郭慧敏
- 作品数：15 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 双抗夹心ELISA检测兔出血症病毒抗原方法的建立及初步评估被引量：3
- 2016年
- 为建立一种快速、特异性强的用于检测兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)抗原的双抗夹心ELISA方法,本研究通过抗体配对实验,确定以抗兔出血症病毒结构蛋白VP60单克隆抗体9H9为捕获抗体,辣根过氧化物酶标记的9H9为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法。通过优化,确定最佳条件为:0.5μg/m L稀释后的9H9作为捕获抗体,底物显色液37℃包被2 h 4℃过夜,1%明胶溶液37℃封闭2 h,用含10%胎牛血清的PBST按5μg/m L稀释后的辣根过氧化物酶标记的9H9作为检测抗体,37℃作用15 min。建立的ELISA方法与杯状病毒科其他病毒无交叉反应,应用本方法和RT-PCR方法对85份兔肝脏样品进行检测,证明双抗夹心ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,有望作为临床快速检测的一种简便方法。
- 郭慧敏谭永贵缪秋红朱杰刘腾陈宗艳李传峰刘光清
- 关键词：兔出血症病毒单克隆抗体
- 新型兔出血症病毒(RHDV2)VP60蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备被引量：3
- 2016年
- 为了表达含有新型兔出血症病毒(RHDV2)衣壳蛋白VP60基因的重组蛋白,利用合成的含VP1基因的质粒pUC-VP60为模板,通过PCR扩增获得VP60基因,并将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组质粒pET-32a(+)-VP60。转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG诱导表达VP60重组蛋白,纯化重组蛋白并免疫小鼠,制备抗VP60的多克隆抗体。Western-blot分析和间接免疫荧光试验检测结果显示,该抗体具有良好的免疫原性。本试验成功制备的VP60蛋白及多克隆抗体,为预防RHDV2及RHDV2 VP60的功能研究奠定了良好基础。
- 谭永贵朱杰郭慧敏吴巧梅陈宗艳李传峰刘光清
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- SYBR Green II荧光定量PCR结合熔解曲线鉴别不同亚型兔病毒性出血症病毒方法的建立被引量：2
- 2017年
- 本研究建立了一种荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR)结合熔解曲线区分不同亚型兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)方法。根据GenBank数据库中已公布的不同亚型RHDV(经典RHDV和RHDV2)的衣壳蛋白VP60序列保守区设计了1对特异性引物,利用SYBR Green II荧光染料,在实时荧光定量PCR方法的基础上结合熔解曲线进行分析,经典RHDV和RHDV2熔解温度(Tm)分别为(86.3±0.1)℃和(85.1±0.1)℃,扩增产物的熔解曲线分析均只出现单特异峰。结果表明,本研究建立的方法能够快速地鉴别经典RHDV和RHDV2。
- 谭永贵刘腾朱杰郭慧敏吴巧梅李琦缪秋红陈宗艳李传峰刘光清
- 关键词：兔病毒性出血症病毒荧光定量PCR熔解曲线
- 绵羊BST-2B基因的原核表达及多克隆抗体的制备
- 2017年
- 为了表达含有绵羊BST-2B(o BST-2B)基因的重组蛋白,用RT-PCR方法扩增绵羊肺细胞的o BST-2B基因,并将其克隆至原核表达载体p GEX-4T-1中,构建重组表达质粒p GEX-4T-o BST-2B。将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组o BST-2B蛋白。将表达产物纯化后免疫BALB/c小鼠,制备抗o BST-2B的多克隆抗体。蛋白免疫印迹分析和间接免疫荧光试验检测结果显示,该抗体具有较好的反应原性。本试验成功制备的o BST-2B蛋白及多克隆抗体,为研究o BST-2B蛋白的生物学功能及羊传染病的致病机制提供了良好的基础材料。
- 刘腾张莉谭永贵郭慧敏朱杰缪秋红李传峰陈宗艳刘光清
- 关键词：原核表达多克隆抗体
- 新型兔出血症病毒研究进展被引量：5
- 2016年
- 兔出血症病毒属于杯状病毒科,兔病毒属的成员之一,能够引起家兔的典型兔病毒性出血症。2010年,研究学者首次在法国发现一例非典型兔出血症疫情,该病原与经典兔出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)基因序列差异明显,被称为RHDV2。研究发现该病原能够与经典RHDV发生部分交叉免疫保护,该病原能够感染幼龄家兔而且是唯一一个能够跨物种感染的兔病毒属成员。该病的迅速传播,严重威胁了以兔为中心的生态平衡。目前,该病毒尚未在国内有报道,但是不排除潜在的隐性感染。因此,对该病原的分析研究对于控制该病原的传播具有非常重大的意义。
- 谭永贵缪秋红吴巧梅朱杰郭慧敏刘光清
- 基于SYBR GreenⅡ的荧光定量PCR结合熔解曲线鉴别不同亚型兔出血病毒方法的建立
- 引言兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)为单股正链RNA病毒,属于杯状病毒科(Caliciviridae)、兔病毒属(Lagovirus)。该病毒可引发兔发生急...
- 谭永贵刘腾朱杰郭慧敏吴巧梅李琦缪秋红陈宗艳李传峰刘光清
- 文献传递
- 稳定表达兔出血症病毒VPg蛋白RK-13细胞系的构建
- 兔病毒性出血瘟病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)为单股正链RNA病毒,属于杯状病毒科(Caliciviridae)兔病毒属(Lagovirus).该病毒可使兔发生急性、败血...
- 朱杰谭永贵郭慧敏缪秋红孟春春李传峰陈宗艳刘光清
- 关键词：RHDVVPG
- 人工构建能够在兔源细胞中增殖的兔出血症病毒突变株
- 通过定点突变RHDV衣壳蛋白表面高度变异区,构建了含突变位点RGD的RHDV基因组全长重组质粒pRHDV。然后,利用BSR细胞进行拯救。IFA、Western blot、RT-PCR和透射电子显微镜检测结果均证明成功拯救...
- 朱杰郭慧敏谭永贵缪秋红孟春春李传峰陈宗艳刘光清
- 关键词：RGD体外培养
- 文献传递
- 猫杯状病毒的分离鉴定及其全基因组的克隆与序列分析
- 本实验采用了巢氏PCR的方法对一只病猫进行了FCV的检测,结果出现阳性。接种CRFK细胞,出现很典型的细胞病变。利用4对特异性引物,克隆出FCV的全基因组。结果显示,成功分离出1株猫杯状病毒(FCV),暂命名为CH-SH...
- 郭慧敏朱杰谭永贵缪秋红李传峰孟春春陈宗艳刘光清
- 关键词：全基因组
- 文献传递
- 稳定表达兔岩藻糖基转移酶RK13细胞系的建立
- 2015年
- 为了构建稳定表达兔岩藻糖基转移酶(fucosyltransferase,FUT2)的RK13细胞系,本研究将FUT2基因编码序列插入到慢病毒载体p LOV-GFP-3Flag中,构建了p LOV-3Flag-FUT2重组质粒。将p LOV-3Flag-FUT2与包装质粒ps PAX2和外膜质粒p MD2.G共转染293T细胞,获得重组病毒样颗粒。用含病毒样颗粒的细胞培养上清液感染RK13细胞,并通过嘌呤霉素筛选、纯化,获得稳定表达FUT2的细胞系,命名为RK-FUT2细胞。连续培养10代后,利用PCR、RT-PCR和Western blot方法鉴定,结果表明,RK-FUT2细胞系能够稳定表达兔岩藻糖基转移酶。该细胞系为研究FUT2在兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)感染过程和致病机制中的作用提供了有力工具。
- 朱杰缪秋红郭慧敏谭永贵李传峰孟春春陈宗艳刘光清
- 关键词：兔病毒性出血症病毒
