王晓岩
- 作品数：6 被引量：7H指数：2
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HCV多中和抗原表位嵌合病毒样颗粒免疫获得血清内中和抗体评价被引量：1
- 2017年
- 目的:纯化的HCV多中和抗原表位及HCV包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒免疫新西兰兔,测定免疫血清内的中和抗体。分析中和抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用。方法:纯化的HCV多中和抗原表位及包膜蛋白E2嵌合的HBV S抗原病毒样颗粒(VLPs-MEp S、VLPs-E2S)10μg皮下接种新西兰兔,间隔2周共免疫3次,采集不同时间免疫兔血清,ELISA方法测定血清内的抗体,PBS组作为对照;制备1b型HCVpp,观察血清抗体对HCVpp感染Huh7.5的中和作用,对免疫血清保护性进行初步评价。结果:免疫后血清中产生一定水平的中和抗体,血清中和抗体测定VLPs-MEp S明显高于VLPs-E2S(P<0.05)。VLPs-MEp S与VLPs-E2S组均显著高于对照PBS组(P<0.01)。对HCVpp抑制作用,VLPs-MEp S高于VLPs-E2S组(P<0.05),最高中和率可达61.49%,二者均高于对照组(P<0.01)。结论:嵌合病毒样颗粒免疫新西兰兔后产生一定水平中和抗体,该中和抗体具有保护作用,为研发中和抗体表位疫苗奠定基础。
- 王晓岩张海雷迎峰林芳崔颖李斌张惠中韦三华
- 关键词：表位病毒样颗粒中和抗体免疫
- 嵌合HCV串联多表位的乙肝S基因真核载体构建及表达
- 2016年
- [目的]构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)串联多中和抗原表位与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)S抗原嵌合基因真核表达质粒,并在293T细胞中进行表达。[方法]将HCV基因中高度保守且具有广谱交叉中和活性的三个表位和一个HVR1模拟表位串连。串联表位嵌合于HBV S基因的氨基端胞外区,形成嵌合基因MEpS;将基因克隆至真核表达载体pCI-neo中,构建重组质粒pCI-MEpS。将质粒转染至293T细胞中,间接免疫荧光及Western Blot检测嵌合基因的表达情况。[结果]重组质粒经双酶切证实构建正确;pCI-MEpS转染的293T细胞胞浆内可见较强的绿色荧光,Western Blot显示pCI-MEpS在相对分子量约38 kDa处可见蛋白条带。[结论]构建了HBV S抗原嵌合HCV串联多中和抗原表位的重组质粒,成功在293T细胞中表达,为制备嵌合HCV串联多中和抗原表位的HBV S抗原VLPs,研究嵌合VLPs免疫动物后产生的中和抗体的保护作用奠定了实验基础。
- 王晓岩雷迎峰李翠林芳崔颖舒放张惠中韦三华
- 关键词：丙型肝炎病毒S抗原
- 辅助生殖与自然受孕孕妇早、中期唐氏筛查结果的对照研究
- 刘正王晓岩刘梦昕王珺王晓红
- HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒诱导的中和抗体应答及保护评价被引量：2
- 2015年
- 目的用纯化的嵌合HCV中和抗原表位的HBV VLPs免疫Balb/c小鼠,测定小鼠血清中的中和抗体,并观察免疫血清对HCVpp和HCVcc感染Huh7.5的抑制作用。方法 500 ng纯化的嵌合病毒样颗粒抗原,免疫Balb/c小鼠3次,每2周尾静脉采血,用合成的表位肽和HBs Ag阳性血清作为包被抗原检测小鼠血清中抗体。免疫血清和HCVpp及HCVcc预处理,观察其对HCVpp和HCVcc感染Huh7.5细胞的抑制作用。结果 Balb/c小鼠体内诱导出HBs Ab和一定水平的针对HCV中和抗原表位的中和抗体,混合VLPs免疫诱导的中和抗体水平高于单一VLPs诱导产生的中和抗体。用免疫小鼠血清预处理的HCVpp和HCVcc感染Huh7.5能力明显低于对照组。结论嵌合HCV中和抗原表位的HBV VLPs免疫小鼠可诱导产生针对中和抗原表位的中和抗体,该中和抗体能抑制HCVpp和HCVcc对Huh7.5的感染,具有一定的保护作用。
- 王晓岩张海舒放雷迎峰魏欣林芳崔颖李斌张惠中韦三华
- 关键词：丙型肝炎病毒中和表位病毒样颗粒
- HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒的制备及纯化被引量：5
- 2015年
- 目的制备丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)中和抗原表位与HBV S抗原嵌合病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),并进行纯化和鉴定。方法采用脂质体法分别将4个HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合重组表达载体p CI-HBSE1、p CI-HBSE2、p CI-HBSE3、p CI-HBSE4转染HEK293T细胞,48 h后收集培养上清,获得自我装配的嵌合HCV中和表位的HBV VLPs,分别命名为VLPs-SE1、VLPs-SE2、VLPs-SE3、VLPs-SE4,蔗糖密度梯度离心,透析浓缩后,电镜观察VLPs,电化学发光法进行HBs Ag定量,ELISA法检测嵌合VLPs作为包被抗原与HCV感染患者血清的反应。结果电镜观察可见4种嵌合VLPs,大小约为22 nm;浓度最高的VLPs-SE2 HBs Ag含量达5.51×103ng/ml,该浓度可满足后续试验的要求;用混合VLPs作为包被抗原检测的HCV感染患者血清中和抗体水平稍高于单一VLPs作为包被抗原检测的水平。结论成功制备了HCV中和抗原表位与HBV S抗原嵌合VLPs,为进一步评价VLPs体内诱导的中和抗体及中和抗体的保护作用奠定了基础。
- 舒放王晓岩雷迎峰林芳王希李斌刘冲张惠中韦三华
- 关键词：丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒S抗原病毒样颗粒
- 嵌合有HCV多中和抗原表位的乙肝S抗原病毒样颗粒的制备与鉴定
- 2017年
- 制备嵌合HCV多中和表位及HCV包膜蛋白E2的HBV S抗原病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),并进行鉴定、纯化和浓缩。HEK293T细胞用DMEM培养至90%密度时,将构建的重组真核表达载体pCI-MEpS、pCI-E2S用脂质体法转染HEK293T细胞,48h后在培养上清中得到自我装配的嵌合HCV多中和表位及包膜蛋白E2的HBV病毒样颗粒(VLP-MEpS,VLP-M2S)。蔗糖密度梯度离心,透析浓缩后,电化学发光法进行HBsAg定量测定、电镜分析和Western blotting鉴定。制备出的嵌合病毒样颗粒VLP-MEpS和VLP-E2S经浓缩后其HBsAg定量最高达到3×10~4 ng/mL。实验表明我们成功制备出嵌合有HCV多中和抗原表位的HBV VLP,为进一步分析诱导的中和抗体研究奠定基础。
- 王晓岩张海雷迎峰林芳崔颖李斌舒放张惠中韦三华
- 关键词：丙型肝炎病毒中和表位病毒样颗粒
