文明
- 作品数：733 被引量：2,012H指数：18
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省科技支撑计划贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株Nsp10的表达及鉴定
- 2012年
- 为获得猪繁殖与呼吸综合征病毒JL株非结构蛋白Nsp10,以克隆质粒pMD18-T-Nsp10/JL为模板,将Nsp10基因克隆至原核表达载体pET-32a,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,对不同温度和IPTG浓度进行优化,以获得Nsp10蛋白表达的最佳条件,采用SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,并通过Western blotting检测其免疫活性。结果表明,Nsp10基因成功克隆至pET-32a,有分子量约为43.4 kD的融合蛋白获得表达,重组蛋白于诱导4 h后达到高峰,IPTG浓度为0.2-1.2 mmol/L时,重组蛋白表达量无明显差异,Western blotting证实该表达蛋白具有反应原性。
- 周思旋徐健周碧君文明王开功
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 细菌内毒素对鸭禽流感疫苗免疫效果的影响
- 2013年
- 为了研究低剂量细菌内毒素对鸭禽流感疫苗免疫效果的影响,从三穗县万顺养殖场三穗鸭繁育基地选取5日龄健康三穗麻鸭140只,随机分为4组,即空白对照组、疫苗对照组、黄芪多糖组和内毒素组,空白对照组不作任何注射,其他组参考常规免疫程序在注射禽流感疫苗的同时分别注射黄芪多糖或细菌内毒素,应用间接血凝试验、ELISA试验和MTT法检测细菌内毒素对禽流感疫苗的影响。结果表明:免疫后52日龄禽流感抗体效价达到高峰,其中内毒素组与疫苗对照组比较差异极显著(P<0.01);免疫后38日龄T淋巴细胞转化效率(OD490值)达到高峰,其中内毒素组与疫苗对照组比较差异极显著(P<0.01);免疫后52日龄鸭INF-γ水平(OD450值)达到高峰,其中内毒素组与疫苗对照组比较差异显著(P<0.05)。说明细菌内毒素能够有效提高鸭禽流感疫苗的免疫效果。
- 阮涌嵇辛勤文明刘济丹傅心亮刘廷江李世静
- 关键词：细菌内毒素免疫增强剂禽流感
- 三带喙库蚊体内猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与鉴定被引量：2
- 2009年
- 【目的】调查猪场蚊虫是否能携带猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒。【方法】采集发生PRRS疫情的3个养猪场蚊虫样本,采用RT-PCR方法检测PRRS病毒核酸,取阳性蚊虫样本接种Marc-145细胞进行病毒的分离培养,以间接免疫荧光抗体技术和分子克隆技术进行病毒的鉴定。【结果】养猪场内的蚊虫主要有三带喙库蚊Culex tritaeniorhychus、凶小库蚊Culexmodestus、中华按蚊Anopheles sinensis和骚扰阿蚊Armigeres obturbans,其中三带喙库蚊占86.76%;以PRRS病毒N基因引物进行扩增,三带喙库蚊样本呈现阳性反应,而其他蚊种均为阴性。在蚊虫接种的Marc-145细胞中可见细胞融合和空泡形成等细胞病变效应;用抗PRRS病毒N蛋白抗体和羊抗猪IgG(H+L)-FITC进行间接免疫荧光染色,感染细胞呈现黄绿色荧光;以NSP2基因引物进行RT-PCR扩增、克隆与测序,发现库蚊源病毒与相应猪场猪源病毒中相应基因的序列具有较高同源性。【结论】三带喙库蚊为猪舍优势蚊种,并能携带猪繁殖与呼吸综合征病毒。
- 史开志文明周碧君王开功汪德生
- 关键词：三带喙库蚊猪繁殖与呼吸综合征病毒猪场
- 发酵红薯渣对鲤鱼生长性能、消化酶活性及肠道菌群的影响被引量：3
- 2023年
- 试验旨在研究发酵红薯渣(FSP)对鲤鱼生长性能、消化酶活性及肠道菌群的影响。选取120尾健康无病、初始体重为(408.36±26.12)g的鲤鱼,随机分为4组,FSP0组、FSP10组、FSP20组、FSP30组分别在基础饵料中添加0、10%、20%、30%FSP,每组3个重复,每个重复10尾鲤鱼。试验期42 d。结果显示,FSP20组鲤鱼特定生长率最高。FSP30组鲤鱼肠道淀粉酶和脂肪酶活性显著高于FSP0组(P<0.05)。随着发酵红薯渣添加量的提高,鲤鱼肠道变形菌门相对丰度从68.77%提高至98.55%(P<0.05),厚壁菌门相对丰度从20.58%降低至0.60%(P<0.05)。研究表明,发酵红薯渣可提高鲤鱼的生长性能和消化酶活性,调节肠道菌群结构,添加20%发酵红薯渣饲喂鲤鱼较为适宜。
- 王微杨泽敏罗永荣刘馨温贵兰陈江凤陈江凤文明
- 关键词：鲤鱼消化酶肠道菌群
- 鸡滑液囊支原体LP78蛋白重组腺病毒载体的构建及雏鸡免疫原性评价
- 2024年
- 选取鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)LP78蛋白,将LP78基因克隆至pMD19-T载体上后,采用腺病毒Ad-Max系统将pMD-LP78重组克隆质粒连接到穿梭载体pDC316-mCMV-EGFP上构建重组穿梭质粒pDCLP78,将pDC-LP78重组穿梭质粒与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1、3cre共转染HEK 293A细胞包装成重组腺病毒pBH-LP78,RT-PCR及Western blot鉴定HEK 293A细胞系包装的重组腺病毒pBH-LP78。测定病毒滴度;再通过腿部肌肉免疫接种构建的重组腺病毒pBH-LP78,并用ELISA方法检测免疫鸡血清中的特异性抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6)的分泌情况。PCR、双酶切鉴定和测序结果显示,成功构建了重组克隆质粒pMD-LP78和重组穿梭质粒pDC-LP78;RT-PCR及Western blot结果显示,目的基因在HEK 293A细胞中稳定表达;ELISA结果显示,血清中LP78特异性抗体和细胞因子(IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-6)的分泌量极显著升高(P<0.01),表明pBHLP78重组腺病毒能刺激鸡机体产生体液和细胞免疫应答。结果表明,成功构建了MS重组腺病毒载体疫苗pBHLP78,其可有效引起鸡机体产生体液和细胞免疫应答,为MS新型重组腺病毒载体疫苗的研发奠定了基础。
- 赵超宋春单春兰胡茜王永璇韩帅博肖琨文明朱二鹏程振涛
- 关键词：鸡滑液囊支原体重组腺病毒
- 基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法建立与应用被引量：4
- 2022年
- 为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优化,建立检测禽流感病毒H6抗体的间接ELISA方法并对临床鸡血清样本检测评价。结果表明:该方法最佳反应条件是,包被抗原浓度为10μg/mL,4℃过夜;5%脱脂奶粉37℃封闭2 h;血清稀释度为1∶20,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1∶5000,37℃作用30 min;显色时间为37℃10 min。该ELISA方法可特异性检测H6亚型禽流感抗体,阳性血清稀释至1∶320仍可检出,与其他禽病阳性血清均无交叉反应,检测变异系数均小于10%。以该ELISA方法检测2017年至2019年收集的1837份家禽临床血清样本,H6亚型禽流感抗体阳性率为10.45%。这些结果表明,建立的基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性、重复性和可靠性,能为H6亚型禽流感血清流行病学调查提供技术手段。
- 王微张霞张人俊胡安东杨颖温贵兰温贵兰
- 关键词：间接ELISA方法
- 靶向PKCI基因RNAi对DEV增殖的影响被引量：2
- 2016年
- 为研究蛋白激酶C抑制蛋白(PKCI)在鸭肠炎病毒增殖的作用机制,根据Gen Bank PKCI基因序列,设计并构建p Silencer-PKCI-l^4,比较后选取抑制效率最高的p Silencer转染DEF细胞,采用荧光显微镜法和FQ-PCR法分析靶向PKCI基因RNA干扰下PKCI基因转录变化。结果显示:p Silencer-PKCI-1~4分别转染DEF细胞,其沉默效率分别为70.01%、66.45%、74.6%和76.02%;p Silencer-PKCI-4转染DEF细胞48 h,对DEV-NP基因转录的沉默效率最高,为64.97%;p Silencer-PKCI-4转染24 h后再感染DEV,在36 h时p Silencer-PKCI-4对DEV-NP基因转录的沉默效率最高,为54.25%;感染DEV 24 h后再转染p Silencer-PKCI-4,再处理72 h时p Silencer-PKCI-4对DEV-NP基因转录的沉默效率最高,为47.83%。本试验结果以期为鸭肠炎病毒核衣壳蛋白的致病机理研究奠定基础,为DEV的防控提供新思路。
- 罗乐熊朝丽郑敏吴良涛文明
- 关键词：鸭肠炎病毒RNA干扰
- 倒毛鸡生物学特性、屠宰性能及肉质性状研究被引量：1
- 2016年
- 为保护贵州地区倒毛鸡的种质资源和遗传多样性,研究其生长性能和肉用价值,试验对倒毛鸡的生物学特性、屠宰性能及肉品质进行了测定。结果表明:倒毛鸡的蛋重为(42.75±2.18)g,孵化率约为75%。倒毛鸡在0日龄时,公、母鸡之间的体重差异不显著(P>0.05),30日龄后差异达显著水平(P<0.05),180日龄平均体重公鸡为1 776.12 g、母鸡为1 455.68 g,差异显著(P<0.05)。180日龄腹脂率母鸡高于公鸡,而活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重、腿肌重、屠宰率、全净膛率、腿肌率等性状指标公鸡优于母鸡,差异均显著(P<0.05);其他性状指标在性别间差异不显著。公、母鸡腿肌p H值和剪切力均高于胸肌,失水率低于胸肌,公、母鸡之间差异均不显著(P>0.05)。品尝实验显示,倒毛鸡肉质细嫩、味道鲜美,比普通土鸡更受欢迎。结论:倒毛鸡具有较好的肉用性能,有较大开发价值和发展前景。
- 王凡刘忠伟金志强文明欧德渊
- 关键词：种源保护生物学特性屠宰性能肉质性状
- 从江香猪IFN-β基因的序列分析及原核表达被引量：6
- 2019年
- 试验旨在探明从江香猪β-干扰素(interferon-beta,IFN-β)基因编码区分子序列及原核表达产物特征。以从江香猪为研究对象,提取肝脏总RNA并反转录为cDNA,设计特异性引物扩增IFN-β基因编码区,将目的基因片段克隆至原核表达质粒pET-28a上,获得重组质粒pET28a-CJpoIFN-β,并利用生物学软件对江香猪IFN-β基因编码区进行序列分析;将鉴定正确的重组质粒pET28a-CJpoIFN-β转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达、SDS-PAGE与Western blotting分析原核表达蛋白。结果表明,从江香猪IFN-β基因编码区长为561bp,编码186个氨基酸;该蛋白为分泌性蛋白,前21个氨基酸为信号肽序列;二级结构主要以α-螺旋(77.42%)和无规则卷曲(17.74%)为主。从江香猪与其他猪源IFN-β基因核苷酸序列同源性为99.5%～100.0%,与禽的同源性最低(35.2%);从江香猪与巴马猪、梅山猪IFN-β氨基酸同源性均为100.0%,但与贵州白香猪IFN-β同源性为99.5%,存在E43Q、K73R和C161R3处氨基酸的差异。Western blotting结果显示,带His标签的重组表达蛋白能被His单抗识别,条带大小约为24ku。本试验结果为进一步研究IFN-β基因生物学活性及加快从江香猪这一品种资源的有效利用提供参考依据。
- 温贵兰张升波李昌红徐丽田浪文明王开功程振涛赵德刚
- 关键词：从江香猪原核表达
- 鸡SIgA的提取鉴定及其抗体制备被引量：1
- 2008年
- 实验采用饱和硫酸铵法从健康肉鸡胆囊收集的胆汁中粗提二聚体SIgA,继而透析粗提产物除盐,然后进行纤维素DEAE-52离子交换层析,使用紫外分光光度计测定收集液的蛋白浓度,对层析产物浓缩使其浓度≥2.0 mg/m l,最后使用SDS-PAGE进行鉴定,从电泳所得图像中可以看到清晰的两个条带,一个条带分子量在67～70 ku之间为重链,另一个条带在26～28 ku之间为轻链。进一步将纯化的鸡SIgA抗体免疫健康兔,制备得到兔抗鸡SIgA抗体。
- 韩建保王开功于洪洋周碧君文明
- 关键词：二聚体SIGA纤维素SDS-PAGESIGA
