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S100A9对宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移的影响及其机制探讨被引量：4: 2015年; 为初步探讨S100A9在宫颈癌中的生物学作用,利用携带有人S100A9基因的腺病毒(Adh S100A9)感染于低表达S100A9的宫颈癌Hela细胞,通过MTT法检测细胞增殖能力,划痕愈合试验和Transwell试验检测细胞迁移能力,通过倒置显微镜观察细胞形态变化,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测上皮细胞标志蛋白E-钙黏着蛋白(E-cadherin,E-cad)、间质细胞标志蛋白波形蛋白(vimentin,Vim)及Wnt/β-联蛋白(β-catenin,β-cat)信号通路相关分子的表达。结果显示,与对照组相比,过表达S100A9的Hela细胞增殖活性增强、迁移率增高,细胞形态由"铺路石"样向"梭形"转变,排列紊乱,伴随E-cad降低(P<0.05)和Vim升高(P<0.01);同时,过表达S100A9的Hela细胞中Wnt/β-cat信号通路的关键分子β-联蛋白水平增加(P<0.01),并且入核增多(P<0.01),该通路的下游靶基因c-myc、Snail及Twist表达也明显上调。该研究结果提示,S100A9促进宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),激活Wnt/β-cat信号通路;S100A9促进增殖和迁移作用的机制可能与其促进EMT和激活Wnt/β-cat信号通路相关。; 李雪茹孙晖查何段亮李欢袁世梅李爱芳谷月周兰; 关键词：S100A9 宫颈癌迁移上皮间质转化

HIFU通过下调miR-181a进而促进ICAM-1表达增强小鼠抗肿瘤免疫被引量：3: 2015年; 目的探讨miR-181a在高强度聚焦超声(high-intensity focused ultrasound,HIFU)增强机体抗肿瘤免疫中的作用及其机制。方法 1皮下构建供HIFU治疗的黑色素瘤移植瘤小鼠模型,采用简单随机法随机分为HIFU组与荷瘤组,每组30只,采用MTT方法检测各组脾淋巴细胞对B16细胞的杀伤活性,ELISA检测小鼠血清及共培养上清中TNF-α及IFN-γ的表达水平;2qRT-PCR检测HIFU组与荷瘤组脾淋巴细胞中的差异miRNAs;3用生物信息学方法预测差异miRNAs的潜在靶基因,通过RT-PCR及Western blot验证靶基因的表达;4构建荧光素酶报告质粒进一步验证差异miRNAs的靶基因,再将差异miRNAs的mimics转染脾淋巴细胞,RT-PCR及Western blot检测其靶基因表达的变化,以进一步确认差异miRNAs对靶基因表达的影响。结果 1HIFU治疗能够抑制黑色素瘤生长,促进脾淋巴细胞分泌TNF-α和IFN-γ,增强脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性;2HIFU处理明显下调脾淋巴细胞中miR-181a的表达水平(P<0.01);3生物信息学方法预测发现共刺激分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)可能是miR-181a的潜在靶基因,且HIFU处理明显促进脾淋巴细胞中ICAM-1的mRNA和蛋白质的表达(P<0.01);4miR-181a mimics显著抑制pLUC-ICAM-1-3'UTR报告质粒荧光素酶的活性(P<0.01),并下调脾淋巴细胞中ICAM-1的mRNA(P<0.05)和蛋白质的表达(P<0.01)。结论 HIFU通过抑制miR-181a对共刺激分子ICAM-1的负调控作用从而增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫。; 袁世梅李欢杨敏段亮查何孙晖李雪茹罗进勇李崇雁王智彪何通川周兰; 关键词：高强度聚焦超声抗肿瘤免疫 MICRORNA 细胞间黏附分子-1

S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移被引量：11: 2013年; 目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用.方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6,rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和0.5 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt,t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt,p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移.结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P〈0.05）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P〈0.05）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降10.3%～69.7%,细胞迁移率下降37.9%～41.6%,差异均有统计学意义（P〈0.05）.结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的.; 王海燕邹正渝段亮陈娴李欢袁世梅何通川周兰; 关键词：S100A6 骨肉瘤 P13K AKT信号通路

外源性S100A6蛋白对人结直肠癌细胞S100A6基因转录的影响及机制探讨: 2016年; 目的:探讨钙周期蛋白S100A6对人结直肠癌细胞系HCT116及SW480中S100A6基因转录的影响及机制。方法:首先采用原核表达方法制备重组人S100A6蛋白(recombinant human S100A6,rh S100A6)并鉴定;rh S100A6蛋白(终浓度为10μg/ml)、重组腺病毒Adsiβ-catenin(可表达β-catenin的siRNA)处理结直肠癌细胞HCT116、SW480及正常肠上皮细胞FHC,采用半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR)及定量实时聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,q PCR)检测S100A6 mRNA的水平,采用RT-PCR检测细胞中E-cadherin mRNA水平,采用Western blot检测并比较HCT116及SW480细胞核中β-catenin蛋白的水平变化,采用细胞免疫荧光法检测细胞中β-catenin分布的变化。结果:成功制备rh S100A6蛋白;外源性rh S100A6蛋白上调HCT116及SW480细胞中S100A6 mRNA水平和细胞核中的β-catenin蛋白水平并促进β-catenin发生核移位,同时下调细胞中E-cadherin mRNA水平;Adsiβ-catenin与rh S100A6联合处理组的S100A6 mRNA水平明显低于单独rh S100A6处理组。所有差异均具有统计学意义。结论:胞外的S100A6蛋白增强结直肠癌细胞中S100A6基因的转录,其机制可能涉及β-catenin通路的激活。; 孙晖李雪茹查何段亮袁世梅李欢李爱芳谷月周兰; 关键词：结直肠癌 S100A6 Β-CATENIN

高强度聚焦超声治疗小鼠皮下瘤后IL-6和IL-10表达的变化被引量：1: 2015年; 目的探讨高强度聚焦超声(HIFU)治疗小鼠结直肠癌皮下瘤的有效性和治疗前后IL-6和IL-10表达的变化情况。方法采用结直肠癌细胞系,建立BABL/c小鼠皮下瘤模型,数量60只;采用JC-200肿瘤治疗系统,分为6组:对照组(荷瘤假照组),治疗后1、3、5、7 d及14 d组,眼球取血,收集肿瘤组织,石蜡包埋后HE染色观察组织病理变化,并检测残余肿瘤组织和血清中IL-6和IL-10的表达水平。结果 HIFU能有效地消融肿瘤组织,靶区组织随时间的变化出现以水肿、出血、炎症细胞浸润、坏死、纤维增生为主的病理学变化。HIFU消融后肿瘤组织及外周血IL-6和IL-10的表达均表现为上升后下降的趋势。HIFU后1、3、5、7 d血清中IL-6的浓度均显著高于对照组(P<0.05),14 d检测,IL-6的表达则明显下降(P>0.05);血清中IL-10的浓度与对照组相比在1、3 d明显升高(P>0.05),1 d后达到最高峰,而血清IL-10的浓度在5、7、14 d组与对照组相比,无明显差异(P>0.05)。结论 HIFU能有效治疗结直肠癌,且肿瘤残余组织和血清中IL-6和IL-10的表达早期升高,后期IL-6明显降低,而IL-10无明显变化。; 杨敏李欢袁世梅唐祖川陈楚宋琪玲施琼周兰罗进勇何通川李发琪王智彪翁亚光; 关键词：高强度聚焦超声白细胞介素6 白细胞介素10

高强度聚焦超声抑制小鼠黑色素瘤细胞B16-F10在体内的转移被引量：1: 2015年; 目的在黑色素瘤的小鼠模型上,探讨高强度聚焦超声（HIFU）处理对黑色素瘤细胞体内转移的影响。方法皮下注射小鼠黑色素瘤细胞B16-F10以构建小鼠黑色素瘤皮下移植瘤模型;待肿瘤最长径长至7~10 mm时进行HIFU处理,并设置实验对照组（荷瘤鼠辐照HIFU但保持治疗头功率源开关关闭,即假照组）;治疗后每3 d测量肿瘤长径和短径,共观察3周,绘制肿瘤曲线,统计生存率和转移率,并通过实时荧光定量PCR测定血液中黑色素瘤细胞3个标志物的相对表达量以监测血液中循环黑色素瘤细胞的数量,它们分别是黑色素瘤相关抗原A3（MAGE-A3）、T细胞1识别的黑色素瘤抗原（MART1）以及同源转化成对框基因转录因子PAX3）;在HIFU治疗后14 d,通过尾静脉注射再次移植B16-F10细胞,观测其肺转移率。结果（1）各自的中位生存时间及95%可信区间（CI）：假照组分别为19.00 d和17.14~20.86 d,HIFU组则分别为26.00d和24.76~27.25 d,生存率差异显著（P〈0.01）;从治疗后第20天起,两组小鼠的肿瘤体积差异明显,从HIFU处理后第20天开始,包括处理后第23、26天,辐照组小鼠肿瘤体积明显小于假照组（P〈0.05）;（2）实时荧光定量PCR结果显示HIFU组小鼠在治疗后第7天的MAGE-A3、MART1和PAX3三个指标都明显低于假照组（P〈0.05）,在治疗后第14天其MAGE-A3的表达量仍然明显低于假照组（P〈0.05）;（3）在HIFU治疗后14 d通过尾静脉再次移植相同肿瘤细胞,HIFU组肺转移灶的数量明显低于假照组（P〈0.05）,肿瘤转移抑制率为42.4%。结论 HIFU处理能够抑制黑色素瘤细胞在体内转移的发生,其机制可能涉及减少肿瘤细胞从原发灶的脱落和瘤细胞在肺部的定植能力。; 李欢袁世梅杨敏段亮王海燕查何李雪茹孙晖翁亚光罗进勇何通川李崇雁王嫣李发琪王志彪周兰; 关键词：高强度聚焦超声黑色素瘤

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李欢

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