陈新敏
- 作品数：16 被引量：47H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- hnRNPE2诱骗RNA逆转32D-BCR-ABL细胞四倍性的研究
- 2010年
- 目的初步探讨多聚胞嘧啶结合蛋白E2(hnRNPE2)诱骗RNA对逆转细胞的四倍体特性的作用。方法取32Dcl3细胞(小鼠正常髓母细胞),32D-BCR-ABL细胞(含人类bcr-ablcDNA的转化细胞),32DP210-pGD细胞和32DP210-pGM细胞(表达hnRNPE2诱骗RNA野生型序列pGD和突变性序列pGM的32D-BCR-ABL细胞)作为研究对象。采用流式细胞仪进行细胞的DNA倍体测定;对细胞进行染色体计数,确定染色体核型;采用Western blotting检测细胞cyclinB1和p53蛋白的表达。结果所有32Dcl3均为含40条正常染色体的二倍体细胞,32DP210-pGD细胞中,75.83%以上为二倍体细胞群;32DP210-pGM细胞与32D-BCR-ABL细胞内分别含81.25%和85.81%的四倍体细胞,含80条染色体。与32D-BCR-ABL细胞相比,32DP210-pGD细胞的cyclinB1蛋白水平表达下调,p53蛋白水平无明显变化;32DP210-pGM细胞的cyclinB1和p53蛋白表达均无明显变化。结论 hnRNPE2诱骗RNA能逆转32D-BCR-ABL细胞的四倍体特性。
- 王雅珍袁颖曾建明魏容彭智肖青陈新敏冯文莉
- bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病样模型的建立被引量：4
- 2008年
- 目的：构建bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病（CML）样模型,为深入研究CML发病机制和治疗奠定基础.方法：bcr-abl逆转录病毒Mig210载体经Phoenix-Ampo细胞包装后,取上清液感染5-FU处理后的BALB/c雄性小鼠骨髓细胞,再经尾静脉移植入经致死剂量γ射线（900cGy）照射的同种雌性受体鼠中.用形态学、RT-PCR和Western Blot鉴定小鼠成模情况.结果：小鼠移植8-9 wk后,外周血白细胞达2×10^10-3×10^10/L（为对照鼠的5-8倍）,外周血涂片幼稚细胞达到0.10-0.20;骨髓粒系细胞显著增高,易见幼稚细胞,肝脾也可见白血病细胞浸润;移植4-5 wk后在受体鼠骨髓和脾脏检出bcr-abl融合基因,8-9 wk后在肝脏亦检测出bcr-abl融合基因,同时在骨髓和脾脏也检测到bcr-abl融合蛋白.建模成功的小鼠3-5 mo后相继死亡.结论：成功建立bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠CML模型,可用于后续CML信号通路和治疗机制的研究.
- 张文萍冯文莉黄世峰史梦王雅珍曾建明李惠温健萍陈新敏曹唯希黄宗干
- 关键词：慢性粒细胞白血病逆转录病毒载体动物模型
- HnRNPE2 decoy RNA恢复C/EBPα活性诱导32D-P210的细胞粒系分化
- 2009年
- 目的:采用核不均一核糖核蛋白E2(hnRNP E2)decoy RNA靶向阻断CCAAT增强子结合蛋白alpha(C/EBPα)基因的异常翻译,诱导小鼠白血病样32D-P210细胞株向粒系分化,并进一步探讨其分子机制.方法:电穿孔法分别将野生型和突变型hnRNP E2 decoy RNA表达质粒转染入32D-P210细胞,经G418筛选出稳定株后,RT-PCR检测C/EBPa,粒细胞集落刺激因子受体(G-CSFR)与髓过氧化物酶(MPO)基因的mRNA水平;WesternBlot检测C/EBPa,G-CSFR的蛋白表达水平;瑞氏染色观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)刺激前后细胞形态;流式细胞仪检测分化抗原Gr-1,CD11b的表达.结果:筛选到分别稳定表达野生型或突变型hnRNP E2 decoy RNA的TG细胞株和TGA细胞株.与未转染组32D-P210细胞相比,TG细胞株C/EBPa mRNA水平无改变,但42ku-C/EBPa蛋白、G-CSFR mRNA和MPO mRNA水平分别升高了(43.8±4.9)%,(69.1±3.2)%和(37.8±4.2)%(P<0.05);G-CSF刺激后,TG细胞出现中、晚幼粒细胞甚至成熟粒细胞形态学特征;同时Gr-1分化抗原的表达率上升至40.3%,未转染组32D-P210细胞的Gr-1表达率5.5%(P<0.05);然而CD11b在3组细胞都是高表达,没有明显的变化(P>0.05);以上各参数在TGA细胞株与未转染组32D-P210细胞株间均无显著性差异(P>0.05).结论:hnRNP E2 decoy RNA能够诱导32D-P210细胞向粒系分化,其机制可能与decoy RNA特异性阻断hnRNAE2与C/EBPα mRNA非翻译区结合,调节C/EBPα mRNA翻译,恢复42ku-C/EBPα表达,上调其下游G-CSFR和MPO等分化基因的表达有关.G-CSF可加速这一作用从而促进32D-P210细胞的分化过程.
- 魏容曾建明袁颖王雅珍黄世峰罗红伟肖青陈新敏冯文莉
- 关键词：DECOYRNA
- 抗环瓜氨酸肽抗体的研究进展被引量：2
- 2003年
- 抗环瓜氨酸肽抗体的ELISA检测试验是一种新型的血清学试验 ,可用于类风湿关节炎的临床诊断。其对类风湿关节炎的诊断有高度特异性 ,故其底物抗原的分子结构、检测方法及临床意义成为近年来抗环瓜氨酸肽抗体的研究热点。
- 江咏梅蒋敏陈新敏
- 关键词：抗环瓜氨酸肽抗体类风湿关节炎
- 慢性粒细胞白血病急变的机理被引量：4
- 2005年
- 慢性粒细胞白血病急性变与多种基因异常以及白血病细胞的细胞生物学改变密切相关,其急变的机理一直是国内外研究的热点。本文主要介绍这方面的研究进展。
- 陈新敏冯文莉
- 关键词：急变基因异常急性变白血病细胞
- 稳定表达BCR／ABL的小鼠BaF3-P210细胞株的建立及其生物学特性的研究被引量：12
- 2008年
- 目的构建能稳定表达BCR/ABL的小鼠转化细胞株BaF3-P210,并初步探讨BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。方法将含有bcr/abl基因的逆转录病毒载体转染到包装细胞,收集病毒感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆,获得稳定表达BCR/ABL的转基因BaF3-P210细胞。用PCR、DNA测序、RT-PCR和Westernblot检测bcr/abl基因在靶细胞中的整合和表达;用台盼蓝细胞计数法、流式细胞仪(FCM)和MTT法研究BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。结果bcr/abl基因整合在BaF3细胞基因组中,BaF3-P210细胞能稳定表达bcr/abl基因及其蛋白。与对照组相比,BaF3-P210细胞增殖速度增快(P<0.05);G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞比例增高(P<0.05);经STI571处理后的细胞增殖抑制率为(54.08±1.90)%(P<0.05),早期凋亡率为(12.35±2.04)%(P<0.05)。结论成功构建的能稳定表达BCR/ABL的小鼠BaF3-P210转化细胞株具有增殖能力增强、细胞周期进程加速和对STI571敏感的恶性表型特征。
- 史梦冯文莉张文萍王小中黄世锋曾建明温健萍陶昆陈新敏曹唯希黄宗干
- 关键词：慢性粒细胞白血病BCR/ABL融合基因逆转录病毒载体
- HnRNP E2诱骗RNA对白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制被引量：4
- 2006年
- 背景与目的:BCR/ABL诱导多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-bindingproteinE2,hnRNPE2]的异常表达在慢性粒细胞白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)急变中起着重要作用。本研究探讨hnRNPE2诱骗RNA(decoyRNA)对人白血病细胞K562增殖的影响,并初步探讨其可能的分子机制。方法:构建能转录出hnRNPE2诱骗RNA的质粒载体,将其经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出稳定表达的细胞,台盼蓝法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期,并用RT-PCR和Westernblot方法检测下游CCAAT增强子结合蛋白!(CCAAT/enhancer-bindingprotein!,C/EBPα)和c-myc的表达。结果:稳定表达诱骗RNA的K562细胞增殖受抑,增殖抑制率为(62.73±12.92)%;细胞周期阻滞于S期[稳定表达诱骗RNA细胞组(55.59±4.67)%,对照组(44.70±4.21)%,P<0.05];C/EBPαmRNA无改变,但在蛋白水平42ku-C/EBPα表达升高了(49.72±5.58)%;c-mycmRNA下降了(58.27±7.23)%,蛋白水平降低了(57.26±6.52)%。结论:hnRNPE2诱骗RNA能抑制K562细胞的增殖,其机制可能与诱骗RNA阻断hnRNPE2和C/EBPαmRNA的结合后,引起42ku-C/EBPα表达升高有关。
- 陈新敏冯文莉赵世巧曾建明白卫君王小中黄宗干
- 关键词：白血病K562细胞
- 血管内皮生长因子受体与恶性肿瘤被引量：11
- 2003年
- 肿瘤的生长和转移依赖于新生血管的形成 ,已知有多种细胞因子、生长因子及其受体参与了血管形成的调控 ,其中血管内皮生长因子 (VEGF)可能是最关键的刺激因子。而VEGF的生物学效应是通过其特异性的膜受体介导实现的 ,迄今发现VEGF有三种受体 :VEGFR 1、VEGFR 2、VEGFR 3。它们在血管生成中的调节作用和以VEGFR为靶点的抗肿瘤治疗研究 ,是当前研究的热点。
- 胥文春陈新敏罗春丽
- 关键词：血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体恶性肿瘤病理
- 探讨多聚胞嘧啶结合蛋白E2诱骗RNA对32D-BCR／ABL细胞增殖的影响被引量：5
- 2009年
- 目的:在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)由慢性期向急性期的过渡阶段伴随有多聚胞嘧啶结合蛋白E2[poly(rC)-binding protein E2,hnRNP E2]的异常表达。本研究初步探讨hnRNP E2诱骗RNA(decoy RNA)对32D-BCR/ABL细胞增殖的影响及其可能的分子机制。方法:用电转染方法将hnRNP E2诱骗RNA野生序列和突变序列的表达载体(pGD和pGM)转入32D-BCR/ABL细胞,用G418筛选出稳定表达诱骗RNA的细胞。锥虫蓝染色法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力。FCM分析细胞周期,RT-PCR和Western印迹法检测下游CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-bindingproteinα,C/EBPα)和c-Myc的表达。结果:筛选出稳定表达野生型和突变型诱骗RNA的32DP210-pGD细胞和32DP210-pGM细胞。野生型32DP210-pGD细胞与未转染32D-BCR/ABL细胞相比,其细胞增殖抑制率为(69.48±5.21)%,克隆形成能力明显减弱,细胞周期由G0/G1期向S期进展受阻;C/EBPαmRNA水平无改变,但在蛋白水平上42 ku-C/EBPα的表达增加(43.83±4.91)%;c-Myc mRNA水平下降(35.67±6.64)%,蛋白水平降低(30.91±3.84)%。突变型32DP210-pGM细胞与未转染32D-BCR/ABL的细胞相比,其上述各指标无明显差异。结论:hnRNP E2诱骗RNA能够抑制32D-BCR/ABL细胞的增殖,其机制可能是诱骗RNA阻断hnRNP E2和C/EBPαmRNA的结合,引起42 ku-C/EBPα表达增加,进而引起其下游靶基因c-Myc下调。
- 王雅珍曾建明袁颖魏容彭智肖青刘钉宾黄世峰陈新敏冯文莉
- 关键词：白血病髓样慢性细胞增殖
- 慢性粒细胞白血病bcr／abl的糖基化磷脂酰肌醇锚定修饰及在COS-7细胞膜上的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建与糖基化磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidyl inositol,GPI)锚定序列相连的bcr/abl真核表达质粒,并检测其在COS-7细胞中基因和膜蛋白的表达。方法以编码慢性粒细胞白血病bcr/abl融合蛋白全长序列的migP210质粒为模板,通过PCR扩增获得654 bp的bcr/abl融合基因片段,双酶切后定向插入真核表达载体pBudCE4.1中,经鉴定获得重组质粒pBB。同时用RT-PCR扩增人外周血淋巴细胞CD24分子中的GPI获得约243 bp的锚定序列,双酶切后克隆入pBB质粒中与bcr/abl基因下游羧基端相连,获得重组质粒pBBG。在多聚阳离子介导下将pBBG质粒转染COS-7细胞,采用RT-PCR和Western blot检测bcr/abl融合基因和蛋白的表达。结果经酶切和测序鉴定证实,由GPI锚定连接的bcr/abl融合基因插入片段正确;RT-PCR检测到转染细胞中有bcr/abl融合基因,Western blot检测到转染细胞膜上有bcr/abl融合蛋白的表达。结论成功构建由GPI锚定修饰的bcr/abl重组质粒pBBG,并能在COS-7细胞膜上表达出bcr/abl融合蛋白。
- 陶崑王东曾建明黄世峰陈新敏黄宗干冯文莉
- 关键词：BCR/ABL融合基因GPI慢性粒细胞白血病
