横山耕治
- 作品数：10 被引量：76H指数：5
- 供职机构：千叶大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金吉林省科技发展计划基金吉林省科技厅科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 老年患者呼吸系统真菌感染的检测及临床研究被引量：4
- 2006年
- 目的探讨老年患者肺部真菌感染的危险因素和流行病学特征,为控制真菌感染提供依据。方法根据真菌形态学及生化学特征,进行真菌的鉴定;调查医院真菌感染的流行病学特征;对67例医院真菌感染进行回顾性统计分析。结果从72份疑似真菌感染患者的痰液标本中,分离得到真菌67株,检出率为93.1%。其中,白色念珠菌感染率最高(53.73%),其次为光滑念珠菌(14.94%)、热带念珠菌(7.46%)、克柔念珠菌(7.46%),构成比与以往报道有差异;除念珠菌属外,还分离到曲霉属(13.43%)等真菌。结论老年患者肺部真菌感染发生率较高,正确地进行菌种的鉴定,对临床真菌感染的诊断及治疗具有重要意义。
- 杨艳秋贺丹许建成张云峰张波横山耕治王丽
- 关键词：真菌感染呼吸道
- 真菌性角膜炎的病原学分析及鉴定被引量：18
- 2014年
- 目的掌握真菌性角膜炎在吉林省的病原菌种类和流行病学特征，建立主要病原菌种的快速、特异性鉴定方法。方法采集225例疑似真菌性角膜炎患者的角膜刮片，分离、鉴定病原真菌，进行流行病学分析；建立主要病原菌种茄病镰刀菌的复合PER鉴定方法，用于角膜刮片的快速鉴定。结果225例患者中有156例确诊为真菌感染角膜炎，检出率为69．3％。其中12例患者为两种真菌共感染，共分离获得168株病原真菌。以镰刀菌属、曲霉属及假丝酵母属较多见，其中，主要病原菌种为茄病镰刀菌（34．5％）。建立的复合PcR方法可根据330bp特异性片段鉴定茄病镰刀菌，并可直接检测液体培养后的角膜刮片。结论真菌性角膜炎在吉林省的主要病原流行菌种为茄病镰刀菌。本文所建立的复合PCR方法适于角膜刮片标本的快速鉴定。
- 贺丹万雪高嵩郝继龙横山耕治王丽
- 关键词：病原真菌真菌性角膜炎茄病镰刀菌
- 正交法用于真菌微卫星PCR体系优化被引量：8
- 2006年
- 目的:探讨影响真菌微卫星聚合酶链反应(SSR-PCR)的多个因素,建立PCR的最佳反应体系,为进一步进行真菌的鉴定、遗传多样性研究奠定基础。方法:利用正交设计,从Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物4种因素,对真菌微卫星反应体系进行优化分析,并确定PCR适宜的退火温度及循环次数。结果:各因素的不同水平对PCR结果都有显著影响,其中模板DNA影响最大。在PCR反应体系中(25μL),Taq DNA聚合酶1U,模板DNA 30 ng,dNTP 150μmol.L-1,引物0.25μmol.L-1为最佳。结论:采用正交法实验设计,对真菌微卫星PCR体系优化更科学,得出的实验体系有效范围宽,且高效、快捷。
- 杨艳秋贺丹王爽郭亮张宇横山耕治王丽
- 关键词：真菌微卫星重复聚合酶链反应正交法
- 假丝酵母性阴道炎的病原菌检测及RAPD分析
- 2010年
- 目的:探讨女性假丝酵母性阴道炎的病原菌种类,分析其随机扩增DNA多态性(RAPD),为该病的临床诊断及流行病学监测提供依据。方法:刮取106例疑似假丝酵母性阴道炎患者阴道分泌物,分离培养并鉴定病原菌;利用10种随机引物(RAPD1～10)对分离病原菌进行RAPD分析。结果:①分离获得假丝酵母72株,其中白假丝酵母56株(77.78%),非白假丝酵母16株(22.22%),包括光滑假丝酵母6株(8.33%)、热带假丝酵母4株(5.56%)、克柔假丝酵母1株(1.39%)及其他假丝酵母5株(6.94%);②RAPD分析表明:有2种引物(RAPD2和RAPD5)可以获得较清晰、稳定的特异性带型,具有较明显的种间遗传变异性和种内遗传相似性。结论:假丝酵母性阴道炎病原菌以白假丝酵母为主。随机引物RAPD2和RAPD5比较适于白假丝酵母和热带假丝酵母的分型、鉴定。
- 韩淑梅贺丹张晓霞张宇许丽波田庄横山耕治王丽
- 关键词：假丝酵母随机扩增DNA多态性
- 假丝酵母SSR-PCR反应体系的优化
- 2011年
- 目的建立假丝酵母SSR-PCR反应体系,确立最佳反应条件,为将该技术用于临床假丝酵母感染的快速鉴定奠定基础。方法根据引物Tm值设立退火温度梯度,确定适宜的退火温度。利用正交实验,对影响SSR-PCR反应体系的Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物等4种主要因素,进行优化。结果引物最适退火温度为51℃。假丝酵母最佳的SSR-PCR反应体系为:在25μl的PCR反应体系中加入Taq DNA聚合酶1.0 U、模板DNA为25 ng、dNTP为0.15 mmol.L-1、引物为0.5μmol.L-1。结论采用正交实验优化的SSR-PCR反应体系,操作简便,电泳条带清晰,多态性好,重复性强,可为进一步建立临床假丝酵母感染的快速鉴定提供借鉴。
- 孙晓红杨艳秋贺丹张云峰横山耕治王丽
- 关键词：假丝酵母微卫星聚合酶链反应正交实验
- 真菌胞内蛋白质提取方法的建立被引量：7
- 2012年
- 目的:研究不同的提取方法对白假丝酵母和茄病镰刀菌胞内蛋白质浓度、种类及数量的影响,为建立一种稳定可靠的真菌胞内蛋白质提取方法提供依据。方法:分别以白假丝酵母菌和茄病镰刀菌为研究对象,培养时间为36、48和72h,超声波工作时间为20s、3min、5min,10min,超声波功率为332.5和475.0 W,通过蛋白质浓度检测和SDS-PAGE蛋白质电泳分析,比较不同条件下提取的蛋白质浓度、种类及数量,观察不同因素对蛋白质提取效果的影响。结果:2株真菌均在培养36h时提取胞内蛋白质的浓度最大,白假丝酵母在功率332.5W、超声3min时得到胞内蛋白质的数量和种类最多,茄病镰刀菌在功率332.5W、超声10min时得到蛋白质的数量和种类最多。结论:使用超声波法与玻璃珠研磨法结合提取胞内蛋白质,从菌株的培养时间、超声波工作时间和功率3方面建立了真菌胞内蛋白质的最佳提取方法。
- 王爽姜兰香张宇贺丹田庄高嵩横山耕治王丽
- 关键词：白假丝酵母茄病镰刀菌超声波
- 白色念珠菌总RNA的提取方法被引量：5
- 2007年
- 目的:探讨提取白色念珠菌总RNA的方法。方法:白色念珠菌标准菌株经SDA培养基培养后,采用改良的异硫氰酸胍一步法提取总RNA。以此为基础,进行反转录PCR反应。结果:得到的RNA经过紫外分光光度计检测浓度达到0.7g.L-1以上;琼脂糖凝胶电泳证实为完整、均一的总RNA;将此法提取的RNA反转录成cDNA后经过PCR扩增,可获得清晰的目的条带。结论:该方法简便、快速,提取的总RNA可以用于进一步基因克隆、表达。
- 张云峰焦立新贺丹宋文刚孙文通横山耕治王丽
- 关键词：念珠菌聚合酶链反应RNA提取异硫氰酸胍法
- 真菌DNA提取方法的建立和比较被引量：23
- 2007年
- 目的:DNA的提取效率,尤其是DNA的纯度严重影响实验结果,同一标本采用不同方法或不同标本采用相同方法提取DNA,其纯度和提取率有很大差异。以丝状真菌为材料.进行DNA提取.对真菌DNA的提取方法进行优化,探讨其最佳DNA提取方法方法:实验于2004-06/2006-12在吉林大学基础医学院真菌实验室进行以临床常见致病真菌标本为材料,采用玻璃珠-盐析法、CTAB法、Gene TLE^(TM)法3种不同方法提取DNA,通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取DNA的效率。结果:同等菌体量下,A_(260)和A_(280)的比值采用Gene TLE^(TM)法获得的样品最高,表明其蛋白质含量相对最少.3种提取的基因组DNA琼脂糖凝胶电泳图都在相应的多重PCR体系中扩增出目的片段,Gene TLE^(TM)DNA抽提法带型最清楚、明亮。结论:Gene TLE^(TM)法提取DNA效率高、质量好,操作简单.适于DNA的提取。
- 杨艳秋王丽贺丹孙文通张宇横山耕治
- 关键词：丝状真菌基因组DNA提取GENE
- 儿童真菌感染常见病原菌及药敏试验研究被引量：8
- 2007年
- 目的：探讨小儿真菌感染的病原菌特点、分布、易感因素、防治对策。方法：统计50例儿童真菌感染病例，通过真菌培养、涂片鉴定、药敏试验，分析小儿真菌感染病原体特点、发病高危因素及肪治措施。结果：感染菌种以白色念珠菌最常见，感染部位以皮肤和消化道多见。抗真菌药物氟康唑、5-氟胞嘧啶、伊曲康唑、两性霉素B、酮康唑的敏感率为88．0％。96．0％，结论：小儿真菌感染与原发、继发性免疫功能低下、化疗、激素、抗生素应用密切相关。这5种抗真菌药物是治疗儿科真菌感染的有效药物。
- 张波贺丹王爽张云峰杨艳秋王丽横山耕治
- 关键词：儿童真菌感染药敏试验
- 病原真菌DNA提取方法及简单重复序列聚合酶链反应体系的优化被引量：4
- 2009年
- 背景:真菌DNA的提取在真菌基因工程以及分子生物学研究中占有重要地位。DNA的提取效率,尤其是DNA的质量严重影响实验结果。目的:建立提取病原真菌基因组DNA的方法,探讨简单重复序列-PCR反应体系中各成分的最佳组合。设计、时间及地点:DNA提取方法对照分析及正交实验,于2004-06/2006-12在吉林大学白求恩医学院病原生物学教研室真菌学研究室进行。材料:将接种临床标本的马铃薯葡萄糖液体培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、酵母蛋白胨液体培养基28℃培养3～7d后,选取可疑菌落进行分离、纯化。方法:比较玻璃珠-盐析法、CTAB法、GeneTLETM抽提法3种不同DNA提取方法对菌体DNA质量的影响;利用正交设计,选择TaqDNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物4个因素,在3个水平上根据L9(34)正交表进行试验,对真菌简单重复序列-PCR(SSR-PCR)体系进行优化分析;并通过PCR选择适宜的退火温度及循环次数。主要观察指标:根据扩增获得带型的多态性和特异性,确定最佳反应体系。结果:GeneTLETM抽提法全部在相应的PCR体系中扩增出目的片段,且带型清楚度、明亮度优于其余两种方法。SSR-PCR反应体系正交试验结果显示,根据R值大小确定因素显著性顺序为模板DNA(2.67)>TaqDNA聚合酶(2.00)>dNTP(0.67)>引物(0.33);根据ki值大小确定各因素优化水平组合为:模板DNA30mg/L,TaqDNA聚合酶1U,dNTP150μmol/L,引物0.5μmol/L。但由于引物作为影响因素的R值小,是非显著因素,因此引物取A水平即0.25μmol/L。反应条件以53℃退火温度、35个循环次数为最佳。结论:GeneTLETM提取法提取DNA的效率更高、操作步骤快速简单。根据正交试验的优化结果,SSR-PCR最佳反应体系为模板DNA30mg/L,TaqDNA聚合酶1U,dNTP150μmol/L,引物0.25μmol/L。反应条件以53℃退火温度、35个循环次数为最佳。
- 杨艳秋王丽贺丹横山耕治
- 关键词：真菌基因组DNA提取SSR-PCR正交设计
