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苏云金芽孢杆菌鲇泽亚种菌株发酵工艺及杀虫用途: 本发明涉及高效、广谱苏云金芽孢杆菌菌株、生产发酵工艺及其在生物杀虫领域的应用。其特征是,分离到一种同时对鳞翅目、膜翅目昆虫有高毒力的苏云金芽孢杆菌,其血清为H<Sub>7</Sub>,含有cry1Aa,cry1Ac,cr...; 姚江李士玉陈春和黄大昉; 文献传递

荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)工程菌株田间残留和扩散的追踪检测被引量：10: 2002年; 分别在北京和江苏省连云港市对携带Btcry基因的荧光假单胞菌工程菌进行了田间残留与扩散的追踪检测 .对越冬前后的试验地和保护地土壤样品进行抗生素抗性平板分离 ,能检测到极少量的具有与出发菌株相同抗性的荧光假单胞菌菌落 ,但没有发现工程菌株的残留与扩散 .对江苏试验地样品还进行了工程菌株质粒卡那霉素和壮观霉素抗性标记基因的抗性菌落分离 ,绝大多数样品中都能分离到包括荧光假单胞菌在内的抗性菌落 ,土样中菌密度n(cfu) =10 4 ～ 10 5g-1,但进行Btcry基因PCR -RFLP检测时没有从样品中得到特异扩增产物 .研究结果表明 :工程菌株抗性标记基因在自然界广泛存在 ,工程菌在株环境中没有残留和扩散 ,具有良好的生物安全性 .表 4参; 陈中义吴限管宇姚江张杰黄大昉; 关键词：荧光假单胞菌扩散生物安全性工程菌

苏云金芽孢杆菌cry 1Aa12基因的克隆及表达研究: 本文对苏云金杆菌Ly30菌株的分离提取cry1Aa12基因的克隆及表达进行了研究.; 姚江张杰陈中义宋福平黄大昉; 关键词：基因克隆基因表达苏云金芽孢杆菌杀虫活性; 文献传递

苏云金芽孢杆菌cry1I基因沉默的研究被引量：7: 2002年; 分析了苏云金芽孢杆菌(Bt)cry1和cry1Ⅰ基因的保守区,在cry1类基因的下游和cry1Ⅰ基因的上游设计了一对通用引物,用于检测cry1Ⅰ与cry1类基因的连锁现象,从鉴定的142株Bt分离株中,PCR扩增发现71株出现约1.4kb的阳性带,说明这一现象广泛存在于Bt菌株中,在此基础上用pGEM-T Easy载体克隆了菌株Bt07和J8中的连锁序列,序列分析表明,Bt07中是cry1Ⅰ基因与cry1Db基因连锁,间隔区为504bp;J8中是cry1Ⅰa基因与cry1Ac基因连锁,间隔区为506bp.进一步比较间隔区序列,同源性达93.7％,同时含有多个原核生物终止序列,且未发现启动子序列,揭示了这两个菌株中cry1Ⅰ基因沉默的成因。; 宋福平张杰顾爱星陈中义姚江李国勋黄大昉; 关键词：苏云金芽孢杆菌基因连锁基因沉默杀虫晶体蛋白杀虫活性

苏云金芽孢杆菌及其在害虫防治上的应用(综述)被引量：15: 2002年; 苏云金芽孢杆菌 (Bacillusthuringiensis,简称Bt)自 1 90 1年发现以来 ,一直在微生物学、昆虫学和生物化学等方面受到研究者的关注。由于Bt能形成对许多昆虫具特异性毒力的杀虫蛋白 ,因此从 1 959年开始Bt已被制成杀虫剂防治鳞翅目害虫。近 1 0年来 ,随着分子生物学和遗传工程技术的成熟和发展 ,使人们增加了有关晶体形成的分子生物学知识。Bt的杀虫活性主要是其能产生含有杀虫晶体蛋白 (ICPs)的伴孢晶体。一些杀虫蛋白基因 (又称cry基因 )已经成功用于转基因抗虫植物中。本文将从Bt微生物学、Bt制剂在害虫防治中以及Btcry基因在转基因抗虫植物中的应用等方面作一综述。; 姚江; 关键词：苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白害虫防治伴孢晶体杀虫谱转基因抗虫植物

苏云金芽孢杆菌cry2 Aa操纵元蛋白对杀虫蛋白晶体形成作用的研究被引量：5: 2004年; 利用重叠PCR的方法 ,通过两次PCR扩增 ,分别获得cry2Aa1 0操纵元的orf1、orf1 +orf2与cry2Ab5基因的融合片段。融合片段经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切与pHT31 5连接 ,分别构建了基因融合片段的原核表达载体pFU(orf1 +2Ab)和pFU(orf1 +orf2 +2Ab) ,电转化Bt无晶体突变株 4Q7后 ,扫描电镜下可观察到典型的方形晶体 ,通过SDS PAGE可检测到 6 0kD大小的蛋白表达带。结果表明 ,cry2Ab5可在cry2Aa1 0的启动子帮助下有效转录和表达。; 姚江张杰陈中义李长友黄大旸宋福平刘旭光檀建新; 关键词：苏云金芽孢杆菌

BtLy30菌制剂开发应用: 姚江潘启民李士玉陈春和华明义; 由于该菌制剂比现已工业化生产的菌制剂发酵周期短，节省人、财、物、水、电、气等，大大降低生产成本。因此不论从防治效果、杀虫范围，还是从销售价格角度，可成为常规化学农药的替代产品。; 关键词：

对鳞翅目害虫高毒力的Bt cry1 Aa基因的分离克隆及表达被引量：7: 2003年; Bt菌Ly30株是我国自行分离的对多种害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌 ,经CAPS (cleavedamplifiedpolymorphicse quences)系统鉴定 ,它含有cry1Aa基因。以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法 ,设计一对特异引物 ,分别引入NcoⅠ和BamHⅠ NcoⅠ酶切位点。以Ly30质粒DNA为模板扩增cry1Aa全长基因 ,与表达载体pKK2 33 2相应酶切产物连接 ,转化大肠杆菌 ,获得含有cry1Aa基因重组质粒pKKLy1Aa。完成了该基因的亚克隆和序列测定 ,结果表明 ,该基因的编码区为 3 5 31bp ,编码蛋白分子量为 133 2kD ,含 1176个氨基酸 ,等电点pI为 4 99。该基因序列已在GenBank中登记注册 ,登录号为AF3842 11,并被国际Bt杀虫晶体蛋白基因命名委员会正式命名为cry1Aa12。对重组菌KKLy1Aa进行诱导表达研究。在 0 6mmol LIPTG、 37℃、 8h培养条件下 ,该基因获得高效表达 ,SDS PAGE电泳检测到明显的 133 2kD蛋白带。室内生测结果表明 ,Cry1Aa蛋白对不同的小菜蛾品系均有较高的杀虫活性 ,其LC50 值分别为 0 2 0 3μg mL和 0 5 5 4μg mL。; 姚江张杰陈中义宋福平李长友胡玉琴黄大昉; 关键词：苏云金芽孢杆菌克隆杀虫活性

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姚江