王伟东
- 作品数：11 被引量：41H指数：5
- 供职机构：南京农业大学园艺学院茶学研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家自然科学基金江苏省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 茶树磷转运蛋白基因CsPT4的克隆、亚细胞定位及表达分析被引量：2
- 2017年
- 茶园中磷肥的利用效率取决于茶树体内与磷元素吸收、转运及生理利用等相关蛋白的协同调控,而磷转运蛋白(Phosphate transporter proteins,Phts)在此过程中起着关键的调控作用。本研究以茶树品种龙井长叶(Camellia sinensis cv.Longjing-changye)为试验材料,采用同源克隆的方法首次克隆获得茶树磷转运蛋白编码基因Cs Pht1:4(Cs PT4)的全长c DNA。该基因全长1 642 bp,开放阅读框(ORF)1 620 bp(Gen Bank登录号:KY132100),编码539个氨基酸。生物信息学分析显示,Cs PT4基因编码蛋白分子量为59.12 k D,理论等电点(p I)为8.51;具有典型的Pht1家族特性:"6-亲水-6"跨膜结构。亚细胞定位结果显示,该蛋白分布于质膜上,与Softberry软件预测结果一致。荧光定量PCR表明:Cs PT4在正常生长的茶树根、茎、嫩叶、老叶中均有表达,在老叶中的表达量较高,在根部表达量最低。低磷处理,根和叶中Cs PT4上调表达水平均先上升后下降;根部Cs PT4表达量48 h内各个时间点均高于叶部。缺磷处理,根和叶中Cs PT4上调表达水平均升高;根部和叶部分别在72 h和48 h达最大值。本研究为茶树响应低磷的分子机制提供了参考。
- 辛华洪王伟东王明乐马青平甘玉迪黎星辉
- 关键词：茶树基因克隆亚细胞定位
- 自然低温对茶树内源激素含量的影响被引量：6
- 2016年
- 以南京中山陵茶园中十年生龙井长叶茶树为试验材料,用酶联免疫法(ELISA)测定自然低温下茶树叶片内源激素含量的变化,以探讨自然低温下茶树内源激素变化规律。结果显示,自然越冬期间,茶树叶片中吲哚乙酸(IAA)含量的波动幅度最大,脱落酸(ABA)次之,而赤霉素(GA_3)与玉米素核苷(ZR)波动幅度较小;同时,除了ABA外,茶树其他内源激素IAA、ZR和GA_3含量变化趋势一致;激素间比值变化和相关性分析显示ZR与GA_3、ZR与IAA、IAA与GA_3含量变化极显著相关,ABA与IAA、ABA与ZR呈显著正相关。试验结果表明,茶树内源激素之间关系密切,茶树可能通过调控ABA/(GA_3+IAA+ZR)的比值来适应自然低温环境。
- 曾光辉马青平王伟东周琳尹盈黎星辉
- 关键词：茶树自然低温内源激素
- 茶树小分子量热激蛋白基因CsHSP17.2的克隆与表达分析被引量：9
- 2015年
- [目的]进一步了解茶树小分子量热激蛋白基因Cs HSP17.2在逆境胁迫条件下的分子生物学功能。[方法]利用RT-PCR技术从茶树‘迎霜’中克隆得到Cs HSP17.2基因,运用生物信息学软件分析其核苷酸和编码蛋白,通过Real-time PCR分析其表达模式。[结果]该基因开放阅读框长度为453 bp,编码150个氨基酸,蛋白质相对分子质量为17.2×103,理论等电点5.56;无信号肽位点,属于非分泌型蛋白;被定位于细胞质中。系统发育树分析表明,茶树Cs HSP17.2与水稻(Gen Bank登录号:P27777)和花生(ABC41131)的进化关系较近,属于小分子量热激蛋白基因家族第Ⅰ亚族。qRT-PCR分析发现,茶树Cs HSP17.2属于组成型基因;高温(38℃)处理1 h能显著提高Cs HSP17.2 mRNA的相对表达量(P<0.05);干旱(100 g·L-1PEG 6000)、高盐(200 mmol·L-1Na Cl)和外源脱落酸(200 mg·L-1ABA)处理条件下,该基因的转录水平均出现不同程度的上调。[结论]克隆得到茶树‘迎霜’小分子量热激蛋白基因Cs HSP17.2,其在花中表达量最高,且响应高温、干旱、高盐和外源脱落酸胁迫。
- 王明乐朱旭君王伟东王炫清林明露黎星辉
- 关键词：小分子量热激蛋白克隆实时荧光定量PCR
- 茶树CsSPMS基因全长cDNA克隆和时空表达分析被引量：1
- 2014年
- 为探究精胺合成酶(spermine synthase,SPMS)与茶树(Camellia sinensis)耐寒性的关系,以茶树品种‘迎霜’为试验材料,利用简并引物PCR扩增技术结合5′/3′RACE方法,获得与低温胁迫相关的Cs SPMS片段cDNA全长序列(Gen Bank登录号为KJ580429)。该序列全长1 374 bp,包含1 113 bp的完整开放阅读框(ORF),编码371个氨基酸,预测分子量41.28 kD;构建亚细胞定位载体pJIT166-GFP/SPMS,亚细胞定位结果显示CsSPMS定位在细胞核上。荧光定量PCR分析表明C SPMS在根、茎、叶、芽、花和果中都有表达,在根、茎中表达量较高;低温胁迫处理下不同组织CsSPMS的表达量,在叶片中2 h达到峰值,而在根中12 h达到高峰;在低温条件下4个茶树品种的耐寒性与CsSPMS表达量密切相关。
- 胡靖妍朱旭君王伟东王明乐尹盈黎星辉
- 关键词：茶树亚细胞定位基因克隆基因表达
- 茶树花粉中丙酮酸脱氢酶(CsE1α)的定位分析及其启动子的克隆与表达
- 2015年
- 根据以往试验获得的Cs E1α的c DNA全长序列,利用TAIL-PCR克隆Cs E1α启动子。测序验证与生物信息学分析后发现,该启动子片段长336 bp,含有2个CAAT-box,2个TATA-box,2个GATA-box,1个LTR,1个G-box等顺式作用元件。构建载体转入洋葱内表皮细胞瞬时表达,启动子可启动下游报告基因,使荧光蛋白表达于整个细胞,表明所克隆的启动子具有启动功能。Cs E1α与GFP融合蛋白瞬时表达表明Cs E1α定位于线粒体。本实验为下一步转基因拟南芥稳定表达,进一步研究Cs E1α基因的表达调控,探讨茶树花粉抗寒的分子生物学机理奠定基础。
- 杜昱林王伟东王玉花黎星辉
- 关键词：茶树丙酮酸脱氢酶启动子亚细胞定位抗寒
- 一氧化氮(NO)调节低温胁迫下茶树花粉萌发和花粉管伸长
- 低温条件下茶树花粉能够萌发,但其萌发和花粉管伸长机理仍不清楚。以茶树花粉为材料,利用激光共聚焦和电子自旋顺磁共振(EPR)技术测定低温胁迫下茶树花粉管中NO含量;利用HPLC测定茶树花粉管中cGMP含量。结果显示:低温处...
- 李孝诚蒋芯王伟东王玉花
- 关键词：一氧化氮花粉管CGMP
- 文献传递
- 茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子基因CsPPT的克隆与表达分析被引量：2
- 2015年
- 以白叶1号为试验材料,通过RT-PCR和RACE技术克隆获得茶树磷酸烯醇式丙酮酸转运子基因Cs PPT(Gen Bank登录号:KJ652972)。Cs PPT完整ORF长度为1 227 bp,编码408个氨基酸,蛋白分子量为44.7k Da,理论等电点为10.16;无信号肽位点,属于非分泌型蛋白;建立了茶树Cs PPT蛋白的系统发育树;磷酸化修饰预测该蛋白质多肽链中共有26个磷酸化位点;TMHMM预测表明Cs PPT蛋白为跨膜蛋白;亚细胞定位发现,Cs PPT蛋白定位于叶绿体上,推测Cs PPT蛋白可能定位于叶绿体膜上。荧光定量PCR结果表明Cs PPT基因在茶树花中表达量最高,其次为芽、叶和嫩茎,根中最低。
- 赵真陈暄王明乐王伟东Najeeb Ahmed黎星辉
- 关键词：茶树基因克隆亚细胞定位
- 低温对茶树花粉管抑制作用与NO关系的研究被引量：5
- 2013年
- 以无性系茶树品种‘龙井43’花粉为材料,研究了低温对茶树花粉萌发和花粉管伸长的影响及其与一氧化氮(NO)的关系。结果显示低温显著抑制了茶树花粉萌发和花粉管伸长,且表现出明显的时间依赖性;外源NO供体硝普钠(SNP)产生类似的抑制效应,并表现出明显的浓度依赖性,其抑制效应被NO清除剂(cPTIO)和一氧化氮合酶(NOS)抑制剂(L-NNA)所缓解。此外,低温处理促进茶树花粉管NO释放并伴随着NOS活性的提高。上述研究结果表明,低温抑制茶树花粉萌发和花粉管伸长与其诱导NO释放有关,且低温诱导的NO释放部分依赖于NOS催化产生。
- 王伟东蒋芯杜昱林王玉花黎星辉
- 关键词：茶树花粉萌发花粉管伸长一氧化氮
- 茶树NADPH氧化酶基因的克隆、亚细胞定位与表达分析被引量：7
- 2015年
- 以茶树(Camellia sinensis)‘迎霜’为试验材料,采用同源克隆的方法,利用RACE和RT-PCR技术获得茶树NADPH氧化酶基因Cs RBOHA的c DNA全长(Gen Bank登录号:KJ782632)。该基因全长3 157 bp,开放阅读框2 769 bp,编码922个氨基酸。生物信息学分析显示,该基因编码的蛋白分子量为103.33 k D,理论等电点为9.28;C端序列较保守,N端序列保守性较低,与烟草和蓖麻的相似性达79%,进化关系最近;蛋白结构具有典型的家族特征。该蛋白分布于细胞质膜上,与预测结果一致。实时荧光定量PCR结果显示,该基因的表达存在组织特异性,并且在低温(4℃)、高盐(200 mmol·L-1 Na Cl)、ABA(200 mg·L-1)和干旱(10%PEG 6000)条件下出现不同程度的上调。
- 王明乐王伟东赵真黎星辉
- 关键词：NADPH氧化酶基因克隆亚细胞定位实时荧光定量
- 的茶树鸟氨酸转氨酶基因CSδ-OAT克隆与表达分析被引量：2
- 2014年
- 根据已知鸟氨酸转氨酶(δ-OAT)的保守序列设计简并引物,并利用RT-PCR和RACE技术从‘迎霜’茶树中克隆获得鸟氨酸转氨酶基因,命名为Csδ-OAT,其Gen Bank登录号为KJ641844。该基因c DNA全长为1 865 bp,编码473个氨基酸,理论等电点为7.19,推测分子量为52.3 k D。序列比对分析结果表明,Csδ-OAT主要功能域保守性较高,存在典型的PLP结合位点;系统进化树分析显示,Csδ-OAT的进化符合传统的生物学分类,与其他双子叶植物具有同一起源。q RT-PCR分析结果表明,Csδ-OAT基因的表达存在明显的组织特异性,在花中表达最高,其次是叶片,而在其他组织器官中表达较低。此外,Csδ-OAT基因受高盐、低温、干旱、ABA和氧化胁迫处理的诱导,表明其参与了茶树体内各种非生物胁迫响应的过程。
- 王伟东疏再发杜昱林黎星辉王玉花
- 关键词：茶树克隆
