陈芳
- 作品数：3 被引量：9H指数：1
- 供职机构：中国科学院上海生命科学研究院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 欧文氏菌SCB125中2-酮醛糖酸还原酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：1
- 2001年
- 根据酶活测定和 PAGE活性染色初步证明欧文氏菌 SCB12 5中存在酶活较高的 2 -酮醛糖酸还原酶 (2 - KR) ,能够以 2 ,5 -二酮 - D-葡萄糖酸 (1)、2 -酮 - L -古洛糖酸 (2 )或者 2 -酮 - D-葡萄糖酸 (3)为底物。抽提欧文氏菌染色体DNA为模板 ,利用 PCR技术扩增 ,克隆得到两个 2 - KR酶基因 (tkr A和 tkr B) ,通过酶切和测序证明 :2 - KR A基因发生多处突变 ,而 2 - KR B基因保守。将含有这两个基因的片段分别连接到表达载体 p BL并转化大肠杆菌 DH 5α后 ,均获得高酶活表达。如果进一步用基因剔除的方法破坏欧文氏菌染色体上野生型 2 - KR基因 ,可以获得一个表达 1还原酶的理想宿主 ,为实现从葡萄糖一步发酵生产维生素 C前体
- 陈芳陈策实尹光琳
- 关键词：欧文氏菌PCR基因剔除前体药
- 水稻XA21受体激酶介导专化性抗病机制及质膜相关蛋白研究
- 陈芳
- 关键词：水稻XA21内吞作用抗病反应
- 欧文氏菌2-酮基醛糖还原酶基因敲除的研究被引量：8
- 2000年
- 根据已知基因序列 ,利用PCR技术 ,从克隆质粒和欧文氏菌 (Erwiniasp .)SCB1 2 5染色体中重新扩增得到含有 2 酮基醛糖还原酶A和B( 2 KRA和B)基因的片段 ,分别用于基因表达和敲除。用于表达的片段定向连接到表达载体 pBL并转化大肠杆菌DH5α后 ,获得高酶活表达。在证实发生了突变的基因表达产物仍具有酶活的基础上 ,对其进行基因敲除的研究。在体外将链霉素抗性基因插入到tkrA内部使其突变失活并作为阳性筛选标记 ,再将此突变基因构建到分配不稳定型质粒pBR32 2上 ,导入宿主菌后与染色体上正常基因进行同源重组交换 ,筛选质粒丢失的阳性菌落进行进一步鉴定。这项工作将为阻断旁路代谢 ,实现从葡萄糖一步发酵产生维生素C前体 2 酮基古龙酸 ( 2 KLG)打下基础。
- 陈芳陈策实李越尹光琳
- 关键词：维生素C基因敲除欧文氏菌
