孙晖
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
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- S100A6促宫颈癌细胞增殖、迁移及其可能机制研究被引量：11
- 2017年
- 目的:探讨S100A6对人宫颈癌细胞系HeLa和SiHa增殖、迁移的影响及其机制。方法:首先采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测宫颈癌细胞HeLa、SiHa和CaSki中S100A6 mRNA的基础表达,再分别采用重组腺病毒AdS100A6和AdsiS100A6干预HeLa和SiHa细胞,Western blot验证腺病毒感染是否成功;MTT法检测细胞增殖能力,划痕愈合试验检测细胞迁移能力,Western blot检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)指标E钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)、N钙粘蛋白(N-cadherin,N-cad)及p-Akt的蛋白水平,半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR)检测PI3K-Akt信号通路下游靶基因Snail、Twist的表达。结果:与对照组相比,AdS100A6组的HeLa细胞3天时的OD_(492)值和划痕愈合率均明显升高,并伴随E-cadherin降低和N-cadherin升高;而AdsiS100A6组的SiHa细胞5天时的OD_(492)值和3天时的划痕愈合率明显降低,并伴随E-cadherin升高和N-cadherin降低;同时,在HeLa细胞中上调S100A6后p-Akt蛋白水平增加,该通路的下游靶基因Snail和Twist表达也明显上调。结论:S100A6可以增强宫颈癌细胞的增殖和迁移能力,其机制可能涉及EMT和PI3K-Akt信号通路的激活。
- 李爱芳谷月李雪茹孙晖查何谢佳卿赵佳丽周兰
- 关键词：宫颈癌S100A6上皮间质转化PI3K-AKT信号通路
- S100A9对宫颈癌Hela细胞的增殖和迁移的影响及其机制探讨被引量：4
- 2015年
- 为初步探讨S100A9在宫颈癌中的生物学作用,利用携带有人S100A9基因的腺病毒(Adh S100A9)感染于低表达S100A9的宫颈癌Hela细胞,通过MTT法检测细胞增殖能力,划痕愈合试验和Transwell试验检测细胞迁移能力,通过倒置显微镜观察细胞形态变化,采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测上皮细胞标志蛋白E-钙黏着蛋白(E-cadherin,E-cad)、间质细胞标志蛋白波形蛋白(vimentin,Vim)及Wnt/β-联蛋白(β-catenin,β-cat)信号通路相关分子的表达。结果显示,与对照组相比,过表达S100A9的Hela细胞增殖活性增强、迁移率增高,细胞形态由"铺路石"样向"梭形"转变,排列紊乱,伴随E-cad降低(P<0.05)和Vim升高(P<0.01);同时,过表达S100A9的Hela细胞中Wnt/β-cat信号通路的关键分子β-联蛋白水平增加(P<0.01),并且入核增多(P<0.01),该通路的下游靶基因c-myc、Snail及Twist表达也明显上调。该研究结果提示,S100A9促进宫颈癌Hela细胞的增殖、迁移和上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),激活Wnt/β-cat信号通路;S100A9促进增殖和迁移作用的机制可能与其促进EMT和激活Wnt/β-cat信号通路相关。
- 李雪茹孙晖查何段亮李欢袁世梅李爱芳谷月周兰
- 关键词：S100A9宫颈癌迁移上皮间质转化
- HIFU通过下调miR-181a进而促进ICAM-1表达增强小鼠抗肿瘤免疫被引量：3
- 2015年
- 目的探讨miR-181a在高强度聚焦超声(high-intensity focused ultrasound,HIFU)增强机体抗肿瘤免疫中的作用及其机制。方法 1皮下构建供HIFU治疗的黑色素瘤移植瘤小鼠模型,采用简单随机法随机分为HIFU组与荷瘤组,每组30只,采用MTT方法检测各组脾淋巴细胞对B16细胞的杀伤活性,ELISA检测小鼠血清及共培养上清中TNF-α及IFN-γ的表达水平;2qRT-PCR检测HIFU组与荷瘤组脾淋巴细胞中的差异miRNAs;3用生物信息学方法预测差异miRNAs的潜在靶基因,通过RT-PCR及Western blot验证靶基因的表达;4构建荧光素酶报告质粒进一步验证差异miRNAs的靶基因,再将差异miRNAs的mimics转染脾淋巴细胞,RT-PCR及Western blot检测其靶基因表达的变化,以进一步确认差异miRNAs对靶基因表达的影响。结果 1HIFU治疗能够抑制黑色素瘤生长,促进脾淋巴细胞分泌TNF-α和IFN-γ,增强脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性;2HIFU处理明显下调脾淋巴细胞中miR-181a的表达水平(P<0.01);3生物信息学方法预测发现共刺激分子细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)可能是miR-181a的潜在靶基因,且HIFU处理明显促进脾淋巴细胞中ICAM-1的mRNA和蛋白质的表达(P<0.01);4miR-181a mimics显著抑制pLUC-ICAM-1-3'UTR报告质粒荧光素酶的活性(P<0.01),并下调脾淋巴细胞中ICAM-1的mRNA(P<0.05)和蛋白质的表达(P<0.01)。结论 HIFU通过抑制miR-181a对共刺激分子ICAM-1的负调控作用从而增强荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫。
- 袁世梅李欢杨敏段亮查何孙晖李雪茹罗进勇李崇雁王智彪何通川周兰
- 关键词：高强度聚焦超声抗肿瘤免疫MICRORNA细胞间黏附分子-1
- 外源性S100A6蛋白对人结直肠癌细胞S100A6基因转录的影响及机制探讨
- 2016年
- 目的:探讨钙周期蛋白S100A6对人结直肠癌细胞系HCT116及SW480中S100A6基因转录的影响及机制。方法:首先采用原核表达方法制备重组人S100A6蛋白(recombinant human S100A6,rh S100A6)并鉴定;rh S100A6蛋白(终浓度为10μg/ml)、重组腺病毒Adsiβ-catenin(可表达β-catenin的siRNA)处理结直肠癌细胞HCT116、SW480及正常肠上皮细胞FHC,采用半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR)及定量实时聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,q PCR)检测S100A6 mRNA的水平,采用RT-PCR检测细胞中E-cadherin mRNA水平,采用Western blot检测并比较HCT116及SW480细胞核中β-catenin蛋白的水平变化,采用细胞免疫荧光法检测细胞中β-catenin分布的变化。结果:成功制备rh S100A6蛋白;外源性rh S100A6蛋白上调HCT116及SW480细胞中S100A6 mRNA水平和细胞核中的β-catenin蛋白水平并促进β-catenin发生核移位,同时下调细胞中E-cadherin mRNA水平;Adsiβ-catenin与rh S100A6联合处理组的S100A6 mRNA水平明显低于单独rh S100A6处理组。所有差异均具有统计学意义。结论:胞外的S100A6蛋白增强结直肠癌细胞中S100A6基因的转录,其机制可能涉及β-catenin通路的激活。
- 孙晖李雪茹查何段亮袁世梅李欢李爱芳谷月周兰
- 关键词：结直肠癌S100A6Β-CATENIN
- BCL6B对人结直肠癌LoVo细胞增殖和迁移的影响及机制被引量：3
- 2017年
- 目的:研究B细胞白血病/淋巴瘤6B(BCL6B)在人正常肠上皮细胞FHC及结直肠癌细胞LoVo中的表达水平及BCL6B对LoVo细胞增殖和迁移的影响,并探讨其相关分子机制。方法:采用RT-PCR及Western blot检测FHC细胞和LoVo细胞中BCL6B的内源性表达;用脂质体法将重组质粒pc DNA3.1-BCL6B转入LoVo细胞,运用MTT、集落形成、细胞划痕及Transwell小室实验检测BCL6B对LoVo细胞增殖和迁移的影响,采用RT-PCR及Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,Western blot检测蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果:与正常肠上皮细胞FHC相比,BCL6B在LoVo细胞中呈明显低表达;转染pc DNA3.1-BCL6B后的LoVo细胞内BCL6B水平显著增高。过表达BCL6B的实验组细胞72 h的增殖活性及划痕愈合力分别较对照组降低28.33%(P<0.01)和36.11%(P<0.05)。实验组细胞cyclin D1和MMP-9的m RNA水平分别降低39.90%(P<0.01)和77.36%(P<0.05),同时cyclin D1、MMP-9和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白水平分别降低44.00%(P<0.05)、47.06%(P<0.01)和32.88%(P<0.05)。结论:BCL6B可抑制结直肠癌LoVo细胞的增殖和迁移,其机制可能涉及PI3K/AKT信号通路的抑制。
- 谷月李爱芳孙晖李雪茹查何赵佳丽谢佳卿周兰
- 关键词：结直肠癌细胞增殖细胞迁移PI3K/AKT信号通路
- 高强度聚焦超声抑制小鼠黑色素瘤细胞B16-F10在体内的转移被引量：1
- 2015年
- 目的在黑色素瘤的小鼠模型上,探讨高强度聚焦超声（HIFU）处理对黑色素瘤细胞体内转移的影响。方法皮下注射小鼠黑色素瘤细胞B16-F10以构建小鼠黑色素瘤皮下移植瘤模型;待肿瘤最长径长至7~10 mm时进行HIFU处理,并设置实验对照组（荷瘤鼠辐照HIFU但保持治疗头功率源开关关闭,即假照组）;治疗后每3 d测量肿瘤长径和短径,共观察3周,绘制肿瘤曲线,统计生存率和转移率,并通过实时荧光定量PCR测定血液中黑色素瘤细胞3个标志物的相对表达量以监测血液中循环黑色素瘤细胞的数量,它们分别是黑色素瘤相关抗原A3（MAGE-A3）、T细胞1识别的黑色素瘤抗原（MART1）以及同源转化成对框基因转录因子PAX3）;在HIFU治疗后14 d,通过尾静脉注射再次移植B16-F10细胞,观测其肺转移率。结果（1）各自的中位生存时间及95%可信区间（CI）：假照组分别为19.00 d和17.14~20.86 d,HIFU组则分别为26.00d和24.76~27.25 d,生存率差异显著（P〈0.01）;从治疗后第20天起,两组小鼠的肿瘤体积差异明显,从HIFU处理后第20天开始,包括处理后第23、26天,辐照组小鼠肿瘤体积明显小于假照组（P〈0.05）;（2）实时荧光定量PCR结果显示HIFU组小鼠在治疗后第7天的MAGE-A3、MART1和PAX3三个指标都明显低于假照组（P〈0.05）,在治疗后第14天其MAGE-A3的表达量仍然明显低于假照组（P〈0.05）;（3）在HIFU治疗后14 d通过尾静脉再次移植相同肿瘤细胞,HIFU组肺转移灶的数量明显低于假照组（P〈0.05）,肿瘤转移抑制率为42.4%。结论 HIFU处理能够抑制黑色素瘤细胞在体内转移的发生,其机制可能涉及减少肿瘤细胞从原发灶的脱落和瘤细胞在肺部的定植能力。
- 李欢袁世梅杨敏段亮王海燕查何李雪茹孙晖翁亚光罗进勇何通川李崇雁王嫣李发琪王志彪周兰
- 关键词：高强度聚焦超声黑色素瘤
