张晓磊
- 作品数：26 被引量：64H指数：7
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- 发文基金：河北省自然科学基金河北省高等学校科学技术研究指导项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学文化科学自动化与计算机技术更多>>
- 刚地弓形虫RH株ROP18-ROP12复合基因真核表达载体的构建被引量：2
- 2015年
- 目的构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)与ROP12的复合基因真核表达重组质粒,并检验其在真核细胞中的表达情况。方法重组质粒p VAX1-ROP18和p VAX1-ROP12分别经Bam HⅠ和XbaⅠ双酶切,将ROP12基因克隆至p VAX1-ROP18重组质粒。经菌落PCR、酶切及测序鉴定正确的重组表达质粒p VAX1-ROP18-ROP12转染至He La细胞。同时设空质粒组、p VAX1-ROP18转染组和p VAX1-ROP12转染组。提取各组He La细胞的总RNA并逆转录为c DNA,分别进行管家基因β-肌动蛋白和ROP18-ROP12复合基因的RT-PCR鉴定;同时,采用间接荧光免疫法和蛋白质印迹(Western blotting)法检测重组质粒p VAX1-ROP18-ROP12瞬时转染He La细胞后蛋白的表达情况。结果重组质粒p VAX1-ROP18-ROP12的菌落PCR电泳显示在约2 373 bp处出现特异性扩增片段,与预期大小相符。提取重组质粒经HindⅢ、Bam HⅠ和XbaⅠ单酶切、双酶切及三酶切鉴定均正确。测序结果显示,p VAX1-ROP18-ROP12重组质粒与已发表的弓形虫RH株ROP18基因(登录号为AM075204.1)序列一致性为100%,与弓形虫RH株ROP12基因(登录号为DQ096559.1)序列一致性为99%。脂质体转染后各组β-肌动蛋白的RT-PCR扩增产物均为613 bp,与预期大小相符。p VAX1-ROP18-ROP12转染组的ROP18-ROP12复合基因扩增产物大小为2 373 bp,而其他组未见条带。间接荧光法检测显示,在重组质粒转染的He La细胞胞浆中观察到黄绿色荧光,而对照组无黄绿色荧光。Western blotting法检测显示,融合蛋白ROP18-ROP12相对分子质量(Mr)约为85 000。结论构建了重组质粒p VAX1-ROP18-ROP12,该质粒能在真核细胞中表达。
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖王春苗姜文静朱晓波贾天军
- 关键词：刚地弓形虫真核表达
- 刚地弓形虫RH株ROP18基因真核表达载体的构建被引量：3
- 2015年
- 目的 PCR扩增刚地弓形虫(Toxplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)基因,构建真核表达载体pVAX1-ROP18,并检验其在真核细胞中的表达。方法 ROP18基因和质粒pVAX1分别经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,在T4连接酶作用下连接过夜,将连接产物转化至大肠埃希菌E.coil XL1-Blue感受态细胞,经菌落PCR、双酶切及测序正确的重组质粒pVAX1-ROP18转染至HeLa细胞内。试验设空白对照组和pVAX1空质粒对照。提取各组HeLa细胞的总RNA并将其逆转录成cDNA,分别进行管家基因β-actin和ROP18基因的RT-PCR扩增;采用Western blot法检测转染后各组细胞ROP18蛋白的表达情况。结果经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,ROP18基因的RT-PCR扩增片段大小为1 665bp,与预期值相符;ROP18基因重组质粒转化菌菌落PCR产物经0.8%琼脂糖凝胶电泳鉴定,大小为1 665bp,与预期值相符;双酶切重组质粒得到预期酶切片段;重组质粒的目的基因序列与弓形虫RH株ROP18基因(登录号AM075204.1)序列比对完全一致。脂质体转染后各组β-actin的RT-PCR扩增目的片段均为613bp,与预期值相符;pVAX1-ROP18重组质粒转染组的ROP18的RT-PCR扩增目的片段大小为1 665bp,而其他组无该目的基因条带。Western blot检测重组质粒pVAX1-ROP18能够在HeLa细胞内表达ROP18蛋白。结论成功构建了真核表达载体pVAX1-ROP18,且该重组质粒能够在真核细胞内表达ROP18蛋白。
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖姜文静王春苗刘楠
- 关键词：刚地弓形虫重组质粒真核表达
- 刚地弓形虫RH株pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒的构建与鉴定
- 目的克隆刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,T.gondfi)RH株棒状体蛋白18(ROP18)及ROP12的基因,构建pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒。方法从4周龄感染刚地弓形虫RH株3天...
- 郭玲玲张进顺张晓磊贾晓晖
- 文献传递
- 刚地弓形虫棒状体蛋白及其核酸疫苗研究进展被引量：9
- 2015年
- 弓形虫病一般采用药物治疗,但效果并不理想。目前,研制安全、有效的疫苗是弓形虫病防控的重要策略之一。核酸疫苗日益成为了研究的热点。棒状体蛋白(rhoptry proteins)是弓形虫在入侵宿主细胞过程中所分泌的,其通过与宿主相互作用帮助弓形虫逃避宿主的免疫攻击。研究表明其在弓形虫入侵宿主细胞、纳虫泡形成及胞内弓形虫的增殖调控方面发挥着重要作用,因此它成为了有潜力的疫苗候选抗原分子。本文就棒状体蛋白的特性、与宿主的相互作用及棒状体蛋白核酸疫苗候选分子方面的研究进展进行了综述。
- 郭玲玲张晓磊张进顺
- 关键词：刚地弓形虫相互作用核酸疫苗
- 弓形虫ROP11核酸疫苗免疫保护作用的研究被引量：7
- 2014年
- 目的观察ROP11核酸疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用。方法 40只BALB/c小鼠随机分为实验组、空质粒对照组、PBS对照组和空白对照组,每组10只,均通过股四头肌注射免疫小鼠。其中实验组每鼠注射pcDNA3.1(+)-ROP11重组质粒100μg(1μg/μl),空质粒对照组注射pcDNA3.1(+)质粒100μg(1μg/μl),PBS对照组注射无菌PBS缓冲液100μl,空白对照组不注射。共免疫3次,每次间隔2周,末次接种量均加倍。分别于每次注射前和末次注射后第2周检测小鼠血清特异性IgG和细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10。末次注射后2周各组小鼠腹腔攻击感染RH株弓形虫速殖子1×103个/只,观察其存活时间,评价免疫效果。结果 ROP11核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,实验组小鼠血清特异IgG随着免疫次数的增加而显著增高(P<0.05)。血清IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10均不同程度升高(P<0.05)。重组质粒免疫组、空质粒免疫组、PBS和空白对照组小鼠经RH株弓形虫攻击感染后的平均存活时间为236.3、97.8、96.3和96.2h,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ROP11核酸疫苗对BALB/c小鼠弓形虫感染有一定的免疫保护性,为进一步研究ROP11核酸疫苗的生物学功能提供了实验基础。
- 张晓磊张丽骞王春苗姜文静贾天军郭玲玲张进顺
- 关键词：刚地弓形虫核酸疫苗免疫保护
- 虚拟仿真实验在临床生物化学检验实验教学中的应用与探索被引量：9
- 2021年
- 目的探讨虚拟仿真实验在临床生物化学检验实验教学中的应用。方法通过问卷调查了解检验本科学生对虚拟仿真实验开展的主观感受,评价其效果,通过考核学生的实验操作对其进行客观评价。结果问卷调查显示,与对照组比较,学生更满意实验组教学模式,虚拟仿真实验有助于提高学生自主学习的兴趣(81.61%)、加深对实验原理的理解(68.63%)、提升实验操作能力(71.32%)、提高自主学习能力(88.86%)、提高实验安全性(99.74%)、促进同学间交流学习(89.32%)、提升实践和创新水平(94.34%)、对日后去医院实习有帮助(97.87%)。实验组实验考核成绩与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过问卷调查和操作考核发现虚拟仿真实验有助于将传统实验与虚拟仿真实验教学模式相结合,可以提高学生的实践和创新能力。
- 张晓磊侯丽娟张效云徐志伟韩瑞董明纲
- 关键词：虚拟仿真实验临床生物化学检验实验教学
- 刚地弓形虫RH株pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒的构建与鉴定
- 目的 克隆刚地弓形虫(Toxop/asma gondii,T.gondii)RH株棒状体蛋白18(ROP18)及ROP12的基因,构建pVAX1-ROP18-ROP12真核重组表达质粒.方法从4～6周龄感染刚地弓形虫RH...
- 郭玲玲张进顺张晓磊贾晓晖
- 刚地弓形虫ROP16基因的克隆及生物信息学分析被引量：7
- 2016年
- 目的构建刚地弓形虫棒状体蛋白16(TgROP16)真核重组表达载体,对TgROP16基因编码蛋白进行生物信息学分析。方法提取刚地弓形虫总RNA,根据TgROP16基因的开放阅读框架设计引物,采用逆转录PCR(RTPCR)扩增ROP16基因,经EcoR I、Not I酶切后连接入真核表达载体pVAX1中,连接产物转化大肠埃希菌(E.coli)XL1-Blue。提取阳性菌落质粒,进行PCR、双酶切鉴定及基因测序,对所获序列进行生物信息学分析。结果 TgROP基因RT-PCR扩增产物与预期一致,大小约为2 100bp。重组质粒经PCR及双酶切鉴定构建正确。测序显示获得的TgROP16基因片段为2 124bp,与GenBank已收录的弓形虫ROP16基因序列(登录号为GQ249093.1)比对,一致性为99.8%。预测其编码蛋白TgROP16为非跨膜分泌蛋白,含707个氨基酸,分子式为C3343H5339N967O1024S2,分子质量单位为76.1352ku,理论等电点为9.18;在TgROP16蛋白的二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占比35.79%、14.29%、7.07%和42.86%;含多个可形成卷曲螺旋构象的区域与可成为磷酸化位点的氨基酸残基,存在信号肽序列,含39个B细胞抗原表位、24个CTL细胞抗原表位及33个Th细胞抗原表位。结论成功构建了pVAX1-ROP16真核表达重组质粒,生物信息学分析表明其编码蛋白TgROP16具有良好的抗原性及免疫原性,有望作为弓形虫疫苗候选分子。
- 刘楠郭玲玲张进顺张晓磊刘荣荣
- 关键词：刚地弓形虫真核表达生物信息学分析
- 高脂饮食对幼年大鼠小肠组织FABP2 mRNA表达的影响被引量：4
- 2014年
- 目的检测幼年大鼠在应答高脂饮食时,小肠组织FABP2 mRNA的表达情况,探讨FABP2的表达与幼年大鼠肥胖发生、发展的相关性。方法建立幼年大鼠肥胖模型,采用SYBR Green I荧光染料实时荧光定量PCR方法检测、分析幼年大鼠十二指肠、空肠和回肠组织中FABP2 mRNA的表达情况;全自动生化分析仪检测血清生化指标的变化。结果无论是对照组还是肥胖组大鼠,FABP2 mRNA的表达水平在回肠最高,空肠次之,十二指肠最低,差异具有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,肥胖组大鼠十二指肠、空肠和回肠组织中FABP2 mRNA表达水平均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);且肥胖组大鼠血清TG和血糖水平显著升高(P<0.05)。结论 FABP2基因在小肠组织不同区段表达量不同;高脂饮食使幼年大鼠小肠组织FABP2 mRNA表达水平降低,体重增加,血清TG水平升高,提示FABP2参与了脂类代谢,与幼年肥胖的发生、发展可能具有一定的关系。
- 徐云鹏王文栋郝敏张晓磊高雪常晓彤
- 关键词：高脂饮食实时荧光定量PCR肥胖
- 刚地弓形虫RH株ROP18基因真核表达载体的构建
- 目的 克隆刚地弓形虫(Toxplasma gondii)棒状体蛋白18(ROP18)基因并构建重组质粒pVAX1-ROP18,并检验其在真核细胞中的表达情况.方法 ROP18 基因和质粒pVAX1 分别经Hind Ⅲ 和...
- 郭玲玲张晓磊张进顺贾晓晖姜文静王春苗刘楠
- 关键词：刚地弓形虫重组质粒真核表达
