殷俊磊
- 作品数：24 被引量：71H指数：5
- 供职机构：江苏省人兽共患病学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省优秀科技教育人才省长资金项目贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 山羊痘病毒P32基因真核表达载体的构建
- 根据已发表的山羊痘病毒P32基因序列设计合成一对带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的引物,用PCR方法从分离贵州LD毒株中扩增出含P32基因的DNA序列,纯化后,经BamHⅠ/HindⅢ双酶切,克隆至真核表达载体pcDN...
- 周碧君殷俊磊文明程振涛杨颖
- 关键词：山羊痘P32基因真核表达载体PCDNA3.1(+)
- 文献传递
- SYBR GreenⅠ荧光RT-PCR方法快速鉴定新城疫病毒毒力
- 2008年
- 为快速鉴定不同新城疫病毒株（NDV）毒力，我们以NDVF蛋白裂解位点附近的基因序列自行设计1对引物，对不同毒力NDV毒株进行荧光RT—PCR扩增，根据其扩增效率及扩增产物熔解温度（Tm）值大小进行NDV毒株毒力的鉴定，建立了能区分NDV强弱毒株的SYBR GreenⅠ荧光RT—PCR方法；同时将其与鸡胚平均致死时间（MDT）测定和F蛋白裂解位点序列分析结果进行比较。结果发现：建立的SYBR GreenⅠ荧光RT—PCR方法只需4h即呵判定结果，NDV强弱毒株扩增产物Tm值为（83±0．5）℃且有2个峰值，阴性对照Tm值为（81±0．5）℃且只有1个峰值；对NDV强毒株的扩增效率即Ct值在11-20之间，NDV弱毒株Ct值在25～30之间，阴性对照Ct值在30以上，Ct值在20～25之问为强弱毒株混合物。该方法检测结果与MDT测定和F蛋白裂解位点分析结果一致。应用SYBRGreenI模式荧光RT—PCR方法与普通RT—PCR方法和鸡胚接种鉴定方法分别对80份临床组织样品进行检测，强毒株的检出率均为53．75％（43／80），而弱毒株的检出率相应为31．25％（25／80）、27．50％（22／80）和35．00％（28／80），检出符合率达89．3％以上。这些结果表明建立的SYBR GreenⅠ荧光RT—PCR方法具有特异、准确、快速等特点，可用于临床病料样本NDV毒株的毒力鉴定。
- 伍祥龙殷俊磊伍明山文明周碧君李永明
- 关键词：新城疫病毒SYBR毒力
- 一种基于P32基因山羊痘DNA疫苗及制备方法
- 本发明公开了一种基于P32基因山羊痘DNA疫苗及制备方法，含山羊痘病毒P32基因的真核表达质粒pVAX1-P32，质粒浓度为3mg~10mg/mL。本发明山羊痘口服疫苗安全有效，可诱导山羊产生机体产生特异性的体液免疫、细...
- 周碧君殷俊磊程振涛文明王开功朱时杰
- 文献传递
- 香猪场猪支原体肺炎的病原检测
- 2010年
- 浦同灿马磊殷俊磊嵇辛勤
- 关键词：猪支原体肺炎病原检测慢性呼吸道传染病地方流行性肺炎猪喘气病
- 贵州省新城疫分子流行病学研究
- 2010年
- 应用PCR技术对贵州省不同时期NDV分离株包括肉鸡源P1株与BY株、蛋鸡源H2株与FW株、七彩山鸡源N98株、越南斗鸡源DQ株、鸵鸟源TN株及鸽源GZ株进行F蛋白基因的扩增,并分别进行克隆和测序,然后与国内外NDV参考毒株的对应序列进行比较分析。结果表明:8株贵州省NDV分离株的F基因长度均为1 662 bp,可编码553个氨基酸;贵州省NDV分离株间的核苷酸同源性为84.0%～99.7%,氨基酸同源性为87.5%～99.3%;与国内外NDV参考毒株(La Sota株、B1株、F48E9株、CH2000株和TW2000株)的核苷酸同源性为84.2%～98.9%,氨基酸同源性为87.2%～98.6%;经系统发育进化树分析,DQ株、N98株、P1株和H2株为基因Ⅶ型(均为Ⅶd亚型),而BY株和FW株为基因Ⅸ型,GZ株和TN株为基因Ⅱ型。这些结果提示贵州省不同禽类间存在相同NDV毒株感染的可能性,不同时期NDV分离株发生了基因型改变,且近年来贵州省流行的新城疫(ND)疫情主要是由基因Ⅶ型NDV引起。
- 杨忠成周碧君文明殷俊磊伍祥龙温贵兰
- 关键词：F基因基因型
- 贵州省新城疫分子流行病学研究被引量：1
- 2010年
- 应用RT-PCR技术对贵州省不同时期不同禽源NDV分离株（肉鸡源P1株与BY株、蛋鸡源H2株与FW株、七彩山鸡源N98株、越南斗鸡源DQ株、鸵鸟源TN株及鸽源GZ株）F蛋白基因进行扩增、克隆和测序分析,结果表明：8株NDV贵州分离株F基因长度均为1 662 bp,可编码553个氨基酸;NDV贵州分离株间核苷酸同源性为84.0%-99.7%,氨基酸同源性为87.5%-99.3%;与国内外NDV参考毒株（LaSota株、B1株、F48E9株、CH2 000株和TW2 000株）的核苷酸同源性为84.2%-98.9%,氨基酸同源性为87.2%-98.6%;GZ株和TN株为基因II型,DQ株、N98株、P1株和H2株为基因VII型（均为VIId亚型）,BY株和FW株为基因IX型。表明,不同时期NDV贵州分离株的基因型不同,近年流行的ND疫情主要是由基因VII型NDV引起,与国内其他省市ND流行趋势基本一致。
- 高颖殷俊磊伍祥龙周碧君文明温贵兰
- 关键词：新城疫病毒F基因基因型
- 链球菌通用PCR检测方法的建立及应用被引量：12
- 2009年
- 为建立链球菌快速检测方法，根据链球菌延伸因子ERTu基因设计合成1对通用引物，对链球菌属及其他属细菌进行PCR检测。结果表明，所设计的通用引物对猪链球菌2型和无乳链球菌均能扩增出1条大小为197bp的特异性DNA条带，而对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌、绿脓杆菌、都柏林沙门氏菌和多杀性巴氏杆菌均呈阴性反应；经对PCR产物进行测序分析表明，扩增片段与GenBank上链球菌相应序列的同源性达90％～98％；对链球菌DNA样本不同稀释度的检测显示，该PCR的最低检出量可达0．1ng／mL；利用PCR检测方法对11株链球菌分离物进行检测，结果均能扩增出与预期大小相一致的目的条带，与传统生化鉴定结果符合率达到100％。这些结果表明，已成功建立了链球菌PCR检测方法，并可应用于临床链球菌的鉴定。
- 杜海燕李基棕周碧君王开功杨颖殷俊磊文明
- 关键词：链球菌PCR
- 山羊痘重组沙门菌S7207/pVAX1-P32安全性及稳定性的研究
- 引言山羊痘是由山羊痘病毒引起的一种严重危害山羊的高度接触性传染病,该病高死亡率给养羊业造成了巨大的经济损失。目前对于山羊痘的预防主要是采用国家统一生产的山羊痘弱毒疫苗进行肌肉注射免疫。由于山羊一般进行放养,在进行免疫时比...
- 周碧君朱时杰文明王开功程振涛殷俊磊
- 关键词：山羊痘安全性
- 复合益生素对仔猪免疫功能的影响被引量：12
- 2011年
- 为了解复合益生素(嗜酸乳杆菌+干酵母)对仔猪免疫功能的影响。选取60头日龄相同、体重相近的初产仔猪,分为复合益生素组(基础日粮+0.2g/kg干酵母+0.4g/kg嗜酸乳杆菌液)、嗜酸乳杆菌组(基础日粮+0.4g/kg嗜酸乳杆菌液)、鱼肝油乳组(基础日粮+10mL/kg鱼肝油乳)、基础对照组(基础日粮)4组,15头/组,用ELISA试剂盒检测不同日龄、不同组别仔猪外周血总IgG、IL-2、IL-5和IFN-γ的含量变化。结果显示,从15～55日龄添加复合益生素增加总IgG、IL-2、IL-5和IFN-γ的量分别为102.76%、62.63%、53.71%和33.45%,明显高于其它组。可见,复合益生素能够更好的增强仔猪的免疫功能。
- 杨旭辉王开功殷俊磊朱时杰马俊鸽文明周碧君程振涛张双翔
- 关键词：仔猪复合益生素IGGIL-2IL-5IFN-Γ
- 应用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法检测人工感染雏鸭体内DEV NP基因表达水平被引量：2
- 2011年
- 为阐明DEV的感染与致病机理,更深入地研究病原与鸭体的相互关系。将鸭肠炎病毒(DEV)强毒GZ株经腿部肌肉注射感染15日龄雏鸭后,应用建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法对NP(病毒核衣壳蛋白)基因转录物进行定量,以检测NP基因在雏鸭体内各组织的表达水平。结果显示:NP基因在所检组织中均有表达,感染后3 h即可在肝、脾、脑、胸腺、肾和肺6种组织中检测到NP基因的表达;感染后6 h,除上述组织外还可在十二指肠和盲肠检测出;感染后10 h又可在胸肌和心肌等检测出。不同受检组织检出量有所不同,且在感染后30或48 h达到高峰,持续至96 h,之后均有所下降。
- 杨颖夏梦殷俊磊杜海燕周碧君文明
- 关键词：鸭肠炎病毒NP基因雏鸭
