高文伟
- 作品数：59 被引量：230H指数：9
- 供职机构：山西农业大学更多>>
- 发文基金：山西省科技攻关计划项目国家自然科学基金山西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 枯草杆菌可溶性YlyA蛋白的诱导表达与纯化研究被引量：1
- 2009年
- YlyA是枯草杆菌一种功能未知蛋白。本研究旨在建立可溶性YlyA的诱导表达体系和纯化方法，为其功能研究奠定基础。PCR扩增ylyA序列，将其克隆到pETMCSIII中构建表达载体pNG252，用IPTG诱导6×His-YlyA融合蛋白在大肠杆菌B121（DE3）中表达，对表达产物进行分析，最后对可溶性YlyA重组蛋白进行Ni^2＋-NTA亲和层析加以纯化。结果表明pNG252中ylyA的插入方向正确，序列无突变；用0．5mmol／L IPTG，37℃诱导3h时，YlyA虽高效表达，但为包涵体形式；调整诱导条件至0．05mmol／L IPTG，25℃，5h时，高效表达的YlyA部分转为可溶性蛋白。纯化后的YlyA浓度达204．2119μmol／L；调整洗涤液中的咪唑浓度至15mmol／L，pH至9，可使纯化蛋白的产量大幅提高。本文成功构建了YlyA高效可诱导表达载体，建立了可溶性蛋白的诱导表达条件，确立了Ni^2＋-NTA亲和层析纯化方法，所得的6×His-YlyA融合蛋白，可用于YlyA晶体结构和与功能分析。
- 高文伟霍乃蕊
- 关键词：枯草杆菌纯化
- 钙螯合羊骨胶原多肽的制备及表征分析被引量：19
- 2015年
- 为制备肽钙螯合物并探明肽钙螯合机理,对羊骨胶原多肽与CaCl2的螯合工艺进行优化并对肽钙螯合物进行表征分析。采用Box-Behnken中心组合设计及响应面分析法,确定了最佳螯合参数:肽钙质量比2∶1,pH值7.66,53℃螯合50 min,螯合率达67.24%。红外光谱、电镜分析及能谱扫描结果表明胶原多肽与Ca2+分别在多肽内部的C=O处及肽链末端的-NH2和-COOH处发生螯合,形成了铵盐和羧酸盐;多肽与Ca2+螯合后由疏松的片状结构变成了致密的小颗粒聚集体结构。红外光谱及能谱扫描同时也证实所制备的胶原多肽中有部分钙螯合肽的存在,说明酶解可使钙由羟基磷灰石形式转变为可溶性离子钙。研究结果可为新型钙制剂生产及畜骨的高值利用提供了参考。
- 韩克光甄守艳范华高文伟樊玮鑫吴锁柱霍乃蕊
- 关键词：螯合红外光谱电镜扫描
- 鸡源大肠杆菌耐药性分析及中药对大肠杆菌耐药性消除作用的研究被引量：57
- 2015年
- 研究鸡源大肠杆菌耐药性及中药对大肠杆菌耐药性消除作用。选择22种抗生素采用Kirby-Bauer法对山西省部分地区分离的20株致病性鸡源大肠杆菌进行耐药性检测,对分离菌株进行质粒分析和耐药质粒转化试验,并分析多种中药对大肠杆菌耐药性的消除作用。结果显示,20株试验菌对测试抗生素均存在不同程度的耐药性,其中5耐及5耐以上的菌株占分离菌株的90%,试验菌对青霉素耐药率最高(90%),其次为恩诺沙星(85%),而对黏杆菌素和呋喃妥因的耐药性最低;分离出12种质粒谱型,同一地区、同一鸡场菌株的质粒图谱相同或相似,不同地区菌株的质粒图谱不同,仅有部分相同或相近的流行质粒共存;对其中5株菌株进行耐药质粒的转化试验,发现同一质粒可编码1个至数个耐药性基因,不同质粒可以携带相同的耐药性基因;中药单剂或合剂对大肠杆菌的耐药性有一定的消除作用,其中黄芩的消除效果最好,中药处理后部分菌株质粒图谱无变化,只有黄连和双黄连造成2条质粒带丢失;对中药提取物作用后的消除子进行药敏试验,结果发现大肠杆菌对环丙沙星等多种抗生素恢复了敏感性。研究结果提示联合使用中药治疗鸡源大肠杆菌病有显著效果。
- 宁官保牛艺儒张鼎李宏全马海利高荣琨郝卫芳高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳田文霞
- 关键词：大肠杆菌耐药质粒中药
- 福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良软骨细胞凋亡被引量：9
- 2017年
- 为研究肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)软骨细胞的凋亡分布及凋亡相关基因的表达水平,将80羽1日龄健康AA肉鸡基础日粮饲养1周后,随机分为对照组和处理组,处理组饲喂添加100mg·kg-1福美双的日粮,采用HE染色和TUNEL法分别对肉鸡胫骨生长板软骨细胞的形态学和凋亡情况进行观察,同时采用Real-time PCR方法和免疫组化技术分别对软骨细胞中凋亡相关基因的mRNA转录水平及蛋白质表达水平进行检测。结果显示,福美双诱发TD后第1、2、4和6天,肉鸡生长板软骨栓形成逐渐增大,异常软骨细胞增加,TD病变区软骨细胞,尤其是肥大区软骨细胞凋亡程度明显增加。Real-time PCR检测结果显示,与对照组比较,TD生长板促凋亡基因Bax在试验第1、2、4和6天表达量极显著上调(P<0.01);Caspase-3在第1、2和4天表达量极显著增加(P<0.01);抗凋亡基因BAG-1表达下调,在试验第1和2天差异极显著(P<0.01)。免疫组化结果显示,第1和4天处理组Bax的蛋白表达量明显高于对照组。本研究提示肉鸡TD生长板软骨细胞凋亡与促凋亡基因的表达增强和抗凋亡基因的表达下降有关。
- 张宁李欣宁官保张鼎Ali Raza Jahejo李宏全马海利郝卫芳高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳高荣琨田文霞
- 关键词：福美双胫骨软骨发育不良软骨细胞细胞凋亡肉鸡
- A型产气荚膜梭菌的分离及鉴定被引量：3
- 2007年
- 从山西各鹿场采集鹿出血性肠炎急性病死鹿病料39例,通过病原微生物分离培养,形态学观察和血清型鉴定,初步表明分离到的产气荚膜梭菌主要是A型,对PCR产物的序列分析表明经过PCR得到了特异性的α毒素基因片段,因而A型产气荚膜梭菌是引起山西鹿场发生鹿出血性肠炎的主要致病菌。为该疾病的防治和疫苗研制提供依据。
- 高文伟郭宏伟任家琰蒋玉文杨茂荣赵玉臣柴奎强周县利
- 关键词：A型产气荚膜梭菌
- 鸭源、鸡源NDV对DF-1细胞的致病性特征被引量：1
- 2016年
- 新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起多种家禽发病的急性高度接触性疾病、为了研究鸡源和鸭源NDV体外致病特点，本研究选取鸡源GM和鸭源YC两株强毒接种于DF-1细胞，通过测定TCID50、细胞病变的程度及最大病变时细胞上清液的浓度，结果显示鸡源NDV—GM株最早于22h检测到HA阳性，先于鸭源NDV-YC株2个小时，2株病毒接种后70h左右HA均达到峰值，其中NDV-GM株HA峰值为5log2，低于NDV-YC株6log2，实验表明鸭源病毒对鸡源细胞有致病性，为研究鸭源病毒体外致病性差异研究奠定基础.
- 高诗敏马海利邓瑞林化丽珍闫芳田文霞高文伟
- 单酶水解羊骨粉效果比较及水解指标相关性分析被引量：11
- 2016年
- 以羊骨粉为底物,对7种蛋白酶的水解效果进行比较并对4种水解指标进行相关性分析,确定制备羊骨胶原肽的最佳用酶及最优指标,为生产实际提供参考,有利于羊骨的高值利用及养羊产业链的延伸。各种蛋白酶在单因素试验所确定的较优条件下水解,结果表明碱性蛋白酶效果最好,其次为复合蛋白酶和风味蛋白酶,这3种酶的水解度、短肽得率、多肽生成量及氨基态氮均显著高于其他4种酶。各指标间的相关性分析结果表明,所有蛋白酶的短肽得率与水解度之间的相关性最强,r值位于0.926-0.983之间,且4个指标间均呈极显著相关（P〈0.01）。对于水解度和短肽得率较低的胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,多肽生成量和氨基态氮得率之间r〉0.90。所以水解羊骨粉,制备胶原肽时,碱性蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶是最适工具酶,水解度或短肽得率是判断水解程度的最优指标。
- 韩克光甄守艳高文伟霍乃蕊
- 关键词：羊骨氨基态氮
- 福美双诱导的肉鸡胫骨生长板异常增殖软骨细胞相关基因表达研究
- 目的：探讨HDAC1、MTA1、H4、PCNA等与肿瘤发生和发展相关基因的差异表达与肉鸡TD发生之间的相关性.
方法：利用课题组已建立的肉鸡TD模型,采用荧光定量PCR技术及免疫组织化学技术,对TD模型胫骨生长...
- 张晨亮宁官保李宏全马海利高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳陈书明赵晋锋田文霞喻进王倩倩卢晓晓李娜娜李欣张宁张鼎
- 关键词：胫骨软骨发育不良福美双
- 文献传递
- 马立克病病毒感染鸡红细胞6种免疫相关因子转录水平的鉴定被引量：1
- 2018年
- 为了探究在感染马立克病病毒(MDV)后羽髓中病毒增殖情况以及红细胞中免疫相关因子的免疫应答反应,将4日龄雏鸡腹腔注射MDV超强毒株MD5,在攻毒后不同时间进行羽毛和血样采集,通过实时荧光定量PCR检测羽髓病毒载量和红细胞中6种免疫相关基因的mRNA表达水平。结果显示,在攻毒后第7天检测到MDV拷贝,并且14天检测到的拷贝数显著高于其他检测时间;与第14天对照组相比,攻毒组COX2的表达显著上调(P<0.05),而在第22天COX2的表达整体高于第14天(P<0.05);在第14和22天,PTGER4、HPGDS和GSTA3在攻毒组中的表达量显著低于对照组(P<0.05);与之相反,在第14天和第22天,PTGR1在攻毒组中的表达量显著高于对照组(P<0.05);第14天攻毒组的Ex-FABP表达水平显著低于对照组,而在第22天攻毒组显著高于对照组(P<0.05)。这表明感染MDV后红细胞中6种免疫基因发生显著的免疫应答,并且红细胞可能通过调节相关的免疫反应而在MDV感染过程中发挥一定的免疫调控作用。
- 牛胜李欣张宁宁官保张鼎Ali Raza Jahejo马海利郝卫芳高文伟赵宇军高诗敏李桂兰李建慧闫芳高荣琨毕玉海韩凌霞田文霞
- 关键词：红细胞马立克病病毒转录表达
- 鸡β-防御素-5的制备及其对HVT冻干疫苗免疫增强效果的分子佐剂效应的研究
- 2021年
- 为研究β-防御素-5(Av BD5)分子佐剂与HVT冻干疫苗联合免疫雏鸡后是否具有免疫增效功能,笔者构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Av BD5,制备了分子佐剂,将1日龄雏鸡随机分组分别注射PBS、空质粒pcDNA3.1(+)、分子佐剂、CVI988疫苗、HVT冻干疫苗以及分子佐剂联合HVT冻干疫苗。在鸡7、14、21、28、35日龄时,每组随机选取5只鸡,分别对其免疫器官指数、T淋巴细胞及血清抗体的含量进行计算或检测。结果显示,Av BD5基因扩增后测序,与数据库Av BD5基因同源性为100%。分子佐剂可促进脾和法氏囊的生长,并显著增加外周血中CD3^(+)、CD4^(+)T淋巴细胞的数量。与HVT冻干疫苗联合免疫后,可以显著增加血清中Ig G抗体的含量以及MD抗体的水平。结果表明,成功构建出重组表达质粒pcDNA3.1(+)-Av BD5,作为分子佐剂具有一定的免疫增强能力,可提高HVT冻干疫苗的免疫效力。
- 乔梦丽田志雄温钰蓉田文霞马海利高荣琨张鼎刘卿高文伟宁官保
- 关键词：马立克病病毒
