杨高山
- 作品数：7 被引量：6H指数：1
- 供职机构：河北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金河北省应用基础研究计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 小麦HCP1基因克隆及其在叶锈菌侵染诱发的HR中的功能研究
- 小麦与叶锈菌互作过程中,不亲和组合通常以过敏性反应(hypersensitive reaction,HR)的方式来抵抗叶锈菌的侵染.HR 形成早期,重要的生理生化变化之一是发生氧化迸发产生活性氧.前期试验我们通过构建叶锈...
- 刘鹏杨高山王帅帅刘刚阎爱华韩胜芳王冬梅
- 关键词：小麦叶锈菌H2O2过敏性反应
- 小麦与叶锈菌互作过程中Wrab17基因的功能研究
- 植物在遭受生物和非生物逆境胁迫时,体内会引发一系列的防卫反应。在小麦与叶锈菌的互作体系中,小麦通过产生HR-PCD抵御叶锈菌的侵袭。为了更好地探究小麦抗叶锈菌机制,对小麦抗叶锈相关防卫基因的研究就显得非常重要。Wrab1...
- 杨高山王帅帅刘鹏张恒韩胜芳王冬梅
- 关键词：小麦叶锈菌HR
- 文献传递
- 小麦HCP1基因在叶锈菌侵染小麦诱发的HR中的功能研究
- <正>小麦与叶锈菌互作过程中,不亲和组合通常以过敏性反应(hypersensitive reaction,HR)的方式来抵抗叶锈菌的侵染。HR形成早期,重要的生理生化变化之一是发生氧化进发产生活性氧。前期试验我们通过构建...
- 刘鹏杨高山阎爱华韩胜芳王冬梅
- 文献传递
- 叶锈菌侵染诱导产生的小麦Wrab17蛋白的原核表达、纯化及其抗体制备被引量：1
- 2015年
- 叶锈菌(Puccinia triticina)引起的小麦叶锈病是影响世界小麦生产的重要病害之一。研究小麦抗叶锈相关防卫蛋白的表达,对于深入研究小麦对叶锈菌的抗病机制,更好地为农业生产服务,具有重要意义。Wrab17(Wheat response to ABA)是一个冷胁迫诱导蛋白,前期工作通过构建叶锈菌侵染早期的小麦SSH文库及ESTs序列分析,筛选到Wrab17基因在不亲和组合接种后早期显著上调表达,初步表明Wrab17基因可能参与了小麦抗叶锈菌侵染过程,这是首次发现Wrab17参与抗病反应。本研究进一步利用RT-PCR技术从接种叶锈菌的小麦叶片中克隆获得了Wrab17基因的CDS区,构建了Wrab17蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达Wrab17蛋白。利用镍柱亲和层析方法获得了纯度较高的重组蛋白,将融合蛋白纯化后制备其兔抗血清,得到特异性较好的多克隆抗体。为进一步通过Western Blotting技术检测Wrab17在小麦被叶锈菌侵染后不同时间点表达量的变化,明确Wrab17参与小麦抵抗叶锈菌侵染的防卫反应奠定基础。
- 杨高山王帅帅张恒韩胜芳王冬梅
- 关键词：叶锈菌原核表达蛋白纯化
- 小麦与叶锈菌互作中Wrab17基因的克隆、表达及功能研究
- 小麦叶锈病是由叶锈菌(Puccinia triticina)所引起的病害，严重影响小麦(Triticumaestivum.L)的产量。为了更好地探究小麦抗叶锈菌机制，对小麦抗叶锈相关防卫基因的研究就显得极为重要。Wrab...
- 杨高山
- 关键词：小麦叶锈菌过敏性反应
- 文献传递
- 农杆菌介导瞬时沉默小麦HCP1的研究被引量：4
- 2015年
- 【目的】建立农杆菌介导的瞬时沉默小麦HCP1的方法,为简便、快速、高效地研究小麦基因功能提供一种可靠的技术支持。研究HCP1在叶锈菌侵染过程中对H2O2的清除作用,为阐明小麦抗叶锈菌侵染中信号转导机制奠定理论基础。【方法】采用农杆菌注射法,将携带有pe GFP载体的农杆菌注射到小麦叶片中,观察叶片中荧光强度及分布,分析外源质粒在小麦叶片中的表达情况。通过注射EHA105、LBA4404和C58C1 3种不同的农杆菌菌株,将HCP1的RNAi载体导入小麦叶片细胞中,利用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测HCP1瞬时沉默效率,并结合Rohringer染色分析,明确不同农杆菌对寄主叶片侵染能力的强弱,从而筛选出最适的试验菌株。在瞬时沉默的小麦叶片上,接种不亲和叶锈菌小种260,利用DAB染色,观察接种叶锈菌后叶片中H2O2的变化,分析HCP1在小麦与叶锈菌互作过程中的功能。【结果】叶片GFP荧光观察结果说明,在注射农杆菌48 h后GFP开始出现较高表达。RT-PCR和q RT-PCR结果表明,注射C58C1菌株的叶片12 h后,HCP1的表达量开始降低,并持续保持较低的表达量。注射EHA105菌株的叶片,在注射后72—96 h,HCP1的表达量迅速降低。而注射LBA4404菌株的叶片中HCP1的表达量基本没有变化。所以在3种不同农杆菌菌株介导的HCP1 RNAi转化中,沉默效率依次为:C58C1≥EHA105>LBA4404。注射不同农杆菌菌株叶片的Rohringer染色结果发现,EHA105侵染后引起的HR反应较其他两种菌株明显,说明EHA105对小麦叶片具有较高毒性,会引起叶片产生防卫反应,C58C1菌株在具有较高的沉默效率同时,对叶片的毒性较小,因此选取C58C1作为最适的试验菌株;沉默HCP1的小麦叶片接种叶锈菌小种260后,通过DAB染色发现,接种24 h和48 h后叶锈菌侵染诱发的小麦叶片H2O2的分布及积累量均多于对照组。【结论】建立了农杆菌介导的瞬时基因沉默体系,选用C
- 刘鹏王帅帅杨高山张恒韩胜芳王冬梅
- 关键词：小麦叶锈菌H2O2
- 小麦HCP1基因在叶锈菌侵染小麦诱发的HR中的功能研究
- 小麦与叶锈菌互作过程中,不亲和组合通常以过敏性反应(hypersensitive reaction,HR)的方式来抵抗叶锈菌的侵染.HR形成早期,重要的生理生化变化之一是发生氧化迸发产生活性氧.
- 刘鹏杨高山阎爱华韩胜芳王冬梅
