徐巧丽
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：厦门大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- clpC 基因对变异链球菌感受态形成的影响
- 2015年
- 目的：构建变异链球菌clpC缺陷突变株，检测该基因对变异链球菌感受态形成的影响。方法分别以变异链球菌UA159基因组和pIB107质粒为模板，PCR扩增clpC基因片段和卡那霉素基因盒（lox71-KMR-lox66）；将clpC基因片段插入pMD-19T simple载体，经ClaⅠ／EcoRⅠ酶切、补平后连入卡那霉素基因盒，构建clpC缺陷突变同源重组载体pCKX2；SalⅠ线性化pCKX2并转化变异链球菌，卡那霉素筛选阳性菌落；质粒pCrePA转化阳性菌株，30℃培养剔除卡那霉素基因盒；37℃培养去除pCrePA，获得clpC缺陷突变株，PCR和测序鉴定；提取细菌总RNA并逆转录成cDNA，用RT-PCR法扩增clpC缺失序列的核苷酸片段并进行产物的电泳分析；pDL276分别转化变异链球菌和clpC缺陷突变株，观察感受态细胞形成变化。结果 PCR和测序结果证实成功构建同源重组载体pCKX2及变异链球菌clpC缺陷突变株；RT-PCR结果显示，△clpC缺失的核苷酸片段PCR产物电泳结果并无相应的条带出现；clpC缺陷突变株的感受态形成期延迟并延长维持期。结论 clpC基因具有负调控变异链球菌晚期感受态细胞形成的作用。
- 徐巧丽饶慧华马晓波黄朝阳郑港森张加勤宋秀宇
- 关键词：变异链球菌感受态细胞
- 变异链球菌ClpCP蛋白酶作用机制的初步研究
- 目的： Clp蛋白酶广泛存在于各种生物体，尤其是低GC含量的革兰阳性菌中。研究发现在外界应激条件下，Clp蛋白酶可以通过重新折叠或降解的方式，对错误折叠并累积的蛋白质进行修正或者清除。研究发现，Clp蛋白酶由催化亚基和...
- 徐巧丽
- 关键词：变异链球菌感受态细胞革兰阳性菌
- 铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株的构建被引量：1
- 2015年
- 目的构建铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株。方法分别以质粒pUCGM和铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板PCR扩增庆大霉素抗性基因(GM)和铜绿假单胞菌clpP基因及其3′、5′侧翼序列,将clpP基因及其3′、5′侧翼序列克隆至pMD19T载体,EcoRV切除clpP基因37bp^453bp片段后,引入庆大霉素抗性基因,构建重组质粒pCKR2;EcoRⅠ/HindⅢ双酶切重组质粒pCKR2,回收FclpP-GM-clpPR片段,与自杀质粒pEX18Tc连接,得到clpP基因缺陷的同源重组载体pCKR3;将pCKR3质粒转化大肠埃希菌SM10,与铜绿假单胞菌PAO1双亲杂交,庆大霉素筛选得到铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株。结果经酶切鉴定同源重组载体pCKR3构建正确;PCR和DNA测序鉴定铜绿假单胞菌clpP基因缺陷株构建成功。结论本研究成功敲除了铜绿假单胞菌clpP基因,为进一步研究clpP基因的生物学功能奠定了基础。
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- 关键词：铜绿假单胞菌同源重组
- 变异链球菌ldh基因启动子的克隆及活性检测被引量：1
- 2016年
- 目的克隆变异链球菌ldh基因启动子,并验证其活性。方法以变异链球菌UA159基因组为模版,PCR扩增变异链球菌ldh基因候选启动子,将其插入β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase,gusA)报告基因表达载体pIB107 BamH I/XhoI之间,构建ldh基因启动子gusA报告载体pCKS11,PCR、酶切及测序鉴定;经ScaI酶线性化后转化变异链球菌UA159,卡那霉素筛选阳性克隆SCKS11,经PCR和测序鉴定后,检测其GusA活性。结果成功扩增出大小为269bp的ldh基因候选启动子;经PCR、酶切及测序鉴定,变异链球菌ldh基因候选启动子gusA报告基因表达载体pCKS11构建正确;PCR和测序鉴定,ldh基因候选启动子gusA报告株SCKS11构建成功;变异链球菌ldh基因候选启动子启动的GusA活性是无启动子的阴性对照的5.8倍,是阳性对照变异链球菌clpP基因启动子的0.9倍。结论成功克隆变异链球菌ldh基因启动子序列,具有较强的启动转录活性,为研究ldh基因的表达调控机制奠定基础。
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- 关键词：变异链球菌启动子
