王江
- 作品数：14 被引量：8H指数：2
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- RNA干扰PKM2表达诱导人肺癌细胞A549凋亡和自噬发生
- <正>肿瘤细胞一个重要特点是'Warburg effect'。这种效应源于M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤细胞中高表达,使细胞从氧化磷酸化代谢向糖酵解途径转变。虽然许多研究结果已经揭示了PKM2在肿瘤发生发展过程中的关...
- 王江杨国宇王月影杜丽丽张雪梅韩莹倩
- 文献传递
- 猪MC4R基因突变体真核表达载体的构建及功能研究
- 2016年
- 为研究MC4R基因不同突变体的功能差异,本研究从猪肌肉组织中克隆得到MC4R基因的编码序列,将克隆片段与pcDNA3.1真核表达载体进行KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切,连接形成重组表达载体MC4R1,将载体转染BHK细胞后Western blotting检测蛋白表达。通过点突变法得到MC4R基因在707/892位点的3个突变载体,将突变载体瞬时转染到BHK细胞,采用免疫荧光对细胞进行标记,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞检测荧光表达,结果发现,克隆的MC4R1基因序列长度大约1 000bp,在707/892位点序列为G/G,将构建的真核表达载体MC4R1转染BHK细胞,经过Western blotting检测发现MC4R1蛋白正常表达;通过点突变法得到在707/892位点突变的突变载体MC4R2(G/A)、MC4R3(A/G)、MC4R4(A/A),经过激光共聚焦观察荧光表达后发现,突变受体在细胞膜上均有正常表达,流式检测发现4个突变受体表达的荧光平均强度并没有显著差异(P>0.05)。通过构建MC4R基因突变载体后发现,707/892位点突变对于MC4R受体在细胞膜的表达没有显著影响,其具体机制作用还需深入研究。
- 韩立强郭豫杰鲁维飞张欣褚贝贝王江杨国宇
- 关键词：突变体
- 猪cGAS基因的克隆与原核表达被引量：2
- 2016年
- 【目的】环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cyclic guanosine monophosphate-adenosine monophosphate synthase,c GAS)是近期在哺乳动物细胞中发现的一种新型核酸转移酶,能够识别胞质DNA,催化ATP和GTP生成第二信使c GAMP,继而通过STING依赖的方式活化转录因子IRF3,启动机体固有免疫。通过构建含猪c GAS基因的重组质粒p Bb B3a-His6-Nus A-c GAS,进行原核表达,得到c GAS蛋白,为进行体外催化合成c GAMP及探讨其在天然免疫过程中的作用奠定基础。【方法】以猪脾脏c DNA为模板克隆猪c GAS的蛋白编码区(open reading frame,ORF),用非酶连接技术将此基因克隆至丙酸诱导型原核表达载体p Bb B3a-His6-Nus A-LIC中。菌液PCR进行阳性克隆鉴定并测序。将测序鉴定正确的克隆菌液提取质粒,转化至E.coli BL21(DE3)中。当细菌生长到对数期时,丙酸钠诱导表达His6-Nus A-c GAS融合蛋白,用20 mmol·L^(-1)丙酸钠在20℃,180 r/min分别诱导0、2、4、6、8、10 h,以确定最佳诱导时间;然后,分别用0、5、10、15、20、25、30、35、40、45 mmol·L^(-1)的丙酸钠在20℃,180 r/min诱导6 h,以确定最佳诱导丙酸钠诱导浓度;另外,分别在20℃,30℃,37℃条件下用20 mmol·L^(-1)丙酸钠,180 r/min培养6 h,以确定最佳诱导温度。筛选最佳诱导条件,并用SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。【结果】(1)本试验成功克隆了猪c GAS基因,其ORF长度为1 494 bp;(2)构建了c GAS丙酸诱导型原核表达载体p Bb B3a-His6-Nus A-c GAS;(3)His6-Nus A-c GAS融合蛋白在37℃,添加20 mmol·L^(-1)丙酸钠,诱导6 h时表达量最高。(4)His6-Nus A-c GAS融合蛋白在裂解菌液的上清和沉淀中均有表达,相对分子质量为111.87 k D。【结论】运用大肠杆菌表达系统成功表达了c GAS融合蛋白,本试验为体外表达c GAS融合蛋白提供技术方法。
- 杜丽丽樊爽爽李赛赛陈佩格陈磊孙士平樊文杰王江王月影钟凯
- 关键词：原核表达
- 环二核苷酸合成酶基因丙酸诱导型表达载体的构建及原核表达
- 环二核苷酸是一种重要的第二信使分子，研究表明它们能传递多种细胞外的不同信息，调节大量不同的生理生化过程，可用于免疫治疗、免疫预防或疫苗佐剂用于人和动物的临床研究。
- 韩莹倩王江孔江南张超杨国宇
- 关键词：原核表达
- 生态文明建设中转基因科普体系的探索被引量：1
- 2018年
- 生态文明建设的目标之一是实现人与自然和谐相处,在开展生态文明建设的大背景下,阐明转基因技术与生态文明间的相互关系,开展转基因技术的科普宣传已成为当务之急。本文就生态文明建设与转基因技术及科普宣传间的关系进行探讨,分析了我国科普宣传的现状,并从顶层设计方面探讨转基因科普体系建立的内容和策略。
- 韩立强郭豫杰王江杨国宇
- 关键词：生态文明转基因
- PK-15细胞敲除TANK结合激酶1基因促进猪伪狂犬病病毒复制的研究被引量：4
- 2019年
- TANK结合激酶1(TBK1)是病毒感染时IRF3、IRF7磷酸化及Ⅰ型干扰素表达的关键酶,在抗病毒天然免疫应答和获得性免疫应答中发挥重要作用。为研究TBK1基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响,首先利用CRISPR/Cas9技术构建猪TBK1基因稳定敲除PK-15细胞系,并利用CCK-8检测敲除TBK1对PK-15细胞活力的影响。然后利用流式细胞术检测PRV-GFP荧光强度,用RT-qPCR检测PRV-gB、PRV-gE、PRV-TK、IL-1β、IFN-β和ISG15的转录水平,用Westernblot检测PRV-gB和PRV-gE蛋白表达水平,以及通过滴度测定检测子代病毒的感染力,综合评价TBK1基因稳定敲除PK-15细胞对PRV病毒复制的影响。结果显示:T7E1检测结果显示TBK1基因外显子2区的3个sgRNA靶位点均切出了目的条带,选取编辑效率最高的TBK1-sgRNA1细胞系进行单克隆化培养,获取6株稳定敲除TBK1基因的单克隆细胞,随机选取4号细胞株进行CCK-8检测,结果显示敲除TBK1对PK-15细胞活力无影响。流式检测结果显示PRV-GFP感染阳性细胞占总PK-15细胞的56.89%,PRV-GFP感染阳性细胞占总PK-15-TBK1-/-细胞的77.95%,表明PK-15-TBK1-/-细胞可以促进PRV-GFP复制。RT-qPCR及WB检测显示该细胞系可以促进PRVmRNA转录和蛋白表达。滴度测定结果显示,PRV-QXX在PK-15细胞复制后TCID50为10^6.8TCID50·0.1mL^-1,而在PK-15-TBK1-/-细胞中复制后TCID50为10^8.5TCID50·0.1mL^-1。另外,RT-qPCR结果显示该细胞系可以抑制PRV感染引起的IL-1β、IFN-β和ISG15转录上调。以上结果表明TBK1基因敲除PK-15细胞系促进PRV复制,可能与IL-1β、IFN-β和ISG15转录水平抑制有关。
- 刘晓贺巴根李坚韩莹倩张爽明胜利杜永坤褚贝贝杨国宇王江
- 关键词：猪伪狂犬病病毒
- 猪干扰素调节因子7的克隆及原核表达
- 2014年
- 为了进一步研究猪IRF7基因所编码蛋白质的生物学功能,本研究以猪十二指肠cDNA为模板扩增IRF7基因(RF区;将该基因克隆至原核表达载体pET-21b(+)中,获得pET-21b—IRF7重组质粒。经测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达His—IRF7融合蛋白,并利用Western blot进行鉴定。结果表明:(1)成功克隆了1 461 bp IRF7 ORF区;(2)His—IRF7融合蛋白在裂解菌液的上清和沉淀中均有表达,相对分子质量为60.5ku。结果提示,运用大肠杆菌表达系统成功表达IRF7融合蛋白,为猪IRF7基因相关功能研究提供了基础材料。
- 张雪梅杜丽丽刘福涛王江郭豫杰李宏基杨国宇
- 关键词：基因克隆原核表达
- 畜牧兽医类本科《分子生物学》理论及实践的改革探索
- 2016年
- 分子生物学技术与畜牧兽医相结合是21世纪畜牧业发展的热点,给畜牧兽医业带来了广阔的发展前景。为了培养符合现代畜牧兽医需要的复合型人才,需重视《分子生物学》的理论及实践教学。本文针对《分子生物学》课程的教材内容、教学方法以及实验操作等方面提出探索性改革意见,以期提高学生的综合素质及竞争力。
- 王江褚贝贝鲁维飞张超郑悦亭杨国宇
- 关键词：分子生物学教学
- 猪TRIM11基因克隆及其促进猪伪狂犬病毒在体外增殖的研究
- 2016年
- 为初步研究猪TRIM11的免疫学功能,以猪颌下淋巴结cDNA为模板扩增TRIM11基因cDNA并对该基因进行了蛋白质结构预测和组织表达谱分析,将该基因与PiggyBac载体相连获得真核表达载体PB-TRIM11,之后转染PK15细胞获得稳定表达细胞系。用猪伪狂犬病毒(PRV)刺激过表达TRIM11PK15细胞和对照组细胞后,于不同时间收获细胞上清,比较两组细胞上清中病毒滴度变化。结果表明,猪TRIM11的ORF长度为1 407bp,编码468个氨基酸,该氨基酸序列含有3个TRIM家族保守的结构域。组织表达谱分析显示,猪TRIM11在脂肪组织、肺的表达量较高,而在心、回肠、十二指肠、直肠中的转录量较低。成功克隆了猪TRIM11cDNA序列并构建了真核转录载体PB-TRIM11,qRT-PCR检测结果表明TRIM11在PK15细胞系中成功表达。检测感染PRV后过表达TRIM11PK15细胞和对照组细胞上清液病毒的TCID50发现过表达TRIM11组的病毒滴度始终高于对照组。过表达TRIM11有一定的促进PRV增殖的作用,为进一步研究猪TRIM11在天然免疫中的作用奠定了基础。
- 宋爽曾磊鲁绍芳郭珍珍鲁维飞韩立强王江王月影褚贝贝杨国宇
- 关键词：猪伪狂犬病毒病毒增殖稳定细胞系
- 青年教师提高动物生物化学理论教学效果的方法
- 2014年
- 动物生物化学是高等农业院校畜牧与兽医专业的一门必修专业基础课。针对该课程的特点并结合教学工作经验,阐述了提高动物生物化学理论教学的方法,以期为青年教师的教学工作提供借鉴。
- 王江褚贝贝杨国宇
- 关键词：动物生物化学理论教学青年教师教学效果
