赵敏
- 作品数：11 被引量：5H指数：2
- 供职机构：北京生物制品研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 不同CA16流行株的相关生物学和VP1基因的分子生物学研究被引量：3
- 2012年
- 目的对柯萨奇病毒A组16型（CA16）病毒株进行生物学特征与基因背景研究，为CA16病原和疫苗的进一步研究奠定基础。方法从咽拭子标本中分离出CA16病毒；通过中和鉴别试验和RT—PCR对病毒进行分子生物学鉴定；病毒的VPl基因序列测定后，与其他CA16序列进行比较，绘制种系发育树，确定病毒基因型；测定病毒滴度，观察病毒在Vero细胞上的噬斑形态；攻击乳鼠分析病毒的致病性。结果从手足口病患者咽拭子标本中分离到6株病毒，采用肠道病毒通用引物可以从病毒感染细胞中扩增出约150bp大小的目的产物带；采用CA16特异性引物可以从病毒感染细胞中扩增出210bp大小的目的产物带。而采用EV71特异性引物未见特异性扩增条带。噬斑分析发现，6株病毒在Vero细胞上接种96h后均能出现清晰的噬斑，其中BJ-3噬斑直径为4—5mm，BJ-5噬斑直径约为3mm，BJ-1、BJ-2、BJ4、BJ-6噬斑直径为1．5～2mm；除BJ-3噬斑边缘模糊外，其余5株噬斑边缘整齐。该6株病毒均可被人CA16抗体阳性血清中和。在Vero细胞上连续传5代，滴度均在7．0LgcCID50／ml左右。基于VPI基因序列的种系发育分析结果显示，BJ-2、BJ-4、BJ-5属于C1亚型，BJ-1、BJ-3、BJ-6属于C3亚型，该6株病毒核苷酸同源性达90％以上，氨基酸同源性达99％以上。乳鼠攻击试验结果显示，BJ-3和BJ-5攻击后第4～5天乳鼠开始发病，后肢出现明显的麻痹、瘫痪症状，至第6～7天全部死亡，正常对照组和其他病毒组直至攻击后第14天均无异常。结论不同CA16病毒株的生物学特性有所不同，基因背景相近，致病性明显不同，需进一步了解中国流行的CA16病毒株的致病特点，为疫苗的研发提供直接依据。
- 郝春生杨永娟宋衍燕李懿张中洋郭会杰赵敏支惠罗凤基李秀玲
- 关键词：流行株手足口病
- 肠病毒71型(EV71)分离株的鉴定及免疫原性研究
- 本研究首先对采用Vero细胞从EV71感染流行地区患者体内分离到的病毒进行鉴定，电镜下可观察到直径约为20-30nm的圆形病毒颗粒，呈典型的肠道病毒形态;采用特异性EV71单抗进行间接免疫荧光试验检测，其可与EV71特异...
- 李秀玲张中洋王潇潇杨永娟郝春生赵敏何薇薇张晨沈心亮
- 关键词：免疫原性间接免疫荧光试验基因序列测定
- 文献传递
- 平行线法计算Vero细胞乙脑灭活疫苗抗原的效价
- 本文应用对比检定原理和统计学方法,阐述了平行线法计算Vero细胞乙脑疫苗抗原含量的原理,推出了抗原效价的计算公式,确立了计算疫苗效价的简单而准确的方法;并根据标准品的多次测定结果,计算了标准品的平均斜率及总体标准差,规定...
- 石慧颖赵敏丁志芬
- 关键词：乙脑灭活疫苗
- 文献传递
- 用酶标法检测Vero细胞乙脑疫苗人体免疫血清抗体
- 本文通过纯化鼠脑组织乙脑病毒,制备包被抗原,确定了用间接ELISA法直接测定人体免疫血清的反应条件.通过对中和试验筛选出的44份阴性血清的测定,确定了酶标法检测Vero细胞乙脑疫苗人体免疫血清的临界值(cut off值)...
- 赵敏石慧颖丁志芬
- 关键词：乙脑疫苗VERO细胞酶标法检测
- 文献传递
- 抗脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原单克隆抗体的制备及其初步应用被引量：2
- 2012年
- 目的制备脊髓灰质炎病毒(Poliovirus)Ⅰ型D抗原单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法采用Vero细胞培养脊髓灰质炎病毒Ⅰ型,柱层析纯化病毒抗原,SDS-PAGE鉴定病毒蛋白,HPLC分析抗原纯度,Western blot分析抗原的反应原性。以纯化的脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合,筛选可分泌脊髓灰质炎病毒I型D抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体经纯化后,采用间接ELISA法检测小鼠腹水抗体效价、单抗的特异性及相对亲和力。分别以纯化的单抗作为捕获抗体和酶标抗体,进行配对试验,建立用于脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原检测的双抗体夹心ELISA方法,确定方法的最佳线性范围,并验证方法的特异性。结果纯化的脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原经SDS-PAGE分析,共显示4条蛋白条带,相对分子质量分别为约40 000、35 000、32 000和28 000;经HLPC分析,纯度达99%;小鼠免疫血清可与相对分子质量约为35 000的VP1蛋白发生特异性反应。共筛选出5株可稳定分泌脊髓灰质炎病毒I型D抗原单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,纯化的单抗仅与D抗原发生反应;2H1和3B5株单抗的效价分别为2×107和2×106,且亲和力高于其他3株单抗。采用2H1和3B5株单抗配对,可以特异性检测D抗原,而与C抗原不反应;D抗原最佳线性范围为4.300～0.071 DU/ml,R2为0.994 6。该法仅可检出脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原,而与脊髓灰质炎病毒Ⅱ型、Ⅲ型D抗原和脊髓灰质炎病毒Ⅰ型C抗原、EV71抗原、Vero细胞培养上清不发生交叉反应。结论制备了脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原单克隆抗体,建立了可用于脊髓灰质炎病毒Ⅰ型D抗原特异性检测的双抗体夹心ELISA方法。
- 张中洋郭会杰赵敏杨永娟郝春生李懿马淑花刘宇宁海京张晨陈明田龙李秀玲
- 关键词：脊髓灰质炎病毒D抗原C抗原抗体单克隆酶联免疫吸附测定
- 平行线法计算Vero细胞乙脑灭活疫苗抗原的效价
- 本文应用对比检定原理和统计学方法,阐述了平行线法计算Vero细胞乙脑疫苗抗原含量的原理,推出了抗原效价的计算公式,确立了计算疫苗效价的简单而准确的方法;并根据标准品的多次测定结果,计算了标准品的平均斜率及总体标准率,规定...
- 石慧颖赵敏丁志芬孔建
- 关键词：ELISAVERO细胞乙脑疫苗效价
- 文献传递
- 脊髓灰质炎灭活疫苗及其制备方法
- 本发明涉及脊髓灰质炎灭活疫苗及其制备方法。具体地说，本发明的脊髓灰质炎灭活疫苗是以脊髓灰质炎减毒病毒为起始株制备的。本发明还涉及预防人受试者中脊髓灰质炎的方法。
- 石慧颖李懿田龙赵敏翁捷张冲陈明支惠庞成华
- 文献传递
- 减毒株灭活脊髓灰质炎疫苗的研制
- 本文从生产用毒种、细胞基质、病毒培养及纯化工艺、病毒灭活条件以及疫苗的稳定性和免疫程序等方面进行了减毒株灭活脊髓灰质炎疫苗的研究.
- 石慧颖李懿张冲赵敏田龙支惠
- 关键词：脊髓灰质炎灭活疫苗减毒株细胞基质病毒培养免疫程序
- 文献传递
- 超速离心法纯化Vero细胞狂犬病疫苗
- 目的 用超速离心法制备纯化的Vero细胞狂犬病疫苗.方法 用蔗糖密度梯度区带离心法纯化Vero细胞狂犬病原制疫苗,按照生物制品规程要求纯化疫苗的抗原、蛋白及其他各项指标.结果 用区带离心法可以制备符合人用标准的纯化狂犬病...
- 石慧颖丁志芬庞成华杨春亭赵敏
- 关键词：VERO细胞狂犬病疫苗分离纯化超速离心法
- 文献传递
- 冻干精制流行性乙型脑炎灭活疫苗(Vero细胞)
- 丁志芬石慧颖庞成华陈海平常振彦赵敏郭绍红董春明陈明
- Vero细胞流行性乙型脑炎灭活疫苗是经标准化的Vero细胞为基质，通过15L大转瓶或微载体生物反应器系统大规模培养细胞和乙脑病毒后，经过灭活、浓缩、初步纯化和进一步精制制成的乙脑灭活疫苗。 这种疫苗灭活前病毒滴度达到1...
- 关键词：
- 关键词：VERO细胞流行性乙型脑炎乙脑疫苗
