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茶树CsRAV2转录因子基因的克隆与表达特性分析被引量：7: 2014年; RAV转录因子是AP2/ERF家族的成员之一,在植物生长发育和逆境调控中起着重要作用。本研究以安吉白茶和迎霜这两个茶树(Camellia sinensis)品种为试验材料,通过PCR和RT-PCR方法分别从两种茶树的DNA和cDNA中克隆得到CsRAV2基因。分析显示,来源于两种茶树中的CsRAV2基因全长均为1 089 bp,没有内含子,分别编码362个氨基酸,含有相对保守的AP2结合域和B3结构域,具有典型的植物RAV类转录因子特征。从氨基酸组成成分、理化性质、亲水性/疏水性、三级结构上分析显示,茶树中CsRAV2转录因子是亲水性蛋白。茶树中CsRAV2转录因子与拟南芥AtRAV具有相似的三级结构。实时定量PCR分析表明,茶树中CsRAV2基因在茶树根中表达量最高,高温、低温、NaCl处理均能诱导该基因表达,不同品种间存在差异。; 吴致君黎星辉房婉萍周琳赵真庄静; 关键词：茶树转录因子进化分析

茶树NADPH氧化酶基因的克隆、亚细胞定位与表达分析被引量：7: 2015年; 以茶树(Camellia sinensis)‘迎霜’为试验材料,采用同源克隆的方法,利用RACE和RT-PCR技术获得茶树NADPH氧化酶基因Cs RBOHA的c DNA全长(Gen Bank登录号:KJ782632)。该基因全长3 157 bp,开放阅读框2 769 bp,编码922个氨基酸。生物信息学分析显示,该基因编码的蛋白分子量为103.33 k D,理论等电点为9.28;C端序列较保守,N端序列保守性较低,与烟草和蓖麻的相似性达79%,进化关系最近;蛋白结构具有典型的家族特征。该蛋白分布于细胞质膜上,与预测结果一致。实时荧光定量PCR结果显示,该基因的表达存在组织特异性,并且在低温(4℃)、高盐(200 mmol·L-1 Na Cl)、ABA(200 mg·L-1)和干旱(10%PEG 6000)条件下出现不同程度的上调。; 王明乐王伟东赵真黎星辉; 关键词：NADPH氧化酶基因克隆亚细胞定位实时荧光定量

茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子基因CsPPT的克隆与表达分析被引量：2: 2015年; 以白叶1号为试验材料,通过RT-PCR和RACE技术克隆获得茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子基因Cs PPT(Gen Bank登录号:KJ652972)。Cs PPT完整ORF长度为1 227 bp,编码408个氨基酸,蛋白分子量为44.7k Da,理论等电点为10.16;无信号肽位点,属于非分泌型蛋白;建立了茶树Cs PPT蛋白的系统发育树;磷酸化修饰预测该蛋白质多肽链中共有26个磷酸化位点;TMHMM预测表明Cs PPT蛋白为跨膜蛋白;亚细胞定位发现,Cs PPT蛋白定位于叶绿体上,推测Cs PPT蛋白可能定位于叶绿体膜上。荧光定量PCR结果表明Cs PPT基因在茶树花中表达量最高,其次为芽、叶和嫩茎,根中最低。; 赵真陈暄王明乐王伟东Najeeb Ahmed黎星辉; 关键词：茶树基因克隆亚细胞定位

本科生毕业设计(论文)过程性管理与评价改革实践研究——以南京农业大学园艺学院为例: 2022年; 毕业设计(论文)是本科人才培养过程中必须完成的专业教学环节。本科生毕业设计(论文)是对本科生大学四年学习成果的总结,也是学位资格认证的重要依据。该文以南京农业大学园艺学院本科生为例,通过对改革前本科生毕业设计(论文)存在的问题、针对问题进行的改革措施以及第一年的改革成效和存在问题的论述,提出更符合本学院实际情况的改革建议。; 赵真陈暄陈新张清海; 关键词：本科生

不同发酵程度茶叶对茶垢形成的影响: 2022年; 使用自来水冲泡绿茶、黄茶、乌龙茶和红茶等不同发酵程度的茶叶,将其产生的茶垢分别进行定量、傅立叶红外光谱(FTIR)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)以及扫描电子显微镜-能谱(SEM-EDS)等理化性质分析。结果表明,红茶产生的茶垢质量显著小于其他茶类,而绿茶、黄茶和乌龙茶的茶垢质量无显著差异;4种茶垢的FTIR极其相似,都含有-OH、-C=O、苯环和-COC-等官能团;茶垢主要成分的相对分子质量相同,均为454.8;SEM-EDS分析发现,茶垢外形表现出皲裂状,且主要由有机元素C、O组成,同时含有Ca、K、Mg、Si等无机元素。对4种茶汤进行生化成分分析发现,茶垢质量与茶多酚含量呈正相关。用自来水冲泡茶多酚,将茶多酚茶垢与绿茶茶垢进行对比分析,结果证实茶垢由有机多酚物质与无机元素结合组成。; 周少锋乾云菲赵真陈暄黎星辉; 关键词：发酵茶垢茶多酚

两种原核表达载体对CsPPO蛋白表达活性的影响被引量：2: 2018年; 为了选择合适载体,获得稳定表达且具有高活性的可溶性茶树多酚氧化酶,本研究以茶树叶片为材料,克隆茶树多酚氧化酶基因(CsPPO),切除含43个氨基酸和70个氨基酸的肽段后分别与pET32a载体、pMAL-c5X载体进行重组构建原核表达载体,分别命名为pET32a-CsPPO_(43)、pET32a-CsPPO_(70)、pMALc5X-CsPPO_(43)、pMALc5X-CsPPO_(70),利用E.coil Transetta(DE3)菌株进行表达,经SDS-PAGE电泳检验,pMAL-c5X载体表达的目的蛋白易于提取,大量出现在上清液中;而pET32a载体表达后蛋白则基本存在于沉淀中。利用邻苯二酚、ECG、EC 3种底物在410 nm处检测CsPPO蛋白活性发现,pMALc5X-CsPPO对不同底物反应时酶活性随时间增加均呈现明显"S"型变化,表明茶树PPO氧化儿茶素类的反应并不是匀速过程。pMALc5X-CsPPO_(43)比活力比pMALc5X-CsPPO_(70)的高,其中pMALc5X-CsPPO_(43)与EC反应时酶比活力最高,最大比活力为1.45×10~6 U·mg^(-1)。因此,可利用pMALc5X-CsPPO_(43)合成工业用PPO,为进一步研究其与儿茶素的反应机理,利用体外酶法高效获得茶黄素奠定基础。; 甘玉迪孙康李会娟堵忠颖赵真庞鑫黎星辉陈暄; 关键词：茶树多酚氧化酶原核表达酶活性

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赵真