郭玲玲
- 作品数：17 被引量：44H指数：6
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- 相关领域：医药卫生自动化与计算机技术农业科学更多>>
- 刚地弓形虫RH株ROP18-ROP12复合基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2015年
- 目的构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)与ROP12的复合基因真核表达重组质粒,并检验其在真核细胞中的表达情况。方法重组质粒p VAX1-ROP18和p VAX1-ROP12分别经Bam HⅠ和XbaⅠ双酶切,将ROP12基因克隆至p VAX1-ROP18重组质粒。经菌落PCR、酶切及测序鉴定正确的重组表达质粒p VAX1-ROP18-ROP12转染至He La细胞。同时设空质粒组、p VAX1-ROP18转染组和p VAX1-ROP12转染组。提取各组He La细胞的总RNA并逆转录为c DNA,分别进行管家基因β-肌动蛋白和ROP18-ROP12复合基因的RT-PCR鉴定;同时,采用间接荧光免疫法和蛋白质印迹(Western blotting)法检测重组质粒p VAX1-ROP18-ROP12瞬时转染He La细胞后蛋白的表达情况。结果重组质粒p VAX1-ROP18-ROP12的菌落PCR电泳显示在约2 373 bp处出现特异性扩增片段,与预期大小相符。提取重组质粒经HindⅢ、Bam HⅠ和XbaⅠ单酶切、双酶切及三酶切鉴定均正确。测序结果显示,p VAX1-ROP18-ROP12重组质粒与已发表的弓形虫RH株ROP18基因(登录号为AM075204.1)序列一致性为100%,与弓形虫RH株ROP12基因(登录号为DQ096559.1)序列一致性为99%。脂质体转染后各组β-肌动蛋白的RT-PCR扩增产物均为613 bp,与预期大小相符。p VAX1-ROP18-ROP12转染组的ROP18-ROP12复合基因扩增产物大小为2 373 bp,而其他组未见条带。间接荧光法检测显示,在重组质粒转染的He La细胞胞浆中观察到黄绿色荧光,而对照组无黄绿色荧光。Western blotting法检测显示,融合蛋白ROP18-ROP12相对分子质量(Mr)约为85 000。结论构建了重组质粒p VAX1-ROP18-ROP12,该质粒能在真核细胞中表达。
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖王春苗姜文静朱晓波贾天军
- 关键词：刚地弓形虫真核表达
- 刚地弓形虫RH株ROP18基因真核表达载体的构建被引量：3
- 2015年
- 目的 PCR扩增刚地弓形虫(Toxplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)基因,构建真核表达载体pVAX1-ROP18,并检验其在真核细胞中的表达。方法 ROP18基因和质粒pVAX1分别经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,在T4连接酶作用下连接过夜,将连接产物转化至大肠埃希菌E.coil XL1-Blue感受态细胞,经菌落PCR、双酶切及测序正确的重组质粒pVAX1-ROP18转染至HeLa细胞内。试验设空白对照组和pVAX1空质粒对照。提取各组HeLa细胞的总RNA并将其逆转录成cDNA,分别进行管家基因β-actin和ROP18基因的RT-PCR扩增;采用Western blot法检测转染后各组细胞ROP18蛋白的表达情况。结果经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,ROP18基因的RT-PCR扩增片段大小为1 665bp,与预期值相符;ROP18基因重组质粒转化菌菌落PCR产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定,大小为1 665bp,与预期值相符;双酶切重组质粒得到预期酶切片段;重组质粒的目的基因序列与弓形虫RH株ROP18基因(登录号AM075204.1)序列比对完全一致。脂质体转染后各组β-actin的RT-PCR扩增目的片段均为613bp,与预期值相符;pVAX1-ROP18重组质粒转染组的ROP18的RT-PCR扩增目的片段大小为1 665bp,而其他组无该目的基因条带。Western blot检测重组质粒pVAX1-ROP18能够在HeLa细胞内表达ROP18蛋白。结论成功构建了真核表达载体pVAX1-ROP18,且该重组质粒能够在真核细胞内表达ROP18蛋白。
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖姜文静王春苗刘楠
- 关键词：刚地弓形虫重组质粒真核表达
- 刚地弓形虫RH株pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒的构建与鉴定
- 目的克隆刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,T.gondfi)RH株棒状体蛋白18(ROP18)及ROP12的基因,构建pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒。方法从4周龄感染刚地弓形虫RH株3天...
- 郭玲玲张进顺张晓磊贾晓晖
- 文献传递
- 刚地弓形虫ROP12蛋白的生物信息学分析被引量：11
- 2015年
- 目的通过在线生物程序分析刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白12(ROP12)的生物信息学特性。方法通过在线ProtParam、SOSUI、SOPMA、TMHMM、MotifScan及SYFPEITHI等程序,同时结合DNASTAR、DNAMAN生物信息学软件,分析TgROP12蛋白的生物学特性,如理化性质、二级结构、结构域及抗原表位等。结果TgROP12蛋白含有236个氨基酸,其为分子式C1125H1786N308O360S3,其分子质量和理论等电点分别为25.48ku和4.53。TgROP12蛋白具有信号肽序列和跨膜结构区域,其二级结构中β-转角和无规则卷曲分别占7.20%和44.92%;TgROP12蛋白含有8个亲水性较高(临界值为2.0)的区域,10个表面可及性较高(临界值为1.9)的区域;TgROP12蛋白含有保守结构区域和翻译后修饰位点各6个,并含有9个B细胞抗原表位和6个T细胞抗原表位。结论生物信息学分析显示TgROP12蛋白的免疫原性较好,可作为弓形虫病疫苗候选分子。
- 郭玲玲王春苗张进顺张晓磊贾晓晖姜文静刘楠
- 关键词：刚地弓形虫生物信息学
- 刚地弓形虫棒状体蛋白及其核酸疫苗研究进展被引量：9
- 2015年
- 弓形虫病一般采用药物治疗,但效果并不理想。目前,研制安全、有效的疫苗是弓形虫病防控的重要策略之一。核酸疫苗日益成为了研究的热点。棒状体蛋白(rhoptry proteins)是弓形虫在入侵宿主细胞过程中所分泌的,其通过与宿主相互作用帮助弓形虫逃避宿主的免疫攻击。研究表明其在弓形虫入侵宿主细胞、纳虫泡形成及胞内弓形虫的增殖调控方面发挥着重要作用,因此它成为了有潜力的疫苗候选抗原分子。本文就棒状体蛋白的特性、与宿主的相互作用及棒状体蛋白核酸疫苗候选分子方面的研究进展进行了综述。
- 郭玲玲张晓磊张进顺
- 关键词：刚地弓形虫相互作用核酸疫苗
- 弓形虫ROP11核酸疫苗免疫保护作用的研究被引量：7
- 2014年
- 目的观察ROP11核酸疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法 40只BALB/c小鼠随机分为实验组、空质粒对照组、PBS对照组和空白对照组,每组10只,均通过股四头肌注射免疫小鼠。其中实验组每鼠注射pcDNA3.1(+)-ROP11重组质粒100μg(1μg/μl),空质粒对照组注射pcDNA3.1(+)质粒100μg(1μg/μl),PBS对照组注射无菌PBS缓冲液100μl,空白对照组不注射。共免疫3次,每次间隔2周,末次接种量均加倍。分别于每次注射前和末次注射后第2周检测小鼠血清特异性IgG和细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10。末次注射后2周各组小鼠腹腔攻击感染RH株弓形虫速殖子1×103个/只,观察其存活时间,评价免疫效果。结果 ROP11核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,实验组小鼠血清特异IgG随着免疫次数的增加而显著增高(P<0.05)。血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10均不同程度升高(P<0.05)。重组质粒免疫组、空质粒免疫组、PBS和空白对照组小鼠经RH株弓形虫攻击感染后的平均存活时间为236.3、97.8、96.3和96.2h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ROP11核酸疫苗对BALB/c小鼠弓形虫感染有一定的免疫保护性,为进一步研究ROP11核酸疫苗的生物学功能提供了实验基础。
- 张晓磊张丽骞王春苗姜文静贾天军郭玲玲张进顺
- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护
- 刚地弓形虫ROP18-ROP12复合基因疫苗对小鼠的免疫保护性研究
- 郭玲玲
- 刚地弓形虫RH株pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒的构建与鉴定
- 目的 克隆刚地弓形虫(Toxop/asma gondii,T.gondii)RH株棒状体蛋白18(ROP18)及ROP12的基因,构建pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒.方法从4～6周龄感染刚地弓形虫RH...
- 郭玲玲张进顺张晓磊贾晓晖
- 刚地弓形虫ROP18基因的克隆及生物信息学分析被引量：21
- 2015年
- 目的对刚地弓形虫RH株的棒状体蛋白18(TgROP18)基因进行克隆,同时采用生物信息学分析TgROP18蛋白序列。方法提取刚地弓形虫RH株速殖子总RNA,根据TgROP18基因(GenBank登陆号为AM075204)的开放阅读框设计引物,采用逆转录PCR(RT-PCR)扩增ROP18基因,并对其产物进行测序;采用在线生物软件预测TgROP18蛋白的结构与功能。结果 TgROP18基因RT-PCR扩增产物与预期一致,大小为1 665bp;测序分析显示,ROP18基因序列与GenBank上已发表的序列完全一致。TgROP18蛋白含有554个氨基酸,分子式为C2753H4405N801O811S20,分子质量单位为62.34ku,理论等电点为9.34;在TgROP18蛋白的二级结构中,α-螺旋、β-折、β-转角、无规则卷曲所占比例分别为41.52%、19.13%、7.76%和31.59%;TgROP18蛋白含有10个亲水性较高的区域(临界值为2.0),28个表面可及性较高的区域(临界值为1.9),10个保守结构区域,7个翻译后修饰位点,21个B细胞抗原表位,21个CTL抗原表位及26个Th抗原表位有。结论生物信息学分析表明,TgROP18蛋白具有良好的免疫原性,这将为弓形虫疫苗的研究提供基础资料。
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖姜文静王春苗刘楠朱晓波
- 关键词：刚地弓形虫克隆真核表达质粒生物信息学分析
- 饲养密度对小鼠福利的影响
- 目的 研究不同的饲养密度对小鼠福利的影响，从而为更好的满足实验动物的福利。方法 挑取5 周龄雌性BALB/c 小鼠，按照随机原则分为6 个组，在不同的饲养密度下饲养，观察各组小鼠的体重、生活习性、血液等变化。
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖刘楠
- 关键词：BALB/C小鼠饲养密度动物福利
