杨纯
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- EZH2基因在人卵巢癌顺铂耐药株中的表达及其对细胞耐药性的影响被引量：9
- 2010年
- 目的:检测果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer ofzestehomolog 2,EZH2)基因在人卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株A2780/DDP及其亲本细胞株A2780中的表达差异,探讨以EZH2基因为靶向的RNA干扰能否有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性。方法:采用实时荧光定量PCR(real-time fluorogenic quantitative PCR,RFQ-PCR)和Western印迹法检测EZH2 mRNA和蛋白在A2780/DDP及A2780细胞中的表达差异。人工构建4个靶向沉默EZH2基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)质粒表达载体,脂质体法瞬时转染至A2780/DDP细胞,RFQ-PCR检测EZH2基因的沉默水平并挑选沉默效果最佳的质粒载体,G418加压筛选得到转染稳定的细胞株。RFQ-PCR和Western印迹法检测稳定转染后A2780/DDP细胞中EZH2基因的表达,MTT法检测转染细胞对DDP的耐药性。结果:A2780/DDP细胞中EZH2 mRNA和蛋白的表达量分别是A2780细胞表达量的(3.50±1.06)和(2.10±0.29)倍,差异有统计学意义(P<0.01)。稳定转染EZH2 shRNA后的A2780/DDP细胞,EZH2的mRNA及蛋白水平的表达量分别下降(83.66±5.65)%和(77.57±3.90)%(P<0.001),其对DDP的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值下降(61.33±11.40)%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EZH2基因在A2780/DDP细胞中的表达明显升高,沉默EZH2基因能有效逆转A2780/DDP细胞对DDP的耐药性。
- 胡沙王静李智敏郭剑锋于利利杨纯王泽华
- 关键词：EZH2基因人卵巢癌细胞耐药性WESTERN印迹法稳定转染A2780细胞
- let-7e甲基化沉默在卵巢癌中的作用
- 2015年
- 目的:研究let-7e甲基化沉默在卵巢肿瘤中的作用。方法:采用q MSP、RTPCR法检测30例卵巢组织、A2780细胞系(A2780、A2780/CP)中let-7e甲基化水平及let-7e表达。采用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理A2780/CP细胞,检测let-7e表达。结果:let-7e所在区域富含Cp G岛。高甲基化时,卵巢癌组织和细胞中let-7e表达量降低,let-7e表达与DNA甲基化呈负相关(r=-0.6194,P=0.0003)。5-Aza-CdR处理卵巢癌细胞后,let-7e表达明显升高。结论:卵巢癌组织和细胞中let-7e表达受DNA甲基化负调控。DNA甲基化下调let-7e表达可能参与卵巢癌的发生及进展,也与卵巢癌化疗耐药有关。
- 王齐月杨纯蔡晶王泽华
- 关键词：甲基化微小RNA卵巢癌耐药
- microRNA let-7e逆转人卵巢癌细胞顺铂耐药及其作用机制被引量：2
- 2014年
- 目的:研究人类microRNA let-7e(hsa-let-7e)在人卵巢癌顺铂耐药细胞中的表达及其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR法检测let-7e在卵巢癌亲本细胞株A2780及耐顺铂卵巢癌细胞A2780/CP中的表达;采用实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测A2780细胞和A2780/CP细胞中果蝇zeste基因增强子同源物2(EZH2)mRNA和蛋白的表达。将let-7e模拟物(mimics)及阴性对照(negative control,NC)转染A2780/CP细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot法分别检测EZH2 mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞的半数抑制浓度(IC50),台盼蓝染色实验检测经顺铂作用不同时间后的细胞存活率。结果:与A2780细胞比较A2780/CP细胞中let-7e呈低表达、EZH2mRNA和蛋白相对表达水平显著增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。A2780/CP细胞转染let-7e mimics后,EZH2 mRNA和蛋白的相对表达水平较阴性对照组明显下降(P<0.05),细胞对顺铂的敏感性显著增强,其半数抑制浓度(IC50值)与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。顺铂作用于转染let-7e mimics的A2780/CP细胞后,细胞的存活率较阴性对照组明显降低(P<0.05)。结论:let-7e在卵巢癌耐药细胞A2780/CP中异常低表达,上调其表达可部分逆转细胞耐药性。let-7e可能通过作用于靶蛋白EZH2参与卵巢癌细胞顺铂耐药的发生和发展。
- 杨纯蔡晶胡沙王齐月杨强王泽华
- 关键词：卵巢癌耐药顺铂EZH2EZH2
