贾林涛
- 作品数：83 被引量：255H指数：8
- 供职机构：第四军医大学基础医学部更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 分泌表达的抗ErbB2单链抗体与重构型人半胱氨酸蛋白水解酶3融合蛋白对SKBr3细胞的靶向杀伤作用被引量：1
- 2003年
- 目的 探讨分泌表达的抗erbB2单链抗体与重构型人半胱氨酸蛋白水解酶 (caspase 3)融合蛋白对ErbB2抗原阳性肿瘤细胞的靶向杀伤作用。方法 将重构型人caspase 3基因亚克隆入pCMV e2 3scFv PEII PEIII相应位点 ,构建表达分泌型的抗erbB2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白基因的真核表达载体 pCMV e2 3scFv PEII revcasp 3,转染人T淋巴瘤细胞系Jurkat,筛选并建系 ,ELISA检测培养上清中融合蛋白的分泌表达以及对人乳腺癌细胞SKBr3生长的抑制作用 ,并将重组质粒经脂质体包裹后肌肉注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤的抑制作用 ,间接免疫荧光检测重构型人caspase 3蛋白在瘤体的靶向分布。结果 融合蛋白基因可通过Jurkat细胞分泌表达并杀伤SKBr3细胞 ,肌肉注射重组质粒明显延长荷瘤裸鼠生存时间 (延长 72 % )和抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长 (抑制率为77% )。间接免疫荧光染色显示重构型人Caspase 3融合蛋白具有靶向分布。结论 分泌表达的抗erbB2单链抗体与重构型人Caspase 3融合蛋白靶向诱导SKBr3细胞死亡。
- 张立红贾林涛于翠娟曲萍董海龙赵晶许彦鸣王成济杨安钢
- 关键词：分泌表达融合蛋白靶向杀伤作用CASPASE-3基因疗法
- 靶向X区的siRNA抑制乙型肝炎病毒基因的表达和复制被引量：4
- 2006年
- 目的构建针对乙型肝炎病毒(HBV)X基因的siRNA表达载体,观察其对HBV基因表达和复制的影响。方法设计并合成针对HBVX区基因的siRNA寡核苷酸,经退火形成双链后克隆入pSUPER载体,构建成功的siRNA表达载体与pTK-Hyg质粒共转染稳定表达HBV的HepG22·2·15细胞,潮霉素抗性筛选获得稳定细胞克隆,对所得细胞培养上清液中的HBsAg和HBeAg进行定量检测,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测靶基因mRNA的抑制效果,荧光定量PCR检测HBVDNA。结果成功构建了针对HBVX基因的siRNA表达载体pSUPER-X1和pSUPER-X2,两种siRNA均能明显抑制HepG22·2·15细胞的HBsAg和HBeAg分泌,抑制率分别为97%和88%,RT-PCR结果显示HBV的mRNA表达降低,荧光定量PCR结果证实siRNA能降低HBVDNA拷贝数2个数量级。结论载体产生的针对HBVX基因的siRNA能高效、特异地抑制HBV基因的表达和复制。
- 刘家云郝晓柯李庆霞黄红艳马龙洋温伟红贾林涛杨安钢
- 关键词：肝炎病毒乙型小分子干扰转染聚合酶链反应
- 人生长抑素受体-2和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶共表达细胞系的建立及其对5-氟胞嘧啶杀伤的敏感性被引量：3
- 2005年
- 目的建立共表达人生长抑素受体2(SSTR2)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)的细胞系,为“自杀基因”/前体药物系统联合SSTR2介导的放射性免疫杀伤和显像治疗肿瘤提供细胞模型。方法应用反转录PCR方法从人胚肾293细胞中克隆人sstr2基因,通过基因重叠延伸拼接(SOE)结合PCR方法将CD、内部核糖体进入位点(IRES2)和sstr2连接,并构建表达载体。体外转染人乳腺癌SKBr3细胞并筛选,通过间接免疫荧光检测SSTR2的表达,并研究前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)对上述细胞的杀伤作用。结果成功克隆了人sstr2基因,并构建了CD和sstr2基因的双顺反子表达载体,进一步建立了稳定转染上述表达载体的SKBr3细胞系,间接免疫荧光证实了SSTR2的表达,同时建系细胞能够被前体药物5-FC高效杀伤。结论本研究建立的人乳腺癌细胞系可以共表达sstr2和CD基因,为在体内研究放射性核素标记的SSTR2配体显像和免疫杀伤,并协同CD/5-FC治疗肿瘤奠定基础。
- 贾林涛汪静王喆李国全王智杨安钢
- 关键词：受体生长抑素胞嘧啶脱氨酶
- 针对HER2/neu的siRNA对非小细胞肺癌细胞生长的抑制作用被引量：4
- 2006年
- 目的:构建针对HER2/neu的RNA干涉载体,观察对HER2/neu表达抑制及抑制后对非小细胞肺癌生长的影响.方法:设计和合成长度为64nt的脱氧寡核苷酸链,退火互补成双链,克隆至pSUPER质粒载体,转化DH5α菌株,提取质粒,转染过表达HER2/neu的肺腺癌细胞系SPCA1,RTPCR检测HER2/neu的mRNA表达,Westernblot和间接免疫荧光法检测HER2/neu的蛋白表达,FCM分析细胞周期变化,MTT法观察细胞生长.结果:肺腺癌细胞系SPCA1存在HER2/neu过表达;成功构建了HER2/neu特异性RNA干涉载体pSUPERsiHER2;瞬时转染SPCA1细胞,HER2/neu的mRNA及蛋白表达均降低;G1期细胞较亲代增加9.9%;肿瘤细胞增殖速度减慢(P<0.05).结论:成功构建了HER2/neuRNA干涉载体,转染后可有效降低肺腺癌细胞系SPCA1HER2/neu的mRNA转录及蛋白水平表达,阻滞转染细胞于G1期,造成转染细胞生长速度减慢,这有望为肺癌基因治疗提供一种选择手段.
- 任新玲钱桂生鲍炜付海京贾林涛张瑞王涛许彦鸣杨安钢
- 关键词：SIRNARNA干涉HER2/NEU癌细胞生长
- HER2分子与肿瘤靶向治疗被引量：19
- 2006年
- HER2分子是表皮生长因子受体家族的第二位成员,对细胞的生长、分化及存活有着重要的调节作用,在乳腺癌、卵巢癌、肺腺癌、肾细胞癌中其过表达与否是患者预后的重要指标。研究表明它与表皮生长因子受体家族其他3位成员形成异二聚体,通过多种信号转导途径促进肿瘤的增殖、转移、耐药性的产生,是肿瘤基因治疗的重要靶位点。
- 鲍炜裘秀春贾林涛张立红王成济杨安钢
- 关键词：表皮生长因子受体基因治疗
- 重构型caspase-3的表达及其对SKBr3细胞的凋亡诱导作用被引量：2
- 2002年
- 目的:探讨重构型caspase-3基因的表达对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。方法:用重组PCR的方法获得大、小亚基顺序颠倒的重构型caspase-3基因并将其克隆入真核表达载体pcDNA3,转染乳腺癌细胞系SKBr3细胞,通过HE染色、流式细胞仪分析及免疫组化等方法观察其表达后对细胞的促凋亡活性,并将载体DNA直接注射荷瘤裸鼠研究其对肿瘤的抑制作用。结果:重构型caspase-3基因可在SKBr3细胞内表达,转染组较同期对照组出现明显的细胞死亡现象,pcDNA3-revcasp-3重组质粒直接注入对荷瘤裸鼠肿瘤生长有明显抑制作用。结论:重构型caspase-3基因表达可诱导SKBr3细胞凋亡。
- 张立红贾林涛陈广生曲萍于翠娟赵晶许彦鸣王成济杨安钢
- 关键词：凋亡SKBR3乳腺癌肿瘤细胞
- 重组抗HER2 ScFv/tbid基因的表达及其对乳腺癌SKBr-3细胞的促凋亡作用被引量：1
- 2006年
- 目的:观察构建的重组抗HER2ScFv/tbid基因在SKBr-3细胞中的表达及其对转染的SKBr-3细胞的作用.方法:用限制性内切酶双酶切已构建的pcDNA-bid质粒,获得带有PE转膜结构域和tbid的重组基因,将所获基因插入到真核表达载体pCMV单链抗体基因ScFv23e的下游,转染SKBr-3细胞.间接免疫荧光法检测目的蛋白的表达,MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况.结果:转染SKBr-3细胞后,检测出目的蛋白的表达.MTT实验发现细胞的增殖被明显抑制.间接免疫荧光双标记染色检测tBid的表达,并可观察到Cytc在细胞质中存在,SKBr-3细胞出现凋亡.结论:重组抗HER2ScFv/tBid分子可以在转染的SKBr-3细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡.
- 王芳裘秀春王立锋许彦鸣赵晶孟艳玲贾林涛王成济范清宇杨安钢
- 关键词：BID乳腺肿瘤
- BDNF基因重组逆转录病毒载体pLCNX-BDNF的构建与鉴定被引量：1
- 2001年
- 目的 构建含脑源性神经营养因子 (BDNF)基因的逆转录病毒载体 (pLCNX)质粒。 方法 利用多克隆酶切位点正向黏端连接 ,转化大肠杆菌感受态细菌DH5α获得质粒 ,双酶切电泳和PCR方法初步鉴定 ,并提交DNA测序工作站进行测序分析。结果 重组构建的质粒pLCNX BDNF完全正确 ,含有全长小鼠BDNF基因片段。结论 获得正确的含全长BDNF基因的 pLCNX BDNF质粒 。
- 高下贾林涛许彦鸣王枫王锦玲杨安钢
- 关键词：逆转录病毒科基因重组BDNF
- 医学分子生物学教学中培养批判性思维的探讨被引量：1
- 2012年
- 在八年制医学分子生物学教学中,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室尝试并探索批判性思维的培养,通过启发思考,鼓励提问,有"破"有"立"和探讨趋势,从多个角度促进学生更为全面的发展。
- 王立锋赵晶贾林涛卢兹凡药立波
- 关键词：分子生物学批判性思维
- 单链抗体融合重构型人caspase-3蛋白的靶向抑瘤作用研究被引量：3
- 2003年
- 目的 :探讨分泌表达的抗ErbB2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白对ErbB2抗原阳性肿瘤细胞的靶向杀伤作用。方法 :将重构型人caspase 3基因亚克隆入 pCMV e2 3scFv PEⅡ PEⅢ相应位点 ,构建表达分泌型的抗ErbB2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白基因的真核表达载体 pCMV e2 3scFv PEⅡ revcasp 3,转染人T淋巴瘤细胞系Jurkat,筛选并建系 ,ELISA检测培养上清中融合蛋白的分泌表达。用含有该融合蛋白的培养介质培养人宫颈癌细胞Hela、乳腺癌细胞SKBr3以及人卵巢癌细胞SKOV3等研究该蛋白对细胞生长的抑制作用 ;将转染建系的Jurkat细胞尾静脉注射SKBr3荷瘤裸鼠研究其对肿瘤的抑制作用 ,间接免疫荧光检测重构型人caspase 3蛋白在瘤体的靶向分布。 结果 :融合蛋白基因可通过Jurkat细胞分泌表达并杀伤ErbB2抗原阳性的SKBr3和SKOV3细胞而对ErbB2抗原阴性的Hela细胞生长无明显影响 ,尾静脉注射该细胞可靶向抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长。结论 :分泌表达的抗ErbB2单链抗体与重构型人caspase 3融合蛋白靶向诱导ErbB2抗原阳性肿瘤细胞死亡。
- 张立红贾林涛于翠娟鲍炜金明赵晶王成济杨安钢
- 关键词：HELASKBR3SKOV3
