陈文静
- 作品数：13 被引量：26H指数：4
- 供职机构：温州医科大学更多>>
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- piRNA在胃癌与正常胃黏膜组织中表达的比较
- 2017年
- 目的:分析piRNA在胃癌组织与正常胃黏膜组织中表达的差异性。方法:通过新一代高通量测序技术Solexa对胃癌组织和正常胃黏膜组织进行小分子RNA(s RNA)深度测序,并通过生物信息学分析胃癌组织与正常胃黏膜组织中piRNA的表达差异。根据分析结果选取4种piRNA(登录号分别为DQ570956、DQ575659、DQ594126和DQ597128),通过茎环反转录实时定量PCR(简称茎环RT-q PCR)技术验证其存在及其在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达差异。结果:Solexa深度测序结果显示,正常胃黏膜与胃癌组织中测得的piRNA种类在各标本所测得所有s RNA种类中所占的比例差异无统计学意义(Z=0.835,P=0.678);正常胃黏膜组织中测得的piRNA数量在各标本所测得s RNA总量中所占的比例高于胃癌组织,差异有统计学意义(Z=2.167,P=0.042);根据分析结果选取4种piRNA,经茎环RT-q PCR法检测显示,这4种piRNA在胃癌组织中的表达量显著低于正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胃癌组织存在多种差异表达的piRNA,且在表达量上与正常胃黏膜组织存在显著性差异,本研究选取的4种piRNA可能参与胃癌的发生发展进程。
- 蒋佩佩蔡一奇王鹏飞陈孝冬金劲激胡畅远陈文静薛向阳张丽芳朱冠保
- 关键词：胃肿瘤PIRNA小分子RNA聚合酶链反应
- 一种涵盖全基因组的人巨细胞病毒基因PCR检测芯片
- 本发明涉及一种涵盖全基因组的人巨细胞病毒基因PCR检测芯片，其特征在于，芯片上固定了人巨细胞病毒的125个基因的正向引物(5’‑3’)和反向引物(5’‑3’)序列，其引物的序列为Seq NO.1‑Seq NO.250。本...
- 薛向阳郭刚强杨敏陈文静李宝青章慧娣沈贤
- 文献传递
- 潜伏相关抗原UL138蛋白的制备及其用于人巨细胞病毒感染血清学检测的评价被引量：4
- 2015年
- 目的:探讨基于人巨细胞病毒(HCMV)潜伏相关抗原UL138蛋白的ELISA方法用于HCMV感染血清学检测的意义。方法:生物信息学分析HCMV UL138蛋白的跨膜区结构,选择胞内区序列,经原核密码子优化后全基因合成,克隆至p ET21a(+)原核载体,将成功构建的重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),诱导蛋白表达后,SDS-PAGE及Western blot法鉴定目的蛋白表达,采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。将纯化的UL138蛋白包被ELISA板,检测173例人血清UL138特异性抗体,并与临床上使用的罗氏公司cobas 8000分析系统及配套试剂盒进行血清HCMV Ig G抗体检测比较,评价UL138蛋白作为HCMV感染血清学检测工具的效能。结果:利用原核表达系统成功表达了UL138蛋白,经镍柱亲和纯化后获得高纯度的目的蛋白;健康成人血清UL138特异性抗体的ELISA法检测结果显示,几乎所有的健康成人都存在UL138特异性抗体,与罗氏公司的化学发光(CLIA)法Ig G检测结果比较,灵敏性为100.0%,符合率为98.8%,差异无统计学意义(x2=0.5,P>0.05),而且具有较好的一致性(Kappa=0.496,P<0.001)。结论:潜伏相关抗原UL138是HCMV感染血清学检测重要候选抗原,可望为基于此蛋白的HCMV血清学检测试剂的研制提供依据。
- 陈文静黄崇安陈静郭刚强谢旺凯林刻智沈贤薛向阳
- 关键词：人巨细胞病毒血清学检测酶联免疫吸附试验
- 启动子高甲基化抑制趋化因子CXC趋化因子配体14在胃癌组织中的表达被引量：1
- 2014年
- CXC趋化因子配体14（CXCL14）作为趋化凶子CXC子家族的一员，普遍存在于人体正常组织，有提供维持机体稳态的作用，但在各类实体肿瘤中表达高低不。本研究旨在观察CXCL14在胃癌中的表达，并探讨其机制。
- 胡畅远沈贤薛向阳庞文洋陈文静张丽芳朱冠保
- 关键词：趋化因子配体胃癌组织CXC高甲基化启动子人体正常组织
- HCMV潜伏相关UL138基因重组腺病毒的构建及其对THP-1单核细胞功能的影响
- 2016年
- 目的：构建含人巨细胞病毒（ HCMV）潜伏相关 UL138基因的重组腺病毒,探讨UL138基因对THP-1单核细胞功能的影响。方法构建携带UL138基因的重组腺病毒,利用TCID50法确定重组腺病毒滴度。重组腺病毒以不同MOI比值感染THP-1细胞,通过绿色荧光蛋白表达确定感染THP-1细胞最佳MOI值；定量PCR分析UL138表达对THP-1细胞前炎症细胞因子表达变化,通过定量PCR芯片分析趋化因子及受体的表达变化。结果成功构建了携带UL138基因的重组腺病毒,TCID50法测定病毒的滴度达1x1011 PFU/ml。利用重组腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达检测THP-1细胞的感染率,结果显示,重组腺病毒以MOI=1∶100感染THP-1细胞,感染率为60%, RT-PCR和Western blot证实了THP-1细胞能够表达UL138,且随着时间的延长,蛋白表达量逐渐增多。定量PCR检测发现,THP-1细胞 UL138过表达后,可明显抑制IL-18、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等前炎性细胞因子的表达。定量PCR芯片分析显示,UL138表达明显改变THP-1单核细胞内趋化因子及受体的表达,除外 CCL17、CCL21、CCL22、XCL2等趋化因子以及 CCR2、CXCR1、CXCR2、 CXCR4及CX3CR1等趋化因子受体在不同时间点上调表达外, CXCL1、CXCL3、CXCL9、CXCL10、CXCL11等大部分趋化因子及受体的表达均显著减少。结论成功构建了可感染THP-1单核细胞的UL138基因重组腺病毒；THP-1单核细胞过表达UL138可明显影响其功能。
- 郭刚强陈静陈文静叶璐璐孙祥威张良章慧娣林巧爱沈贤张丽芳薛向阳
- 关键词：人巨细胞病毒重组腺病毒THP-1
- 术前血小板与淋巴细胞计数比值预测进展期胃癌腹膜转移被引量：6
- 2019年
- 目的研究进展期胃癌患者术前血小板与淋巴细胞计数比值(platelet-to-lyrnphocyte ratio,PLR)和中性粒细胞与淋巴细胞计数比值(neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)在腹膜转移中的预测价值.方法回顾性分析2009年1月至2012年1月在温州医科大学附属第一医院行手术治疗的701例经术后病理确诊的进展期胃癌患者的临床病理资料.结果单因素分析结果表明,进展期胃癌腹膜转移与肿瘤位置、肿瘤大小、浆膜浸润、分化程度、淋巴结转移及PLR均有关(均P<0.05).根据ROC曲线,PLR预测进展期胃癌腹膜转移的最佳阈值为132.43(灵敏度71.8%,特异度50.6%).高PLR组与低PLR组胃癌患者的肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移及浆膜浸润差异均有统计学意义(均P<0.05).Logistic多因素回归分析结果显示,进展期胃癌腹膜转移的独立危险因素有肿瘤大小(HR=1.150,P=0.014)、PLR(HR=2.205,P=0.003)及淋巴结转移(HR=3.113,P=0.010).结论术前PLR具有预测进展期胃癌腹膜转移的价值,并且是影响胃癌腹膜转移的独立危险因素.
- 庞文洋陈文静朱冠保胡畅远蔡一奇
- 关键词：血小板淋巴细胞肿瘤转移
- 一种新型高度敏感的细胞内潜伏的人巨细胞病毒检测方法
- 本发明提供一种新型、高度敏感的人巨细胞病毒检测方法，此方法是提取人外周血单个核细胞的核酸，使用特异性外侧上下游引物进行第一轮PCR扩增，以第一轮的扩增产物为模板，使用特异性内侧上下游引物进行第二轮定量PCR扩增的巢式定量...
- 薛向阳陈静张丽芳陈文静叶璐璐
- 文献传递
- 诱导性表达人巨细胞病毒UL138蛋白的胃癌细胞株构建及其效应评价
- 2017年
- 目的:构建可诱导表达人巨细胞病毒(HCMV)UL138蛋白的稳定遗传胃癌细胞系,并评价UL138对胃癌细胞的生物学效应。方法:将p CMV-tet3G质粒转染BGC-823胃癌细胞,通过G418及荧光素酶活性检测筛选BGCTet-on细胞株。再将含有UL138外源基因的p TRE3G-UL138质粒转染稳定BGCTet-on细胞株,通过G418及潮霉素双抗筛选,获得诱导性表达UL138基因的胃癌细胞(BGC-UL138_(Tet-on))。强力霉素(DOX)诱导后,采用Western blot验证UL138蛋白表达,采用流式细胞术及CCK8试剂盒检测UL138蛋白表达对胃癌细胞的生长周期及增殖的影响。构建荷瘤裸鼠模型,体内验证UL138蛋白表达对胃癌细胞增殖的影响。结果:成功构建了DOX诱导性表达的、携带UL138基因的BGC-UL138_(Tet-on)稳转细胞株。UL138蛋白表达可显著抑制胃癌细胞增殖;流式细胞术检测显示UL138蛋白表达阻滞BGC-823细胞周期在G_1期。荷瘤裸鼠模型体内实验发现,DOX腹腔注射诱导UL138蛋白表达后,BGC-UL138_(Tet-on)移植瘤体积缩小甚至消失。结论:成功构建可诱导表达UL138蛋白的胃癌细胞株,进一步证实HCMV基因UL138的表达可在体内和体外抑制胃癌细胞的增殖,细胞实验提示细胞周期阻断在G_1期。
- 张良陈文静郭刚强孙祥威叶璐璐胡畅远金劲激沈贤薛向阳
- 关键词：巨细胞病毒胃肿瘤
- 人巨细胞病毒UL138基因表达对胃癌细胞免疫相关功能的影响被引量：2
- 2018年
- 目的:探讨人巨细胞病毒UL138基因表达对胃癌细胞免疫相关功能的影响。方法:构建UL138基因真核表达重组质粒,转染BGC-823胃癌细胞,经Westernblot及免疫荧光验证UL138表达,通过基因芯片结合生物信息学技术分析UL138表达对胃癌细胞功能的影响,荧光定量PCR进一步验证胃癌细胞中免疫相关分子的表达,Westernblot分析免疫原性死亡相关蛋白的变化。结果:Westernblot及免疫荧光证实重组质粒转染后胃癌细胞表达UL138;基因芯片差异基因分析显示UL138的表达上调了370个基因表达,下调了206个基因的表达;生物信息学分析提示这些差异基因的表达参与了胃癌细胞骨架重构、细胞黏附等并与消化系统疾病相关。荧光定量PCR分析显示UL138的表达上调了IL1A、IL6、IL11、IL8、IL1RL1、IL7R、IL13RA2、CCL3L1、CCL5、TNFAIP3、TNFRSF21、VEGFA、CD44、CD55、CD59、CD27416种炎症相关细胞因子基因表达并下调了CXCL10、IFNAR1基因的表达。此外,Westernblot结果显示UL138的表达上调了免疫原性死亡相关蛋白ERp57的表达(P<0.01),不影响HSP70的表达(P>0.05)。结论:UL138基因的表达能促进胃癌细胞促炎相关细胞因子表达并诱导免疫原性细胞死亡的特征。
- 叶乐乐张佳丽陈文静沈贤胡畅远丁宁薛向阳
- 关键词：胃肿瘤巨细胞病毒细胞因子类
- 胃癌术后并发症对5年生存率的影响被引量：9
- 2014年
- 目的:探讨胃癌切除术后并发症的发生对患者5年生存率的影响。方法:收集2006年1月至2009年4月在我院诊断为胃腺癌且行胃癌切除术并有完整随访数据的病例380例,将其分为术后并发症组(52例)和无术后并发症组(328例),统计术后并发症的类型及分级,以分析术后并发症发生的影响因素及术后并发症的发生对患者5年生存率的影响。结果:单因素分析显示术后并发症发生的相关因素有:年龄、体质量指数(BMI)、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TMN分期(P<0.05);单因素分析显示影响患者术后5年生存率的因素有年龄、性别、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、TMN分期、手术方式、肿瘤分化程度、术后并发症(P<0.05);COX多因素分析表明术后并发症、性别、淋巴结转移数、肿瘤分化程度是影响术后5年生存率的独立因素。结论:胃癌切除术后并发症是影响患者5年生存率的独立因素之一,积极预防和治疗术后并发症对延长患者术后生存期具有重要的意义。
- 马海广胡畅远庞文洋金劲激陈娇珍金灿灿陈文静朱冠保
- 关键词：胃肿瘤手术后并发症
