朱迎春
- 作品数：46 被引量：166H指数：9
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 从半合成抗体库克隆抗TNF-α人单链抗体被引量：14
- 1999年
- 通过噬菌体抗体库技术，不经免疫克隆抗ＴＮＦ－α人单链抗体，用固相化的人重组ＴＮＦ－α抗原对半合成噬菌体抗体库进行了４轮“吸附－洗脱－扩增”的筛选，可见到明显富集，从第３轮和第４轮洗脱下来的克隆中获得两株可特异结合ＴＮＦ－α的克隆，其可变区分别属于ＶＨ１、ＶＨ３和Ｖλ１亚群。
- 王琰刘群英化冰陈宇萍朱迎春陈晓穗
- 关键词：噬菌体抗体库TNFΑ
- 抗乙肝病毒表面抗原单链抗体在大肠杆菌中的高效表达被引量：2
- 1999年
- 目的：在大肠杆菌中高效表达抗乙肝表面抗原的单链抗体。方法：通过ＰＣＲ将单链抗体基因重组到原核细胞表达载体ｐＴ７中，构建单链抗体高效表达载体ｐＴ７ＳＣ。将ｐＴ７ＳＣ质粒转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３），ＩＰＴＧ诱导进行表达。结果：获得了ＳｃＦｖ的高效表达，表达产物占菌体总蛋白的２８％以上。竞争抑制性ＥＬＩＳＡ检测诱导后的细菌培养上清，证明所表达的ＳｃＦｖ具有抗体活性。进一步将ｃＭｙｃ十肽连接在ＳｃＦｖ的羧基端，使所表达的ＳｃＦｖ易于检测。结论：在大肠杆菌高效表达抗乙肝ＳｃＦｖ。
- 高荣凯王琰刘群英朱迎春化冰陈宇萍
- 关键词：单链抗体HBSAG乙型肝炎大肠杆菌
- 抗HBsAg人IgG表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达被引量：2
- 2000年
- 目的:尝试将一株来源于人源性噬菌体抗体库的抗HBsAg人Fab,转换成完整的抗HBsAg人IgG.方法:采用重叠PCR方法,在抗HBsAg人Fab的V_κ和VH基因的5’端接上人工合成的人_κ链的前导序列,构建表达完整IgGl的真核表达载体,转染CHO(DHFR^-)细胞,用ELISA、RT-PCR和免疫印迹检测抗HBsAg人IgG的表达.通过DHFR/MTX体系及金属离子诱导提高Ig表达.结果:获得表达量在lμg/10~6细胞/24小时的稳定表达抗HBsAg人IgG的转染细胞系.并证实所表达人IgG具有良好特异性及完整Fe段,其亲和力约为2.1×10~9 M^(-1).又通过DHFR/MTX扩增系统的作用及金属离子锌和镉对小鼠金属硫蛋白启动子的激活作用,使IgG的表达量提高了约20倍.结论:通过拼接人κ链的前导序列在真核表达系统成功地将抗HBsAg人Fab转换成完整的抗HBsAg人IgGl,为其进一步应用打下了基础.
- 陈晓穗朱迎春王欲晓刘晓琳周丽君王琰
- 关键词：噬菌体抗体乙型肝炎抗HBSAGIGGCHO细胞
- 随机化CDR3抗体库的构建及不经免疫制备抗体的初步探索被引量：11
- 1997年
- 为探索利用噬菌体抗体库技术不经免疫制备抗体，在已有的抗乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓ）人Ｆａｂ段基因的基础上，通过ＰＣＲ引入突变，对其ＶＨＣＤＲ３中１２个氨基酸残基（９５～１００Ｊ）进行了完全随机化，对９４和１００Ｋ位残基进行了有限随机化，构建了半合成噬菌体抗体库，库容为２×１０８，５８％含有随机化ＣＤＲ３序列，用无关抗原小鼠ＩｇＧ对该抗体库进行筛选，获得了三个可与小鼠ＩｇＧ结合而不与ＨＢｓ反应的克隆，经测定其ＣＤＲ３的ＤＮＡ序列，发现这三个克隆具有相同的ＣＤＲ３，证明单纯改变ＶＨＣＤＲ３可以得到新的特异性抗体，从而绕过免疫制备抗体。
- 王琰化冰刘群英高荣凯朱迎春陈宇萍
- 关键词：噬菌体抗体
- 基因工程重组人超氧化物歧化酶抗炎作用的研究
- 1994年
- 通过角叉菜胶诱发大鼠足水肿这一经典炎症模型,观察了基因工程重组人铜锌超氧化物歧化酶(Recombined Human Superoxide Dismutase;rh SOD)对非感染性炎症的抗炎作用,证实了静脉注射 rh SOD(7000 U/kg～10 000 U/kg)对大鼠足肿胀有明显抑制作用,实验组与对照组间有显著性差异(P<0.001),增加剂量和给药次数可提高抗炎效果.该结果为进一步探讨rh SOD抗放射线损伤的机制奠定了基础.
- 刘晓琳王晶翼周丽君谢邦铁骆训懿陈宇萍陈晓穗朱迎春
- 关键词：基因工程肿胀率超氧化物歧化酶
- 抗人胃癌3H11人-鼠嵌合抗体的构建及表达被引量：6
- 1998年
- 为了降低抗人胃癌鼠单抗3H11的免疫原性,以利于该单抗在临床中的应用。我们构建并表达了3H11的人-鼠嵌合抗体,将3H11的轻、重链可变区基因分别插入到含有人k链及IgGl重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,构建了3H11人-鼠嵌合抗体轻、重链表达载体。应用Lipofectin方法先将嵌合轻链表达载体转染到Sp2/0细胞中,经用含霉酚酸的选择培养基筛选及克隆化培养,获得稳定分泌3H11人-鼠嵌合轻链的转染细胞株。再将嵌合重链表达载体转染该细胞系,用含有组氨醇的选择培养基筛选,获得组氨醇抗性细胞株,经亚克隆后得到可稳定分泌人k链和人IgGl的转染细胞系,经ELISA检测该细胞系所分泌的上清含有可与人胃癌细胞系803结合的人IgG抗体活性,RT-PCR结果显示该细胞株有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录,证明已获得分泌3H11人-鼠嵌合抗体的细胞系。
- 李竞王卓智王琰刘群英化冰陈宇萍朱迎春董志伟
- 关键词：人-鼠嵌合抗体胃肿瘤真核基因
- 重组人铜锌超氧化物歧化酶脂质体的制备
- 1994年
- 应用反相蒸发法制备出重组人铜锌超氧化物歧化酶(rh Cu/Zn SOD)脂质体,其包封率为49.1%,在大鼠体内半衰期为3.45 h,体外模拟胃酸、胃蛋白酶、胰酶耐受力分别为90.3%、86.2%.79.8%;在小鼠体内脾、肝、肺脏中分布最高.
- 谢帮铁工晶翼骆训懿李战青刘晓琳陈晓穗陈宇萍周丽君朱迎春
- 关键词：超氧化物歧化酶脂质体基因工程铜锌
- 抗HBsAg和抗红细胞双特异Diabody的构建及表达被引量：14
- 1998年
- 目的构建及表达抗乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）和抗红细胞（ＲＢＣ）双特异Ｄｉａｂｏｄｙ，用于血清中ＨＢｓＡｇ的快速检测。方法将抗ＨＢｓＡｇ的人抗体轻重链可变区基因与抗红细胞的鼠抗体重轻链可变区基因交叉配对构建成两个杂合Ｄｉａｂｏｄｙ基因，并将两个配对基因组建在一个表达载体中，成为双特异Ｄｉａｂｏｄｙ表达载体，并在大肠杆菌中分泌表达。结果经ＥＬＩＳＡ检测和红细胞凝集实验测定，证明所表达的双特异性Ｄｉａｂｏｄｙ具有抗ＨＢｓＡｇ和抗ＲＢＣ双重功能，并可使含有ＨＢｓＡｇ的ＲＢＣ悬液产生血球凝集。结论所表达的双特异性Ｄｉａｂｏｄｙ具有双重抗体活性。
- 陈宇萍王琰化冰刘群英朱迎春高荣凯王卓智
- 关键词：双特异性抗体HBSAG红细胞聚集
- 抗胃癌单抗3H11可变区氨基端序列对抗体活性的影响被引量：5
- 1999年
- 采用 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 方法， 利用第一骨架区通用引物扩增重链 Ｆｄ 段和κ链的基因， 克隆到 Ｆａｂ 表达载体中， 在大肠杆菌中获得了表达但未检测到抗原结合活性． 根据已克隆的３ Ｈ１１ Ｖ Ｌ、 Ｖ Ｈ 的真实序列， 重新设计κ链及 Ｆｄ 段５′端引物， 分别将骨架区引物在κ链及 Ｆｄ 段５′端所造成的氨基酸残基改变纠正为原始序列， 构建分别含有矫正后κ链或矫正后 Ｆｄ 以及二个链均得到矫正的 Ｆａｂ 表达载体， 这些载体在大肠杆菌中均获得类似水平的表达， 对任何一个链的矫正均可部分恢复 Ｆａｂ 段胃癌细胞的结合活性． 结果说明在构建小分子抗体时， Ｐ Ｃ Ｒ 引物引入的轻。
- 李竞王琰王卓智刘群英化冰陈宇萍朱迎春董志伟
- 关键词：免疫球蛋白可变区基因单克隆抗体
- 金属螯合亲和层析法对抗HBsAg Fab段的纯化被引量：1
- 1996年
- 为了对大肠杆菌表达的Fab段进行简便有效的纯化,我们在Fab段表达载体上插入了一段编码六个组氨酸的DNA片段,使所表达的Fab段在Fd段的羧基端带有六个连续的组氨酸,通过金属螯合亲和层析法对大肠杆菌表达的Fab段进行纯化,利用不同pH梯度缓冲液洗脱,一步即可达到95%以上纯度的纯化.
- 王琰刘群英化冰朱迎春王雅明徐建军
