李潇
- 作品数：23 被引量：26H指数：3
- 供职机构：广州医科大学更多>>
- 发文基金：广州市科技计划项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 三种不同腺病毒基因组提取方法对全基因组克隆构建的影响分析被引量：1
- 2016年
- 目的 建立一种简单、快速、有效、纯度高的人腺病毒全基因组提取的方法 。方法 用60 mm细胞培养皿培养A549或AD293细胞,接种培养人7型腺病毒（HAdV-7）CQ1198株,收集病毒感染的细胞,分别用Hirt＇s改良法、试剂盒A和试剂B提取HAdV-7-CQ1198病毒株全基因组,提取的基因组进行限制性内切酶酶切实验、细菌内同源重组实验和转染细胞拯救病毒实验。结果 几种方法都成功获得高质量的腺病毒全基因组,可以用于PCR、测序、酶切、同源重组和转染实验;两种试剂盒方法较传统的Hirt＇s改良法更快,不需要特别步骤去除细胞基因组,可以在1h内完成基因组提取。其中,试剂盒A提取的病毒基因组量最多（20-50μg）,RNA含量最少,不需要另外加入核糖核酸酶（RNase）,而Hirt＇s改良法需要在裂解液中或最终产物中加入RNase以去除细胞RNA成分。结论 试剂盒A和试剂盒B均可替代传统Hirt＇s提取方法用于快速提取高质量腺病毒基因组,提取的基因组能用于酶切分型、转染等实验操作。
- 李潇周荣马强蒋再学周志超廖小红田新贵
- 关键词：腺病毒酶切分析病毒感染
- 单孔胸腔镜技术治疗婴幼儿叶外型肺隔离症被引量：4
- 2021年
- 目的总结单孔胸腔镜技术治疗婴幼儿叶外型肺隔离症的经验。方法回顾性分析2020年8~12月单孔胸腔镜治疗叶外型肺隔离症9例的临床资料。年龄(7.1±3.4)月,体重(8.1±1.8)kg。经腋前线与腋中线之间第7或8肋间2~3 cm切口完成手术。结果均在单孔胸腔镜下完成手术,无中转开胸,手术时间(54.8±23.2)min,术中出血量<5 ml,均未放置胸腔引流管,住院6~7 d。无非计划二次手术,无围术期死亡及并发症发生。术后随访(3.1±1.8)月,恢复良好,无并发症。结论对婴幼儿叶外型肺隔离症,单孔胸腔镜技术可考虑作为一种较好的选择。
- 李潇蔡纯孙宇玲杜梦薇张刚闫宪刚周晓彤俞钢
- 关键词：叶外型肺隔离症婴儿
- 一株结合两种策略的新型三价腺病毒疫苗
- 人3、7、55型腺病毒是引起儿童和成人急性呼吸道感染的主要病原体,常导致儿童死亡。但除美军外,国内外至今没有上市的腺病毒疫苗,因此,开发多价腺病毒疫苗迫在眉睫。腺病毒是目前国内外常用的病毒载体,其携带外源基因的方式有多种...
- 李潇
- 关键词：腺病毒疫苗
- 文献传递
- 呼吸道合胞病毒A与B亚型多重荧光PCR检测方法的建立及应用被引量：3
- 2016年
- 目的建立一种新的呼吸道合胞病毒(RSV)分型检测方法,用于快速检测和监测。方法针对RSV G基因设计引物、探针,并引入人β-actin基因(ACTB)作为内参质控,建立RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法。使用多种常用呼吸道病原体及体外转录RNA产物考核其特异性和灵敏度。并对2015年1月至12月广州两家医院的儿童急性呼吸道感染患者进行检测。结果所建立的多重检测方法未见非特异性反应。RSV-A、RSV-B和ACTB分别可检测低至4、8和12 copies/μL的RNA模板,且分别在10~1×10^(10)copies/μL、100~1×10^(10)copies/μL和100~1×10^(10)copies/μL时具备良好的线性关系,线性相关系数r2均大于0.99。儿童急性呼吸道感染患者监测中,RSV-A为期间优势亚型。结论本研究所建立的RSV-A、RSV-B多重荧光PCR检测方法,具有较好的特异性、灵敏度、可操作性,可用于相关研究。
- 刘文宽周荣陈德晖檀卫平邱淑燕许多李潇
- 关键词：呼吸道合胞病毒荧光定量PCR
- 一种基于人3型腺病毒的新型重组乙型肝炎疫苗株的构建
- 李潇周志超田新贵招穗珊周荣
- 三种常见人呼吸道腺病毒六邻体蛋白的克隆、表达及抗原性分析被引量：3
- 2014年
- 目的：克隆、表达常见的人呼吸道腺病毒的主要中和抗原六邻体蛋白，分析重组表达产物的抗原性和免疫原性。方法分别PCR扩增克隆人3型、4型、7型腺病毒完整的六邻体蛋白基因，测序和序列比对并与GenBank上人腺病毒的六邻体蛋白进行同源性比对；对其主要的抗原区进行克隆、表达和纯化，表达产物免疫动物，ELISA和Western blot实验对表达产物的抗原性和免疫原性及其交叉反应进行分析。结果国内首次报道1株人4型腺病毒的六邻体基因序列，与GenBank中的NHRC3分离株核酸及氨基酸的同源性均大于99％；3种腺病毒包含全部高变区的六邻体部分区段在大肠杆菌中成功表达并纯化，重组蛋白可以被不同型别的人腺病毒免疫血清识别，重组蛋白免疫小鼠血清可以识别不同型别的人腺病毒，而型间反应有显著差异，预测了3种腺病毒六邻体型、型间特异性表位。结论成功表达人3型、4型、7型腺病毒六邻体蛋白主要抗原区，重组表达产物有强免疫原性，包含型间、型特异性抗原表位。
- 田新贵周荣薛春燕李潇周志超
- 关键词：免疫原性表位
- 胎儿胎粪性腹膜炎的再认识被引量：4
- 2022年
- 目的探讨胎粪性腹膜炎产前超声诊断与胎儿临床结局的相关性,重新认识胎源性疾病。方法收集2013年5月至2019年12月在广州医科大学附属第三医院产前超声诊断、出生后证实的46例胎粪性腹膜炎患儿病例,保守治疗组35例(男18例,女17例),胎龄(38.42±0.86)周;手术组11例(男8例,女3例),胎龄(37.85±1.65)周。胎粪性腹膜炎产前超声诊断标准为腹腔内钙化灶,伴或不伴腹水、假性囊肿、肠管扩张和羊水过多等超声声像学表现。所有诊断病例均动态监测孕期过程至分娩,超声检查对病灶形态、大小或内部回声等发生变化进行分析和形态描述,结合产前临床胎儿学分析和孕期管理。生后进行临床追踪复查及随访,有明确手术指征者手术治疗。结果采用χ^(2)检验进行统计学分析。结果产前超声诊断胎粪性腹膜炎共46例,腹腔内钙化灶46例(100%),钙化灶合并腹水25例(54.3%),合并假性囊肿18例(39.1%),合并肠管扩张12例(26%),合并羊水过多11例(23.9%)。46例胎粪性腹膜炎全部出生,生后体检和X线检查再次得到确定诊断,35例(76%)生后仅需要保守治疗,11例(23.9%)生后因肠梗阻新生儿手术治疗。所有病例均治疗成活,随访1~5年均健康发育,有2例分别于6个月和8个月因腹股沟疝和隐睾腹腔镜手术检查发现腹腔钙化灶已经吸收。腹腔内钙化合并腹腔积液、腹腔内假性囊肿、肠管扩张和羊水过多的发生比例在各组手术之间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论胎粪性腹膜炎产前超声与胎儿临床结局关系密切,需要从胎源性疾病再认识。大多数胎粪性腹膜炎出生后仅需要保守治疗,小部分需手术治疗,临床结局均良好。
- 蔡纯陈兢思张刚李潇周晓彤俞钢
- 关键词：腹膜炎产前诊断胎儿
- 运用表位嵌合型3型腺病毒载体制备肠道病毒71型单克隆抗体被引量：2
- 2016年
- 目的制备针对肠道病毒71型(EV71)的单克隆抗体(m Ab)。方法将六邻体中同时嵌入EV71 SP55与SP70两个中和表位的重组人3型腺病毒作为免疫原免疫小鼠,利用杂交瘤技术制备m Ab。用病毒微量中和实验、间接ELISA、Western blot法和直接免疫荧光染色法进行鉴定。结果获得了4株分泌EV71特异性m Ab的杂交瘤细胞,D2C9、2C4、I2G2、I12C3,其中D2C9株腹水间接ELISA实验效价为1∶8 000 000,其余3株为1∶500 000;Western blot法和ELISA结果表明4株m Ab均识别EV71病毒VP1蛋白。D2C9针对SP70表位,2C4、I12C3、I2G2针对SP55表位;直接免疫荧光实验结果显示4株m Ab均能与EV71特异性结合,而与柯萨奇病毒16型(Cox A16)不结合。结论获得了对EV71亲和力高、特异性好并且与Cox A16无交叉反应的m Ab。
- 樊晔田新贵薛春燕刘铭龙周志超李潇李晨阳周荣
- 关键词：肠道病毒71型单克隆抗体中和表位
- 一种人3型、7型腺病毒六邻体嵌合的重组病毒体构建
- 目的构建以人3型腺病毒(HAdv3)为载体的人3型、7型腺病毒双价疫苗候选株。方法在HAdv3基因组E3区插入了人7型腺病毒(HAdv7)六邻体蛋白表达框,在体外细胞中拯救包装得到一种六邻体嵌合型的重组腺病毒,用抗六邻体...
- 田新贵薛春燕李潇周荣
- 先天性肺气道畸形患儿病变组织中差异表达基因的筛选及生物学功能分析被引量：2
- 2021年
- 目的筛选先天性肺气道畸形(CPAM)患儿病变组织中的差异表达基因,并分析其生物学功能。方法CPAM患儿5例,接受胸腔镜微创手术治疗时留取CPAM病变组织、CPAM病变旁组织,使用Total RNA-seq(H/M/R)Library Prep Kit for Illumina®构建RNA-Seq文库,用RSEM软件获得基因的表达序列数,使用TMM法对基因表达进行标准化,获得有效序列。采用主成分分析法去除异常样本后,用edgeR软件筛选出CPAM病变组织与CPAM病变旁组织的差异表达基因,并使用R软件cluster Profiler对差异表达基因集合进行GO功能富集分析和KEGG信号通路分析。结果成功构建10个样本的RNA-Seq文库,发现1个异常表达样本,予以剔除。共筛选出CPAM病变组织与CPAM病变旁组织的差异表达基因1063个,其中上调基因860个、下调基因203个。GO功能富集分析结果显示,差异表达基因细胞组成主要位于轴丝、纤毛、微管、细胞顶端部分等,参与的分子功能主要有微管蛋白结合、肌动活性、微管结合功能、微管运动活性等,涉及的生物过程主要有纤毛组织、纤毛组装、轴丝组装、微管束形成、纤毛及鞭毛运动等。KEGG信号通路分析结果显示,差异表达基因参与PI3K-Akt信号通路、血管平滑肌收缩、流体剪切应力和动脉粥样硬化等信号通路的调控。结论与CPAM病变旁组织相比,CPAM病变组织中存在1063个差异表达基因;差异表达基因与纤毛形成和退化有关,参与肺发育过程的多个信号通路。
- 张刚刘丹丹蔡纯李潇曾慧仪娄蕾闫宪刚俞钢
- 关键词：差异表达基因生物信息学分析
