陈中义
- 作品数：25 被引量：503H指数：10
- 供职机构：中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- 苏云金芽孢杆菌cryl基因、基因组合及表达载体
- 本发明为“苏云金芽孢杆菌cry1基因、基因组合物及表达载体”，属生物防治技术领域。进一步，本发明涉及对鳞翅目害虫高毒力的Btcru1Ie基因的核苷酸序列和其编码的蛋白质的氨基酸序列，涉及含有cry1Ie基因或其表达产物的...
- 宋福平张杰黄大昉陈中义潘映红
- 文献传递
- 苏云金芽孢杆菌cry1I基因沉默的研究被引量：8
- 2002年
- 分析了苏云金芽孢杆菌(Bt)cry1和cry1Ⅰ基因的保守区,在cry1类基因的下游和cry1Ⅰ基因的上游设计了一对通用引物,用于检测cry1Ⅰ与cry1类基因的连锁现象,从鉴定的142株Bt分离株中,PCR扩增发现71株出现约1.4kb的阳性带,说明这一现象广泛存在于Bt菌株中,在此基础上用pGEM-T Easy载体克隆了菌株Bt07和J8中的连锁序列,序列分析表明,Bt07中是cry1Ⅰ基因与cry1Db基因连锁,间隔区为504bp;J8中是cry1Ⅰa基因与cry1Ac基因连锁,间隔区为506bp.进一步比较间隔区序列,同源性达93.7％,同时含有多个原核生物终止序列,且未发现启动子序列,揭示了这两个菌株中cry1Ⅰ基因沉默的成因。
- 宋福平张杰顾爱星陈中义姚江李国勋黄大昉
- 关键词：苏云金芽孢杆菌基因连锁基因沉默杀虫晶体蛋白杀虫活性
- 荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)工程菌株田间残留和扩散的追踪检测被引量：10
- 2002年
- 分别在北京和江苏省连云港市对携带Btcry基因的荧光假单胞菌工程菌进行了田间残留与扩散的追踪检测 .对越冬前后的试验地和保护地土壤样品进行抗生素抗性平板分离 ,能检测到极少量的具有与出发菌株相同抗性的荧光假单胞菌菌落 ,但没有发现工程菌株的残留与扩散 .对江苏试验地样品还进行了工程菌株质粒卡那霉素和壮观霉素抗性标记基因的抗性菌落分离 ,绝大多数样品中都能分离到包括荧光假单胞菌在内的抗性菌落 ,土样中菌密度n(cfu) =10 4 ～ 10 5g-1,但进行Btcry基因PCR -RFLP检测时没有从样品中得到特异扩增产物 .研究结果表明 :工程菌株抗性标记基因在自然界广泛存在 ,工程菌在株环境中没有残留和扩散 ,具有良好的生物安全性 .表 4参
- 陈中义吴限管宇姚江张杰黄大昉
- 关键词：荧光假单胞菌扩散生物安全性工程菌
- 遗传重组微生物的环境监测
- 2005年
- 遗传重组微生物 (GMM)的环境监测作为生物安全性评价的重要内容之一 ,正越来越得到广大科研工作者的密切关注。综述了目前遗传工程菌和重组DNA的环境监测的主要方法。一是基于培养的方法 ,包括利用选择性培养技术 ,报告基因 ,基因探针和PCR ,免疫监测等 ;一是基于免培养的方法 ,包括显微镜观测法 ,荧光原位杂交技术 (FISH) ,基于直接提取微生物总DNA的分子生物学方法等。重点介绍了目前常用的几种报告基因和基于直接提取总DNA的DGGE TGGE方法 ,同时指出我国应加强GMM遗传监控的分子生物学方法的研究及应用。
- 张霞陈中义张杰宋水山李国勋
- 关键词：分子生物学方法荧光原位杂交技术微生物基因探针总DNA免疫监测
- 农业重组微生物生物安全研究进展被引量：5
- 2002年
- 综述了近年来农业重组微生物的研究现状和进展 ,详细介绍农业重组微生物环境释放的监控方法以及对环境的冲击作用 。
- 林敏陈中义陆伟
- 关键词：农业生物安全评价环境冲击
- 重组荧光假单胞菌BioP8在环境中消长动态与安全性评价被引量：2
- 2004年
- 通过选择分离培养和 PCR鉴定 ,对转苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫蛋白基因荧光假单胞菌 Bio P8及其天然受体菌 P30 3在温室自然土壤和田间大白菜根际、叶面的环境生存竞争能力进行研究。结果表明 ,在温室自然土壤中 ,可培养细菌总量在 1 0 8CFU/g土 (湿重 )左右 ,40 d内 P30 3和 Bio P8群落总量分别能维持在 1 0 5CFU /g土 (湿重 )和 1 0 4 CFU /g土 (湿重 )左右 ,1 0 0 d后检测不到残留 ;在大白菜根际 ,可培养细菌总量在 1 0 1 0 CFU/g根 (湿重 )左右 ,30 d内 P30 3和 Bio P8可维持在 1 0 6 CF U/g根 (湿重 )和 1 0 5CFU /g根 (湿重 ) ,75 d后检测不到残留 ;在大白菜叶面 ,可培养细菌总量在 1 0 3～ 1 0 6 CFU/cm2叶片之间波动 ,处理后 3d的供试菌菌量迅速由 1 0 5CFU/cm2叶片降至最低 (1 0 3CFU/cm2叶片和 1 0 2 CFU/cm2叶片左右 ) ,之后回升并以 (1 0 4和 1 0 3) CF U/cm2叶片维持一段时间 (第 5— 1 5 d) ,30 d检测不到残留。P30 3及其工程菌株在温室自然土壤、田间大白菜根际和叶面的定殖时间至少分别为 6 0 d、5 0 d和1 5 d,它们的消长动态相似 ,在温室自然土壤、田间大白菜根际的定殖能力明显强于叶面 ,Bio P8定殖能力弱于出发菌 P30
- 张霞张杰彭于发陈中义李国勋黄大昉
- 关键词：微生物学荧光假单胞菌工程菌定殖生物安全
- 苏云金芽孢杆菌沉默基因cry2Ab3在大肠杆菌中表达及杀虫活性研究被引量：13
- 2002年
- 对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。根据大肠杆菌T7表达载体pET 2 1b克隆位点和cry2Ab3开放阅读框架 (ORF)两端序列 ,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3 ,高保真PCR扩增获得cry2Ab3完整ORF ,经酶切、连接构建了重组表达质粒pET 2Ab3。表达质粒导入大肠杆菌BL2 1 (DE3 ) ,IPTG诱导后 ,SDS PAGE电泳证实了cry2Ab3的表达。生物测定显示诱导培养物对棉铃虫初孵幼虫和小菜蛾二龄幼虫具有杀虫活性 ,能明显抑制二化螟二龄幼虫生长 ,但对甜菜夜蛾和玉米螟没有明显活性。进一步提取Cry2Ab3蛋白 ,生测结果表明其对棉铃虫LC50 为 3 2 5 5 μg g。
- 陈中义李长友刘加宝张杰黄大昉
- 关键词：苏云金芽孢杆菌沉默基因杀虫活性
- PCR-RFLP筛选DNA文库克隆Bt cry基因的研究被引量：11
- 2003年
- Bt菌株C0 0 2对水稻二化螟、甜菜夜蛾具有高毒力 ,PCR RFLP鉴定含有cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知杀虫蛋白基因cryX等 ,其中cry1Ca位于染色体DNA 6～ 9kb的EcoRI片段。染色体和质粒DNA分别经EcoRI完全酶切和Sau3AI部分酶切、电泳回收 6～ 9kb片段。E .coli Bt穿梭载体pHT315分别与目的DNA连接、转化大肠杆菌感受态细胞后获得了相应的DNA文库。约 5 0个转化子合为一个转化子池 ,采用PCR RFLP方法快速检测 ,分别从约 2 0 0 0质粒DNA文库转化子和 4 0 0个染色体文库转化子中筛选获得了cry1Aa、cry2Ab、cry1Ca和未知基因cryX的阳性克隆 ,相应命名为pHT 1Aa、pHT 1Ca、pHT 2Ab和pHT X。限制酶切分析表明 ,含有cry1Aa、cry1Ca和cry2Ab基因的克隆片段均含有相应基因的保守物理图谱。进一步将这些质粒分别导入Bt无晶体突变株CryB-,SDS PAGE分析表明 ,只有cry1Ca表达了约 130ku杀虫晶体蛋白。初步杀虫生测结果显示 ,cry1Ca对甜菜夜蛾具有高毒力 ,7d校正死亡率为 10 0 %。
- 陈中义吴限张杰宋福平管宇黄大昉
- 关键词：苏云金芽孢杆菌微生物杀虫剂DNA文库CRY基因PCR-RFLP基因分离
- 植物病害生防芽孢杆菌抗菌机制与遗传改良研究被引量：315
- 2003年
- 芽孢杆菌是土壤和植物微生态的优势微生物种群,具有很强的抗逆能力和抗菌防病作用,许多性状优良的天然分离株已成功地应用于植物病害生物防治。芽孢杆菌抗菌防病机制包括竞争作用、拮抗作用和诱导植物抗病性。其中,核糖体合成的细菌素、几丁质酶和葡聚糖酶等抗菌蛋白以及次生代谢产生的抗生素与挥发性抗菌物质产生的拮抗作用是生防细菌最主要的抗菌机制。通过现代生物技术提高抗菌基因的表达水平和实现外源杀虫或抗菌基因的高效稳定共表达是增强生防芽孢杆菌抗菌活性和扩大防治对象的重要途径。基因组和蛋白组研究的迅猛发展必将极大地促进芽孢杆菌抗菌分子机制和抗菌基因工程研究的深入发展和广泛应用。
- 陈中义张杰黄大昉
- 关键词：病害生物防治芽孢杆菌抗菌机制
- 构建生防菌B-916绿色荧光蛋白基因工程菌的研究
- ＜正＞ 拮抗微生物的开发研究目前发展的很快,芽孢杆菌在拮抗微生物中的位置显得越来越重要,对其研究也越来越深入。江苏农科院植保所稻病生防组依托国家攻关课题和国际合作研究项目,研究开发出对水稻病害有良好防治效果的拮抗菌株B-...
- 姚震声陈志谊陈中义
- 关键词：绿色荧光蛋白基因枯草芽孢杆菌生物防治基因工程
- 文献传递
