张雪梅
- 作品数：19 被引量：60H指数：5
- 供职机构：新疆维吾尔自治区畜牧科学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金新疆维吾尔自治区高技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 转Noggin基因生产促毛囊生长细毛羊的研究
- 毛囊的性状和皮肤组织结构决定了羊毛的品质和产量。本研究目的是获得转noggin基因的细毛羊，观察其对细毛羊毛囊生长的影响，进而培育出促进毛囊生长的转基因细毛羊品系。
- 贺三刚张雪梅张宁刘晨曦汪立芹陈童黄俊成李文蓉刘明军
- 维吾尔药骆驼刺提取物的抑菌实验研究被引量：8
- 2009年
- 目的:探讨新疆维吾尔药骆驼刺提取物的抑菌作用。方法:采用试管稀释法和琼脂扩散法对维吾尔药骆驼剌提取物进行抑菌试验研究。结果:骆驼刺提取物对实验菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和福氏痢疾杆菌均有一定程度的抑制作用,其MIC分别为31.25mg/mL、125mg/mL和125mg/mL;MBC分别为62.5mg/mL、250mg/mL和250mg/mL。结论:骆驼刺提取物对金黄色葡萄球菌、福氏痢疾杆菌和大肠杆菌均有一定的抑菌作用,是具有开发价值的抗菌维吾尔药。
- 熊元君贾晓光夏提古丽张雪梅
- 关键词：提取物抑菌作用
- 绵羊Follistatin基因表达及其结构域的功能分析被引量：7
- 2010年
- 为研究羊Follistatin基因的功能,提取了绵羊卵巢总RNA,通过RT-PCR方法获得羊FollistatincDNA的完整开放阅读框(1038bp)。去除信号肽序列后与原核表达载体pET41a连接,构建重组表达质粒pFSsig-,经大肠杆菌诱导表达获得FSsig-蛋白(66kDa)。通过RT-PCR克隆了包含N端和结构域1的Follistatin突变体(FSN+D1),将FSN+D1片段插入慢病毒载体(pLEX-MCS)构建了pFS-N+D1慢病毒重组表达质粒。在293T细胞中进行慢病毒的包装,再感染绵羊肌肉原代细胞,得到稳定表达FSN+D1的肌肉细胞系,通过细胞生长曲线结果显示稳定表达FSN+D1的肌肉细胞明显比正常肌肉细胞增殖快,且差异极显著(P<0.01),表明绵羊FSN+D1结构域有促进肌肉细胞生长的功能。
- 张宁张雪梅刘明军谭立新
- 关键词：原核表达慢病毒细胞生长曲线
- 绵羊高效转基因技术研究
- 刘明军马润林黄俊成李文蓉张雪梅汪立芹贺三刚林嘉鹏刘晨曦张宁唐森玛依拉
- 转基因技术能够突破种间隔离和实现多基因聚合，应用发展前景广阔。家畜转基因技术存在效率低、无法实现条件性控制表达、缺乏系统的分子检测和安全评价技术等瓶颈，制约了技术的发展和应用。该项目建立了以慢病毒载体和核移植为核心的绵羊...
- 关键词：
- 关键词：绵羊
- 管花肉苁蓉提取物对高盐饲养大鼠血压、红细胞膜流动性及全血黏度的影响被引量：4
- 2009年
- 给予高盐饲养大鼠管花肉苁蓉提取物后，为了解其对血压、红细胞膜流动性、全血黏度的影响。采用无创鼠尾血压测定高盐饲养前后血压变化，采用电子顺磁共振技术（EPR）测定红细胞膜流动性，采用血液粘度仪测定大鼠血液粘度。结果表明：高盐饲养的大鼠血压升高，给予管花肉苁蓉提取物后；①血压显著降低作用（P〈0．01）；②使红细胞膜的流动性增加（P〈0．01）；③能降低红细胞全血黏度（P〈0．05）。管花肉苁蓉提取物具有降低高盐饲养大鼠血压、降低全血粘度、增加红细胞膜流动性的作用，提示管花肉苁蓉提取物具有降压作用。
- 李勇熊元君贾晓光张雪梅卢景芬
- 关键词：管花肉苁蓉提取物红细胞膜流动性全血黏度血压
- 牛杀菌通透性增加蛋白N端在原核和真核细胞中的表达
- 2012年
- 比较重组牛杀菌通透性增加蛋白(BPI)N端714bp编码序列的原核和真核表达载体在大肠杆菌和HEK293细胞中的表达,为进一步研究BPI蛋白N端的功能奠定基础。采用RT-PCR方法从牛的外周血中扩增出BPI蛋白N端的714bp基因片段,分别克隆至原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pLEX-MCS后,再分别转化大肠杆菌BL21菌株、感染HEK293细胞进行重组蛋白的表达。Western blotting检测重组BPI蛋白N端在原核和真核细胞中的表达。结果显示:BPI蛋白N端的原核表达载体pGEX-BPI714和真核表达载体pLEX-BPI714导入原核和真核细胞中均得到表达。Western blotting检测显示,重组GST-BPI714融合蛋白在大肠杆菌中仅能低水平表达,且大都以包涵体形式存在;相反,构建的真核表达载体pLEX-BPI714转染到HEK293细胞后,特异的目的蛋白能高效表达。本研究成功构建了牛源BPI714原核表达载体和真核表达载体,重组BPI714在大肠杆菌中表达不稳定,在HEK293细胞中能够稳定表达。
- 姚楠白杰张雪梅吴卫东李文蓉
- 关键词：BPI原核表达真核表达
- 绵羊IGF1基因慢病毒表达载体的构建及其促肌细胞生长作用研究被引量：4
- 2014年
- 【目的】克隆绵羊IGF1基因CDS区，构建绵羊IGF1基因慢病毒表达载体，分析IGF1基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的作用。【方法】提取绵羊肝组织总RNA，通过RT-PCR方法获得IGF1全长CDS序列，经测序鉴定后与慢病毒载体pLEX-mcs连接，构建pLEX-IGF-1慢病毒重组表达质粒，并在293T细胞中进行病毒包装和生产。分离培养绵羊原代成肌细胞，并用重组慢病毒使其感染，建立稳定转染pLEX-IGF-1的绵羊成肌细胞系。通过绘制细胞生长曲线，分析过表达IGF1对绵羊成肌细胞生长的影响；采用流式细胞仪检测细胞周期变化。【结果】克隆获得长518 bp的IGF1 CDS区序列。成功构建了pLEX-IGF-1载体，其可在绵羊细胞系中进行稳定表达。通过Western blotting检测显示，IGF1在293T细胞以及绵羊原代成肌细胞中获得表达，细胞生长曲线显示，稳定表达IGF1的成肌细胞比对照细胞生长速度显著加快（第1天差异显著（P＜0.05），第2～6天差异极显著（P＜0.01））；细胞周期测定结果显示，稳定表达IGF1的成肌细胞比对照细胞较早进入S期，且在S期的细胞数目比对照细胞多29.35%。【结论】绵羊IGF1能够有效促进绵羊成肌细胞的生长。
- 安静张雪梅刘晨曦刘明军
- 关键词：慢病毒表达载体细胞生长曲线
- 绵羊Noggin基因的克隆、序列分析与原核表达
- 2012年
- 根据同源序列克隆原理设计一对引物,以绵羊脑组织总RNA的反转录产物为模板,利用RT-PCR扩增绵羊Noggin基因cDNA全长编码区,克隆到pMD-18T载体。测序验证后,提取pT-Noggin质粒经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切回收目的条带,亚克隆到pET41a原核表达载体,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。序列分析表明,绵羊Noggin基因的cDNA全长编码区(GenBank登录号为FJ751853)为699bp,编码232个氨基酸,与其他哺乳动物氨基酸序列同源性达到95%以上。SDS-PAGE结果显示,诱导表达的融合蛋白大小为60ku,与预期蛋白大小一致。Western blot检测结果显示,该蛋白为His融合蛋白。说明成功克隆了绵羊Noggin基因的编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白。
- 贺三刚张宁张雪梅刘明军李文蓉
- 关键词：绵羊原核表达
- 牛杀菌/通透性增加蛋白对脂多糖介导的炎性细胞因子表达的影响被引量：3
- 2015年
- 杀菌/通透性增加蛋白(Bactericidal/permeability-increasing protein,BPI)能结合并特异地中和来自革兰氏阴性菌外膜的脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)。为了研究牛源BPI蛋白及其N端结构域在LPS介导的免疫应答中的作用,本文将BPI全长1 449 bp编码区序列(BPI)和其N端714 bp的编码区序列(BPI714)分别导入m HEK293细胞,分析了稳定表达的BPI或BPI714对LPS介导的炎性细胞因子表达的影响。首先将构建的p LEX-BPI/p LEX-BPI714载体分别转染m HEK293细胞,获得稳定表达牛源BPI或BPI714的m HEK293细胞;然后用LPS刺激上述细胞,分别收集刺激前、刺激后1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、36 h和48 h的细胞,并同时收集未表达BPI或BPI714的m HEK293细胞在各时间点的样品作为对照;采用定量RT-PCR检测上述细胞中炎性细胞因子IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-1、NF-κB-2的相对表达水平,比较LPS刺激前后表达BPI/BPI714和对照细胞中上述基因转录水平的变化规律。研究表明,LPS刺激后,对照细胞中IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-2表达水平在不同时间点均显著提高(P<0.05),并呈现规律性变化;而稳定表达BPI/BPI714的细胞在同样刺激条件下,IL-8、IL-1β、TNF-α、NF-κB-2基因的转录水平均未发生显著变化(P>0.05)。根据我们的实验结果,在m HKE293细胞模型中BPI或BPI714均能显著降低LPS介导的炎性细胞因子表达,抑制LPS介导的免疫应答。这不仅为进一步研究BPI抑菌机制和利用其抑菌功能提供了可靠的实验依据,也为分析抗菌蛋白的抗菌效果提供了一种可靠的实验方法。
- 姚楠白杰张雪梅张宁吴卫东李文蓉
- 关键词：脂多糖免疫应答炎性细胞因子
- 维药骆驼刺提取物药理活性研究被引量：9
- 2009年
- 目的:对新疆维药骆驼刺植物中的化学成分提取分离并做药理活性研究,以确定维药骆驼刺的药理活性部位。方法:有机溶剂萃取法对植物中化学成分提取分离,通过体外抗氧化能力评价方法及对豚鼠离体肠管收缩作用实验对骆驼刺植物提取物做药理活性筛选研究。结果:体外抗氧化性测试表明骆驼刺提取物均有清除·OH自由基能力,其中乙酸乙酯提取部位效果最为显著,骆驼剌正丁醇提取部位对豚鼠离体肠管收缩运动有显著的抑制作用。结论:骆驼刺提取物具有显著的抗氧化活性,骆驼刺正丁醇提取部位对肠蠕动有显著的抑制作用。
- 贾晓光张雪梅熊元君李勇
- 关键词：抗氧化豚鼠离体回肠
