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张健慧
作品数:
6
被引量:5
H指数:2
供职机构:
军事医学科学院基础医学研究所
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相关领域:
医药卫生
生物学
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合作作者
凌世淦
军事医学科学院基础医学研究所
韩保光
军事医学科学院基础医学研究所
宋晓国
军事医学科学院基础医学研究所
孟莉
军事医学科学院基础医学研究所
马贤凯
军事医学科学院基础医学研究所
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年份
2篇
2000
2篇
1999
2篇
1998
共
6
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HIV-1整合酶的纯化及活性检测
2000年
含整合酶基因的重组质粒 pET p31在E coliBL2 1(DE3)中以包含体形式高效表达HIV 1整合酶 (p31蛋白 )。初步纯化的包含体用 8mol/L尿素变性溶解 ,经阳离子交换剂柱层析和分子筛柱层析纯化 ,并通过梯度透析的复性过程去除尿素 ,获得可溶性及高纯度 p31。测定证实 ,复性后的 p31蛋白呈现良好的 3′加工。
李南
张健慧
凌世淦
关键词:
艾滋病毒
整合酶
包含体
纯化
HIV-1整合酶单链抗体对整合酶生物学活性抑制作用的研究
被引量:1
1999年
从抗HIV1 整合酶(integrase ,IN) 单链抗体(single chain frag ment variable ,ScFv) 的HB2151 表达菌中选取3 个克隆,进行ScFv 的可溶性表达与纯化,并观察ScFv 对IN 体外生物学活性的影响。结果显示,在ScFv :IN摩尔浓度为8 ∶1 时,3 个克隆的ScFv 可明显抑制IN 的3′端加工、链转移及去整合活性; 而相同浓度的BSA 及抗人交联纤维的ScFv 对IN 活性无明显影响。测序结果表明,此3 个克隆的ScFv 基因序列完全相同,符合鼠抗体可变区序列。完全抑制3′端加工及去整合反应所需ScFv 的浓度高于链转移反应。研究结果提示,抗IN 的ScFv 可抑制IN 的体外生物学活性,此结论为进一步研究此类ScFv 对HIV 在细胞内复制的影响及其机制奠定了基础。
张健慧
李南
宋晓国
孟莉
韩保光
凌世淦
马贤凯
关键词:
艾滋病毒
整合酶
生物活性
单链抗体
HIV-1整合酶单链抗体在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定
被引量:3
1999年
将具有HIV-1整合酶结合活性的单链抗体重组噬菌体感染HB2151大肠杆菌,经IPTG诱导.在周质腔萃取物及培养基上清中,均检测到有较特异与整合酶结合的可溶性单链抗体的表达。利用HiTrapAnti-Etags对单链抗体进行了亲和层析纯化。Western-blot结果初步表明,单链抗体不仅可与整合酶的单体反应,而且也可与其二聚体结合。提示:研制的单链抗体可用于对HIV-1整合酶活性影响的研究。
张健慧
宋晓国
孟莉
冯玉英
韩保光
凌世淦
马贤凯
关键词:
整合酶
单链抗体
艾滋病毒
大肠杆菌
纯化
HIV整合酶研究进展
被引量:1
1998年
HIV整合酶(Integrase,IN)催化了HIV在人体内复制的基本步骤──病毒的双链DNA整合到宿主细胞DNA的过程,因此,IN为AIDS治疗的理想靶位。IN的分子结构尚未完全明确,对其功能的研究常分区进行。一些化合物可抑制IN在体外的催化活性,显示可能具有治疗AODS的潜在作用。本文综述了近年来HIVIN的结构、功能及其抑制剂的研究进展。
张健慧
关键词:
HIV
HIV整合酶
影响HIV—1整合酶活性因素的探讨
2000年
目的:探讨HIV-1整合酶活性的影响因素,优化其活性测定条件。方法 以同位素标记的寡核苷酸链为底物,体外模拟HIV-1病毒DNA整合过程,检测HIV-1整合酶的3'端加工,链转移和去整合活性,并考察HIV-1整合酶活性测定中,二价高子、酸碱度、温度和时间等的影响。结果 Mn^2+对整合酶活性的辅助作用,明显强于Mg^2+,而3'端加工反应对二价离子的依赖性较小。酸碱度对各种反应的影响较大,温度和时间影响较小。结论 整合酶活性检测的最佳反应条件为pH7.0-7.5,37℃,15mmol/L M^2+及反应时间1h。
李南
张健慧
等
关键词:
HIV
整合酶
活性测定
影响因素
利用噬菌体表面呈现技术制备HIV-1整合酶单链抗体的初步研究
被引量:2
1998年
目的:研制HIV-1整合酶(integrase,IN)的重组噬菌体单链抗体。方法:采用噬菌体表面呈现方法。结果:由IN蛋白免疫的小鼠脾细胞mRNA中构建了单链抗体基因cDNA文库,克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E,经转化大肠杆菌TG1,获得了库容为3.5×105的表达文库。利用包被在酶联板上的IN蛋白进行四轮亲和富集,筛选出76株具有IN结合活性的重组噬菌体。对随机挑选的一株克隆进行了DNA序列分析,证明其符合小鼠抗体序列。结论:获得了抗HIV-1IN的噬菌体单链抗体,为其进一步研究打下基础。
张健慧
孟莉
韩保光
宋晓国
冯玉英
凌世淦
马贤凯
关键词:
艾滋病毒
整合酶
单链抗体
噬菌体
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