E645R变异MXA蛋白抗HBV复制体外研究 2008年 目的研究E645R变异MXA蛋白抑制乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制活性。方法对pcDNA3.1-MXA重组质粒采用定点突变构建E645R变异MXA蛋白表达重组质粒pcDNA3.1-MXA-E645R。将pcDNA3.1-MXA(MXA组),pcDNA3.1-MXA-E645R(E645R组)和pcDNA3.1空质粒(对照组)分别与PU19-1.24HBV重组质粒按2∶1比例瞬时共转染HepG2细胞,转染3d后检测MXA蛋白表达和各组细胞上清HBsAg和HBeAg的量以及上清和细胞内HBVDNA水平。结果酶切和测序表明定点突变成功构建pcDNA3.1-MXA-E645R重组质粒;MXA、E645R转染组有较好的MXA蛋白表达。E645R组与MXA组HBsAg较对照组分别下降23%和20%(P>0.05),E645R组和MXA组HBeAg较对照组分别下降61%和66%(P<0.05)。E645R组与MXA组上清HBVDNA水平较对照组分别下降1.9个和2.2个log值,细胞内HBVDNA水平均下降1.7个log值。结论E645R变异MXA蛋白具有较好的抗HBV活性,E645R变异不影响MXA蛋白抑制HBV复制。 余治健 王战会 周元平 李晖 林占洲 侯金林关键词:MXA蛋白 HBV HBV对APOBEC3G基因表达的影响 目的利用双报告基因系统研究HBV复制子对APOBEC3G启动子的影响。方法将HBV复制~pGL3-A3G萤光素酶报告质粒共转染Huh7细胞,48小时候收集细胞检测双萤光素酶活性。随后将HBV各病毒蛋白真核表达载体与pGL... 李晖 陈金军 周彬 徐旭雯 王景玲 侯金林关键词:HBV 文献传递 HBV对APOBEC3G基因表达的影响 目的:利用双报告基因系统研究HBV复制子对APOBEC3G启动子的影响。
方法:将HBV复制子和pGL3-A3G萤光素酶报告质粒共转染Huh7细胞,48小时候收集细胞检测双萤光素酶活性。随后将HBV各病毒蛋白真... 李晖 陈金军 周彬 徐旭雯 王景玲 侯金林关键词:基因表达 基因启动子 慢性乙型肝炎 文献传递 K83A变异MxA蛋白抑制HBV复制体外研究 2008年 目的研究K83A变异MxA蛋白抑制HBV复制活性。方法将pcDNA3.1-MxA(wild-type)重组质粒(WT组)、pcDNA3.1-MxA-K83A重组质粒(K83A组)和pcDNA3.1空质粒(对照组)分别与pU19-1.24HBV重组质粒按2∶1比例瞬时共转染HepG2细胞,转染3d后western blot检测MxA蛋白表达,Abbott检测各组细胞上清HBsAg和HBeAg表达,定量PCR检测上清和细胞内HBV DNA水平,统计学分析结果。结果MxA、K83A组有较好的MxA蛋白表达;与对照组相比,K83A组和MxA组上清HBeAg分别下降73%和71%(P<0.05),上清HBV DNA水平分别下降2.22lg和2.11lg(P<0.01),细胞内HBV DNA水平下降1.89lg和1.78lg(P<0.01)。结论K83A变异不影响MxA蛋白抑制HBV复制活性。 余治健 彭劼 李晖 王战会 周元平 林占洲 侯金林关键词:乙肝病毒 转染 微波消融治疗小肝癌的效果分析 被引量:4 2021年 目的探讨微波消融治疗早期小肝癌(≤3 cm)的临床效果。方法回顾性搜集2016年11月至2018年11月行微波消融治疗的103例小肝癌(肿瘤数目不超过3个, 肿瘤最大直径不超过3 cm)患者, 观察手术后病灶残留率、术后1年复发率和手术并发症。按肿瘤大小分为< 2 cm和≥2 cm组, 按肿瘤数目分为单个和2~3个病灶组, 对比分析各组治疗效果。结果小肝癌微波消融治疗术后肿瘤残留率、1年复发率分别为11.7%、35.0%, 消融后综合征发生率为52.4%, 无严重不良事件发生。对比< 2 cm肿瘤, ≥2 cm患者术后残留率更高(χ2 = 7.651, P = 0.006), 单个肿瘤的1年复发率较多结节肿瘤更低(χ2 = 10.125, P = 0.001)。结论微波消融是早期小肝癌安全有效的治疗方法, 对单发小结节(< 2 cm)肿瘤效果更好。 程笑 黄静 李文飞 钟涛 蔡丽娟 李晖 郭亚兵 陈锦章关键词:肝细胞癌 疗效 微波消融 中国肝静脉压力梯度临床应用现状:一项基于CHESS-HVPG协作组的调研分析 被引量:3 2022年 目的肝静脉压力梯度(HVPG)应用现状调查研究对了解此项技术在国内应用真实情况及未来发展至关重要。方法全面调查了国内开展HVPG技术的基本情况,包括该技术的医院分布、医院级别、全年例数、所用导管、平均费用、适应证、存在问题等。结果经调查,2021年我国开展HVPG技术的医院有70家,分布在28个省(自治区、直辖市)。所有调研医院2021年度共计开展HVPG4398例,其中单独HVPG检测2291例(52.1%)。HVPG平均检测费用(5617.2±2079.4)元。其中,96.3%团队使用球囊闭塞法完成HVPG检测,且绝大多数团队使用取栓球囊导管(80.3%)。结论本次调研明确了国内HVPG的临床应用现状,证实了国内多家医疗机构已经熟练掌握此项技术,但未来仍需要继续推广和普及。 张雯 刘福全 张林鹏 丁惠国 诸葛宇征 王继涛 李雷 王广川 吴浩 李晖 曹国洪 罗薛峰 孔德润 孙林 吴伟 孙军辉 刘江涛 朱贺 李东良 郭武华 薛挥 王宇 更藏尖措 赵添 袁敏 刘士荣 宦徽 牛猛 李欣 马军 朱清亮 郭文波 张昆鹏 朱晓亮 黄必润 李佳楠 王卫东 易宏锋 张齐 高龙 张国 赵中伟 熊恺 王泽鑫 单鸿 李明省 张学强 施海彬 胡晓钢 朱康顺 张占国 姜泓 赵剑波 黄明声关键词:肝静脉压力梯度 问卷调查 新疆维吾尔族慢性乙型肝炎病毒感染者病毒基因型及亚型分布特点 被引量:2 2009年 目的了解新疆维吾尔自治区(简称新疆)维吾尔族慢性HBV感染者基因型、基因亚型分布情况及其与预后的关系。方法采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析方法,分析109例新疆维吾尔族慢性HBV感染者感染病毒的基因型及基因亚型。多标本均数比较采用单向方差分析。结果109例新疆维吾尔族慢性HBV感染者,其中慢性乙型肝炎88例,乙型肝炎肝硬化17例,肝癌4例。B基因型HBV感染者9例,占8.3%,C基因型感染者50例,占45.9%,C/D基因型重组体32例,占29.4%,D基因型感染者18例,占16.5%,C基因型、C/D基因型重组体为主要基因型。经过聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析及测序检测,鉴定9份B基因型HBV,均为Ba亚型。50例C基因型HBV感染者病毒基因亚型分布情况:Cl亚型27例,占54%,C2亚型23例,Cl亚型比C2亚型感染者多。在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝癌患者中,HBVBa基因亚型感染者分别为8例(9.1%)、1例(5.8%)和0例;C2基因亚型感染者分别为17例(19.3%)、8例(47.5%)和2例(50%);C/D基因型感染者分别为29例(33.0%)、2例(11.9%)和l例(25%),随着病情加重,Ba基因亚型和C/D基因型感染者所占比例呈下降趋势,C2基因亚型感染者所占比例增加。结论新疆地区维吾尔族慢性HBV感染者以Cl基因亚型为主,新疆维吾尔族慢性HBV感染者存在C/D基因型重组体。C2基因亚型HBV感染预示病情严重,预后差。 孙晓风 温淑娟 李晖 侯金林 张跃新 王战会 郑玉建关键词:预后 维吾尔族 利用杆状病毒系统表达重组HBV聚合酶RT区段 2009年 目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组HBV聚合酶RT区段蛋白。方法构建含有HBV P基因RT区段的杆状病毒转移载体pFastBac HT-RT,转化大肠埃希菌DH10B-ac进行重组,提取重组Bacmid DNA质粒,转染昆虫细胞Sf9获得含有HBVP基因RT区段的重组杆状病毒。重组的杆状病毒再感染Sf9细胞进行HBVP基因RT区段蛋白表达,通过Western blot检测表达情况。结果成功构建了含HBV P基因RT区段的重组杆状病毒,昆虫细胞Sf9中能检测到HBV P基因RT区段蛋白的表达。结论利用杆状病毒表达系统能成功地表达HBVP基因RT区段蛋白。 李晖 王程 余治健 耿书英 王景玲 侯金林关键词:HBV P基因 昆虫细胞 2019新型冠状病毒抗体胶体金检测方法的建立与临床性能评价 被引量:18 2020年 目的:建立2019新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)M和IgG胶体金快速检测方法,并对检测试剂进行临床性能评价。方法:收集2020年2月12日至20日分别在武汉市汉口医院和洪湖市人民医院就诊的共278例患者,根据诊断标准分成2019-nCoV核酸阳性的确诊患者89例和2019-nCoV核酸阴性的疑似患者189例。选取2015年至2018年南方医科大学南方医院的273名体检者作为对照。采集患者血清样本。采用原核表达载体获得2019-nCoV病毒重组核蛋白,利用重组核蛋白分别建立间接法IgM和IgG胶体金检测方法,以核酸反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法作为对照,对3组人群的血清标本进行2019-nCoV IgM和IgG检测,分析胶体金检测法的特异度和灵敏度。结果:采用胶体金试剂检测核酸阳性的确诊患者的2019-nCoV IgM和IgG阳性检出率分别为78.7%(70/89)和73.0%(65/89);体检者的2019-nCoV IgM和IgG阳性检出率分别为1.8%(5/273)和0.7%(2/273)。2019-nCoV IgM检测胶体金试剂的灵敏度和特异度分别为78.7%和98.2%,2019-nCoV IgG检测试剂的灵敏度和特异度分别为73.0%和99.3%,联合IgM和IgG检测的灵敏度和特异度分别为87.6%和98.2%。核酸阴性的疑似患者的2019-nCoV IgM和IgG阳性检出率分别为59.8%(113/189)和52.9%(100/189),IgM和IgG联合检测阳性检出率为66.1%(125/189)。结论:2019-nCoV抗体检测试剂(胶体金法)的特异度和灵敏度高,可作为已有的2019-nCoV核酸RT-PCR检测法的补充手段。 李晖 李咏茵 张志高 卢振 王奕 林冠峰 安泰学 胡秀梅 赖钦涛 易璇 刘智泓 翟向明 孙剑 郭亚兵 陆家韬 张小勇 吴英松 侯金林关键词:冠状病毒感染 胶体金 抗体 MXA蛋白抑制HBV复制的体外研究 被引量:2 2008年 目的研究MXA蛋白抑制HBV复制的活性。方法将pcDNA3.1-MXA重组质粒和PU19-1.24 HBV重组质粒分别按1∶1、2∶1共转染HepG2细胞(MXA组),对照组使用空pcDNA3.1、Salon DNA和PU19-1.24 HBV重组质粒共转染,3 d后Western blot检测MXA蛋白表达,Abbott法检测细胞上清HBeAg和HBsAg分泌量,定量PCR检测上清和胞内HBV DNA水平,统计学分析结果。pcDNA3.1-MXA与PU19-1.24HBV重组质粒共转染HepG2细胞,对照组为pcDNA3.1-MXA重组质粒、PU19空质粒和Salon DNA共转染,3 d后裂解细胞Western blot检测MXA蛋白表达。结果Western blot显示MXA组有MXA蛋白表达;与对照组相比,pcDNA3.1-MXA和PU19-1.24 HBV重组质粒按1∶1转染时,MXA组HBeAg下降27%,上清HBV DNA和细胞内HBV DNA分别下降1个log值和0.6个log值;按2∶1比例转染时MXA组HBeAg较对照组下降66%,上清HBV DNA和细胞内HBV DNA水平分别下降1.9个和1.7个log值,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Western blot检测显示MXA蛋白抑制HBV组与对照组MXA蛋白表达没有明显差别。结论MXA蛋白在HepG2细胞具有抑制HBV复制活性,抑制活性与蛋白的表达量相关;在抑制HBV复制过程中MXA蛋白自身可能不发生降解。 余治健 王战会 周元平 李晖 林占洲 侯金林关键词:MXA蛋白 乙型肝炎病毒