS刺激巨噬样细胞后,Trim22过表达组TNFα和IL6的表达水平显著小于对照组(P<0.05)。结论:成功构建人Trim22的逆转录病毒表达载体,Trim22能抑制LPS诱导的巨噬样细胞TNFα和IL6的产生。; 孙大康安新业周晓生李勐薛艳; 关键词：逆转录病毒载体促炎细胞因子

Trim6结合并降解接头蛋白TAB2抑制NF-κB活化被引量：1: 2012年; 观察Trim6是否与接头蛋白TAB2存在蛋白相互作用,进而影响TAB2介导的NF-κB荧光素酶报告基因的活化。在HEK293T细胞中共转染Trim6及TAB2的真核表达载体,免疫共沉淀法验证两者是否存在蛋白相互作用;用蛋白印迹法验证Trim6是否能降解TAB2;同时用双荧光素酶报告基因系统检测Trim6是否影响TAB2介导的NF-κB荧光素酶报告基因活化。免疫共沉淀结果证明Trim6与TAB2存在蛋白相互作用;蛋白印迹检测发现Trim6能显著降解TAB2,进而明显抑制TAB2介导的NFκB荧光素酶报告基因的活化。; 孙大康安新业周荣佼赵延婷宋向芹; 关键词：蛋白相互作用

Trim6真核表达载体的构建及表达: 2011年; 目的:构建人Trim6的真核表达载体pcDNA3.1(+)-Trim6,并观察其在HEK293T细胞中的表达。方法:提取HeLa细胞总RNA,用RT-PCR方法扩增出Trim6编码区全长基因片段,克隆到pcDNA3.1(+),通过酶切、菌落PCR及测序进行鉴定。将该载体转染HEK293T细胞,用蛋白印迹检测Trim6蛋白的表达。结果:通过酶切、PCR及测序鉴定,成功构建人Trim6表达载体,该载体可以在HEK293T细胞细胞系中表达Trim6。结论:构建Trim6真核表达载体pcDNA3.1(+)-Trim6,为研究Trim6在固有免疫应答中的作用奠定了基础。; 孙大康安新业胡凤爱李彩玉郑静; 关键词：真核表达载体

ERα受体基因多态性与女性原发性急性闭角型青光眼的相关研究: 2013年; 目的探讨雌激素受体α(estrogen receptor α,ERα)基因多态性与女性原发性急性闭角型青光眼(acute primary angle-closure glaucoma,APACG)之间的相关性。方法采集113例女性APACG患者(APACG组)和96例年龄匹配的正常女性(对照组)静脉血,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,检测受试对象ERα基因PvuⅡ和XbaⅠ基因多态性的分布情况;分析PvuⅡ和XbaⅠ基因多态性与女性APACG发病之间的相关关系。结果所选研究对象基因型分布频率符合Handy-Weinberg平衡定律。APACG组ERα基因XbaⅠXX基因型频率为1.8%,而对照组为9.4%,两组之间XbaⅠ酶切位点多态性差异具有统计学意义(χ2=8.910,P=0.012),两组之间X等位基因频率分别为19.0%和30.7%,相对于x等位基因,暴露于X等位基因的OR值为0.530(OR=0.530,95%CI:0.337～0.832)。PvuⅡ多态性的分布差异无统计学意义(χ2=0.200,P=0.905)。结论 ERα基因XbaⅠ酶切多态性与女性APACG发病之间具有相关性,且X等位基因有可能是其保护性因素。; 刘佳张磊孙风梅王强孙大康王康郑静; 关键词：闭角型青光眼雌激素受体Α 基因型多态性

Trim22缺失突变体真核表达载体的构建被引量：1: 2011年; 目的构建Trim22缺失突变体的真核表达载体,为进一步研究Trim22与HIV-1衣壳蛋白的相互作用奠定基础。方法以野生型Trim22真核表达质粒为模板,用PCR方法扩增出5种类型Trim22缺失突变体的基因片段,克隆到5`-Flag-pcDNA3.1(+)真核表达载体,通过酶切、菌落PCR及测序进行鉴定。将该载体转染HEK293T细胞,用蛋白印迹及免疫沉淀检测Trim22缺失突变体的蛋白表达。结果通过酶切、PCR及测序鉴定,成功构建5种人Trim22缺失突变体的表达载体,载体均可以在HEK293T细胞中表达。结论成功构建5种人Trim22缺失突变体的真核表达载体,为探寻Trim22与HIV-1衣壳蛋白相互作用的关键结构域奠定了基础。; 孙大康宿振国安新业周荣佼刘永云; 关键词：缺失突变体艾滋病病毒

黄河三角洲地区男性不育患者Y染色体AZF基因微缺失的研究被引量：1: 2019年; 目的了解黄河三角洲地区无精子症及严重少精子症患者Y染色体精子生成基因(AZF)区微缺失的情况,探讨Y染色体微缺失与男性不育的关系。方法采用PCR-荧光探针法对408例男性患者行Y染色体AZF区相关序列标签位点检测。结果 328例男性不育患者中检出Y染色体AZF微缺失26例,缺失率为7.93%;无精症患者缺失率为14.75%;严重少精症患者缺失率为3.88%;最常见缺失类型为仅AZFc缺失,占38.46%。结论 Y染色体微缺失检测可作为男性不育的重要诊断指标,AZFc区为黄河三角洲地区Y染色体最常见的缺失区域,sY254+sY255为最常见的缺失模式。; 田明明高洪莲孙大康孟玮; 关键词：Y染色体微缺失男性不育

游泳运动诱导的自噬激活对动脉粥样硬化形成的影响被引量：3: 2020年; 目的:探讨游泳运动诱导的动脉血管壁自噬激活对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响。方法:选取8周龄雄性C57BL小鼠(20只)作为对照组(普通饮食+自由活动),40只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(高脂饮食+自由活动,n=20)、实验组(高脂饮食+游泳运动,n=20),给予模型组及实验组高脂饲料喂养12周。实验组进行为期12周的游泳运动,定期监测小鼠体重变化情况。于末次运动结束并禁食12小时后处死小鼠,采集血液及主动脉标本。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、白细胞介素6(IL-6)的浓度;组织化学染色法检测小鼠主动脉斑块面积;免疫组织化学(IHC)、Western-Blot和Real-Time PCR检测主动脉管壁自噬相关基因Beclin-1、LC3表达水平。结果:高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠12周成功建立AS模型。与对照组相比,模型组小鼠体重显著增加,血清TC、TG、sICAM-1、MMP-9、IL-6浓度显著升高,动脉粥样硬化斑块面积显著增大,小鼠主动脉血管壁自噬相关基因Beclin-1、LC3在蛋白及mRNA水平表达降低(P<0.01)。与模型组相比,实验组小鼠体重有所下降,血清TC、TG、sICAM-1、MMP-9、IL-6浓度均有不同程度降低,动脉粥样硬化斑块面积显著减小,自噬相关基因Beclin-1、LC3在蛋白及mRNA水平表达显著升高(P<0.01)。结论:游泳运动可以降低小鼠血脂及相关炎性因子水平,有效抑制动脉粥样硬化斑块的形成,其抗AS作用可能与运动上调小鼠主动脉血管壁自噬活性有关。; 李洋孙大康郑园园程艳丽; 关键词：动脉粥样硬化自噬 APOE-/-小鼠

有氧运动对ApoE^(-/-)小鼠生物钟基因Cry1表达的影响及其抗动脉粥样硬化机制: 2023年; 目的观察有氧运动对ApoE^(-/-)小鼠主动脉生物钟基因Cry1表达的影响并探讨其发挥抗动脉粥样硬化作用的机制。方法研究实施时间:2022年3月至2022年11月。22只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠随机分成模型组(11只)和运动组(11只),运动组进行12周的跑台运动,每2周对小鼠称重并记录体质量变化情况。比色法测定血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的浓度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度;组织化学染色法观察主动脉组织斑块形成及脂质沉积程度;real-time PCR和免疫组织化学染色检测主动脉管壁Cry1基因表达情况。采用独立样本t检验或单因素方差分析。结果与模型组相比,运动组小鼠的体质量降低(P<0.01),血清LDL-C、TC、TG、IL-1β、IL-6、TNF-α含量下降(均P<0.01),HDL-C含量升高(P<0.01),主动脉斑块面积及脂质沉积情况减轻(均P<0.01),主动脉组织中Cry1基因mRNA和蛋白表达水平升高(均P<0.01)。结论有氧运动可以提高ApoE^(-/-)小鼠主动脉管壁生物钟基因Cry1的表达水平,降低血脂及相关炎性因子的浓度,并抑制动脉粥样硬化斑块的形成,提示有氧运动的抗动脉粥样硬化作用可能与其上调小鼠主动脉血管壁生物钟基因Cry1的表达有关。; 程金凤孙大康王倩倩李洋甄萌萌程艳丽; 关键词：动脉粥样硬化有氧运动动物实验

呼吸道合胞病毒毛细支气管炎患儿外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞与Th17细胞功能变化及意义被引量：38: 2012年; 目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞和Th17细胞及其分泌细胞因子IL-10、TGF-β、IL-17水平变化与RSV毛细支气管炎发病的关系。方法:收集2010-09/2011-04在滨州医学院附属医院儿科住院的33例RSV毛细支气管炎患儿、28例做为阳性对照的非RSV感染性肺炎患儿(肺炎组)及26例正常对照组的健康体检儿外周血,采用流式细胞术(FCM)检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞、Th17细胞百分率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血浆IL-10、TGF-β、IL-17的水平。结果:RSV毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞、IL-10、TGF-β水平显著低于肺炎患儿及健康体检儿(P<0.05),而Th17、IL-17水平则显著高于肺炎患儿与健康体检儿(P<0.05)。结论:RSV毛细支气管炎患儿外周血存在CD4+CD25+调节性T细胞与Th17细胞表达失衡,可能是RSV毛细支气管炎发病机制之一。; 李宾吴福玲冯学斌孙大康崔晴晴赵志旭; 关键词：毛细支气管炎 TH17 RSV

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孙大康

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