化冰
- 作品数：31 被引量：136H指数：8
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 半合成抗体库的构建及鉴定被引量：24
- 1999年
- 目的构建半合成抗体库，不经免疫制备抗体。方法通过ＰＣＲ法，从人胎肝ＤＮＡ扩增基因组ＶＨ段基因，从Ｆｄ基因制备含有不同长度随机化ＣＤＲ３的ＦＲ３－ＣＤＲ３－Ｊ－ＣＨ１片段，然后用重叠ＰＣＲ法构建Ｆｄ库，与人轻链基因库组合构建成半合成抗体库。结果通过各种组合多次建库，获得总容量为４×１０８的半合成抗体库，其Ｆｄ段和轻链基因的重组率均大于９０％，Ｆａｂ表达率为５０％。挑选２０个克隆测定ＣＤＲ３序列符合所设计的随机序列，用三种不同抗原进行筛选均得到了特异性噬菌体抗体。
- 王琰化冰刘群英陈宇萍朱迎春
- 关键词：基因文库抗体生成
- 抗原表位定向选择的人源抗TNF-α Fab的鉴定被引量：4
- 1999年
- 目的对通过抗原表位定向选择技术（ＥＧＳ）所筛选到的２株人源化ＴＮＦ－α抗体Ｆａｂ段进行分析鉴定。方法测定可变区基因的序列，用亲本鼠单抗Ｚ８进行竞争ＥＬＩＳＡ，用Ｌ９２９细胞检测其体外中和ＴＮＦ－α的活性，并用硫氰酸铵洗脱法比较与亲本鼠单抗的亲和力。结果基因测序表明２株抗体ＶＨ相同，属人ＶＨⅠ亚群；Ｖκ分别属人ＶκⅠ、ＶκⅢ亚群；竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源抗体是针对ＴＮＦ－α的同一抗原表位；体外中和实验证明此抗体片段能中和ＴＮＦ－α对Ｌ９２９细胞的毒性；该抗体片段的亲和力略低于原鼠单抗Ｚ８。
- 王卓智王琰李竞刘群英化冰陈宇萍朱迎春李振甫董志伟
- 关键词：肿瘤坏死因子EGS
- 肺癌及慢性阻塞性肺疾病患者的血管紧张素转换酶基因多态性被引量：1
- 2000年
- 目的;主要观察肺癌、慢性阻塞性肺疾病、慢性肺心病及正常人血管紧张素转换酶基因多态性(ACEGP)的变化及与血清血管紧张素转换酶(sACE)水平的关系.方法:ACEGP测定采用PCR,sACE采用紫外分光光度法测定.结果:正常人和肺心病组Ⅰ型基因占优势(分别为57.9%和60.7%),而肺癌组和慢喘支组D型占优势(分别为61.8%和59.5%).肺癌组I/D和Ⅰ等位基因频率均明显低于正常组(P<0.01).而D/D和D等位基因频率明显高于正常组.慢喘支组Ⅰ等位基因频率(40.5%)明显低于正常组(57.9%),但其所有指标均与肺癌组无明显差异.肺心病组I等位基因频率(60.7%)显著高于肺癌组(38.2%).各组疾病sACE变化与基因型变化不尽相同.肺心病组各基因频率虽与正常组无明显差异,但各型中sACE值却明显低于正常组.肺癌组、慢喘支组与正常组三组间基因型虽有所不同,但sACE值却无明显差异.正常组与三组疾病均以D/D型sACE值最高,I/I型最低,尤以正常组和肺心病组差异最显著.结论:肺癌、慢喘支发病与ACEGP的D/D型明显有关,而正常人和肺心病以Ⅰ型基因占优势.ACEGP与sACE D/D型>I/I型,但sACE值还受其他因素的影响.
- 王洪武聂舟山段蕴铀刘东东韩志海张新红化冰
- 关键词：肺部肿瘤慢性阻塞性肺疾病
- 依那普利对充血性心力衰竭肾素-血管紧张素系统的影响
- 1994年
- 本文旨在探讨第二代血管紧张素酶抑制剂依那普利(enalapril)对充血性心力衰竭(CHF)患者肾素-血管紧张素系统(RAS)的影响,从而进一步分析其治疗机制。 对象与方法 一、病例选择:确诊的CHF住院病人21例,分成两组。1,安慰剂组9例,年龄37～58岁,平均56.78±3.49岁,其中男6例,女3例。心功能按照NYHA分级法,Ⅱ级3例,Ⅲ级5例,Ⅳ级1例。原发病因:扩张心肌病6例,冠心病3例。2.依那普利组12例,年龄26～65岁,平均49.
- 凌云张海荣陈晓穗化冰郭乃洲
- 关键词：依那普利充血性心力衰竭肾素血管紧张素
- 用于大容量噬菌体抗体库的表达载体的构建及鉴定被引量：7
- 2003年
- 目的:构建一个适用于大容量抗体库的噬菌体抗体表达载体。方法:通过插入人工合成寡核苷酸、PCR介导的定位突变等技术,将载体p3MH进行改造,使之更适于构建大容量抗体库。通过噬菌体抗体的表达、ELISA及细胞内重组试验鉴定所获得的表达载体。结果:通过插入loxp511和loxp序列,将Lac启动子更换为阿拉伯糖启动子、改造抗体基因克隆位点等,将p3MH改造成pAL。经检测pAL可以表达具有功能的Fab噬菌体抗体,其表达调控更为严密,可以在cre+细菌胞内发生预期的loxp-cre介导的定位重组。结论:所获得的表达载体pAL适用于构建大容量Fab噬菌体抗体库。
- 王琰王欲晓陈晓穗化冰刘晓琳
- 关键词：PAL
- 空中晕厥与血清微量元素铜、锌关系的探讨
- 1992年
- 本文对19例空中晕厥飞行员于离心机检查前、离心机检查出现灰视后即刻、30min及48h进行血清铜、锌测定，18例健康飞行员测空腹血清铜、锌作为对照。结果：空中晕厥组离心机检查均为加速度耐力不良，检查前血清锌明显高于对照组(P<0．01)，其中三例高于正常。血清铜／锌比值明显低于对照组(P<0.01)低于正常。据报告血清锌高可诱发癫痫，血清铜／锌比值变小可引起多种疾病。推测空中晕厥可能与血清锌偏高，血清铜／锌比值变小有关。
- 秦世贞化冰马贵喜
- 关键词：晕厥血清铜血清锌血清微量元素飞行员
- 大容量人源噬菌体抗体库的构建被引量：9
- 2006年
- 目的:构建大容量易于改造成Diabody的噬菌体单链抗体库,筛选人源性抗体。方法:从正常成人外周血和新生儿脐血中分离淋巴细胞提取RNA,经RT-PCR扩增轻重链可变区基因(VL和VH),通过重叠PCR(over-lapPCR)将VL和VH拼接成单链抗体(ScFv)基因(其中VH两侧是两个非同源的loxp基因),并克隆入噬菌体表达载体PDF,得到初级噬菌体抗体库。将初级抗体库以高MOI超感染Cre+菌株BS1365,通过loxp-cre定位重组系统,介导轻重链在菌内重组配对,然后低感染XL1-Blue菌,得到大容量的次级抗体库。以多种不同抗原对库进行筛选,得到多样性较好的特异性抗体。结果:经超感染重组,得到1·2×1010的大容量抗体库。经三种蛋白抗原筛选,均得到多株特异性较好的噬菌体抗体,并成功构建为活性较好的Diabody。结论:经Loxp-Cre定位重组系统在单细胞内重组,能够高效地构建大容量噬菌体单链抗体库。
- 陈宇萍张国民乔媛媛王刚刘玉峰化冰王琰
- 关键词：噬菌体展示抗体库单链抗体
- 从半合成噬菌体抗体库筛选抗角蛋白人抗体
- 1999年
- 目的:从半合成噬菌体抗体库中筛选入源性抗角蛋白抗体并进行鉴定.方法:以表皮角蛋白为抗原,通过吸附-洗脱-扩增过程从半合成噬菌体抗体库中筛选特异性抗角蛋白抗体.用ELISA和DNA指纹分析对所获抗体进行鉴定.结果:经过4轮筛选,获得20个能与角蛋白结合的阳性克隆,其中可产生特异性抗角蛋白抗体的克隆18个.经DNA指纹分析,判定所获克隆分别包含4个不同的Fab段基因.经切除基因Ⅲ后1个克隆表达出可与角蛋白特异性结合的可溶性Fab.结论:利用噬菌体抗体库技术可以制备出高特异性的人源性抗角蛋白抗体.
- 王刚化冰王琰刘玉峰
- 关键词：噬菌体抗体库角蛋白人单克隆抗体
- 噬菌体抗体库几种筛选方法的比较被引量：11
- 2001年
- 目的 对多种不同的噬菌体抗体库筛选方法进行比较研究 .方法 应用抗原固相化吸附筛选法、生物素化抗原液相筛选法和解离速率筛选法对半合成噬菌体抗体库或轻链替换库进行抗角蛋白噬菌体抗体的筛选 ,比较各自的筛选效率和优缺点 .结果 3种方法筛选抗角蛋白抗体均获成功 ,抗原固相化吸附筛选法效果可靠 ,所获抗体特异性高但抗原消耗量大 ;生物素化抗原液相筛选法方法敏感且节省抗原 ,可以根据实验目的和抗体库性质灵活调节筛选体系 ,其不足是筛选获得的克隆中容易出现非特异性结合的克隆 ;而解离速率筛选是选择性获得高亲和力抗体的有效手段 .结论 不同的筛选策略各具优势 。
- 王刚刘玉峰王琰化冰
- 关键词：噬菌体抗体库
- 应用VIDAS免疫分析系统检测血清抗伯氏包柔螺旋体抗体
- 1994年
- 莱姆病(Lyme disease)是最近十年来才被认识的一种蜱媒传染性流行病.莱姆病的血清学诊断方法主要有间接荧光免疫法(IFA)酶免疫试验(EIA),免疫印迹法(WB).梅迪埃(Biomerieux)公司推出免疫诊断系统(vidas).能够自动定性和半定量地检查Lyme病的抗伯氏包柔螺旋体抗体(抗BB抗体).本法结合了酶和荧光免疫二种方法.碱性磷酸酶标记二抗的底物是4-methylumbelliferylphosphate.底物在碱性磷酸酶的催化下转变成4—methylumbelliferon,该产物在365nm光激发下可发出455nm的荧光,光强度被Vidas中的光扫描器测定出来.我们用Vidas检测了体检标本83份.阳性8份(9.6%);检测临床为结核病的标本20份,无一例阳性;临床诊断结节病或可疑结节病标本46份,阳性4份(8.7%);各种眼科疾病57份,阳性13份82.8%);口腔科疾病15份.阳性4份(26.7%);其他如皮肌炎、肝脾肿大发热待查、肺癌、肺部 阴影待查等标本17份,阳性2份(11.8%);检测了军科院微生物流行病研究所采自新疆、黑龙江可疑Lyme病的标本16份,阳性12份(75.0%).作者用vidas法和IFA法比较了165份标本,vidas检出阳性24份(14.5%),IFA法检出131份(79.4%),两法的一致性(符合率)为32.7%.
- 关淑珍尹国才韩善桥邵理成陈菡化冰刘群英戴炜
- 关键词：莱姆病
