叶薇
- 作品数：11 被引量：33H指数：4
- 供职机构：温州医学院检验医学院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划浙江省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 衰老过程中线粒体顺乌头酸酶活性变化对能量合成的影响被引量：8
- 2013年
- 目的:利用自然衰老雄性SD大鼠和D-半乳糖(D-Gal)诱导的细胞衰老模型,研究在衰老细胞中线粒体顺乌头酸酶(mitochondrial aconitase,ACO2)活性的变化及其对能量合成的影响。方法:利用55 mmol/L D-Gal诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5衰老,并采用蔗糖连续密度梯度离心法分离大鼠脑组织和MRC-5细胞的线粒体;ACO2活性根据反应产物NADPH在340 nm的吸光度变化率进行检测,其表达水平分析分别用荧光定量PCR和Western blotting完成;利用试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以反映细胞氧化还原状态;组织铁含量的检测则通过菲咯嗪法进行;线粒体膜电位及腺苷酸含量分别应用JC-1荧光探针法和高效液相色谱法检测,并计算能荷。结果:随着大鼠月龄增加,ACO2活性逐渐下降,表达水平无明显差异,组织铁水平逐渐升高;体外氧化应激实验显示ACO2活性随H2O2处理浓度和时间增加而下降;细胞衰老模型中,SOD活性降低,MDA含量升高,ACO2活性下降而表达水平未变;自然衰老大鼠和细胞衰老模型中,线粒体膜电位、ATP合成与能荷呈明显下降趋势。结论:衰老过程中,随着氧化压力增加,氧化应激敏感的ACO2活性下降,影响三羧酸循环效率,同时伴线粒体膜电位下降,进而使得能量合成降低。
- 叶薇陈赛慧郝东杰郑屹曹建明吕建新
- 关键词：衰老线粒体氧化性应激
- 2型糖尿病患者mtDNA变异筛查研究被引量：6
- 2007年
- 目的探讨线粒体基因突变与2型糖尿病的关系。方法随机筛查222例散发2型糖尿病患者和191名正常对照，以聚合酶链反应、限制性内切酶片段长度多态性及T-A克隆测序和变性高效液相色谱分析技术验证等方法检测线粒体基因突变。结果糖尿病组线粒体基因（3153—3551nt）突变总的发生率（24．32％）明显高于正常组（7．33％）（P〈0．05）；发现3个尚未见报道的新突变位点：A3209T、T3253G和A3467C，而C3497T则在糖尿病中是首次报道；起病年龄、体重指数、空腹血糖、糖化血红蛋白、高密度脂蛋白和糖尿病肾病等指标是线粒体基因突变的相关因素（P〈0．05）。结论温州地区糖尿病患者存在多种线粒体基因点突变，其在糖尿病的发生发展中起重要作用。
- 季敬璋吕建新叶薇胡昕汪大望
- 关键词：线粒体DNA糖尿病突变
- 应用DHPLC进行线粒体异质性突变分析被引量：4
- 2007年
- 目的:检测人类线粒体DNA异质性从而建立有效的筛查低水平异质性DNA的方法。方法:选择包含Ⅱ型糖尿病高突变位点的人mtDNA 3083～3339 nt片段进行PCR扩增,以不同比例混合相差一个碱基的两种DNA片段的PCR扩增产物,建立不同比例异质性DNA模型。确定最佳检测条件后分别用变性高效液相色谱技术(DHPLC)和DNA测序技术进行分析和比较。结果:应用DHPLC检测mtDNA 3083～3339 nt(257 bp),最低可检测出该区域含量为5%的异质性样本,而DNA测序技术只能检测出异质性含量大于20%的样本。结论:成功建立分析mtDNA3083～3339 nt片段异质性突变的方法,该方法可用于检测低水平的mtDNA异质性。
- 胡昕许惠惠吕建新叶薇季敬璋
- 关键词：变性高效液相色谱测序线粒体DNA
- 2型糖尿病患者mtATP6变异分析及其在分子诊断中的应用价值
- 糖尿病(diabetes mellitus,DM)是临床表现为血糖水平慢性、持续高于正常的代谢性疾病。其中2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)占90%,其病因复杂,涉及环境因素和遗传因...
- 叶薇吕建新明镇寰
- 文献传递
- 甲苯生物降解的关键酶基因克隆及表达
- 2012年
- 目的:克隆、表达恶臭假单胞菌生物降解甲苯的关键酶基因。方法:恶臭假单胞菌WZ-1在含甲苯的MS培养基中培养以鉴定其降解甲苯的能力。设计引物扩增甲苯生物降解的关键酶——甲苯双加氧酶和邻苯二酚1,2双加氧酶基因,PCR扩增目的片段后进行T-A克隆,筛选阳性克隆并鉴定。构建甲苯双加氧酶-pET28a进行体外诱导表达。结果:恶臭假单胞菌WZ-1在含甲苯的MS培养基的生长曲线证明其具有降解甲苯的能力;通过重组技术获得阳性克隆,并以酶切、DNA测序进行鉴定;IPTG诱导后获得重组甲苯双加氧酶的高表达。结论:成功获得了用于降解甲苯的甲苯双加氧酶基因和邻苯二酚1,2双加氧酶基因,并在体外诱导表达了目的蛋白,为后续利用模式生物对苯系物的生物降解建立了实验基础。
- 杨凯缪晓燕陈琼斯章婷婷叶薇吕建新
- 关键词：恶臭假单胞菌甲苯克隆原核表达
- 2型糖尿病患者mtATP6 变异分析及其在分子诊断中的应用价值
- 糖尿病(diabetes mellitus，DM)是临床表现为血糖水平慢性、持续高于正常的代谢性疾病。其中2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)占90％，其病因复杂，涉及环境因素和遗传因...
- 叶薇吕建新明镇寰
- 关键词：2型糖尿病代谢性疾病线粒体基因组分子诊断基因突变
- 文献传递
- 浙江省2型糖尿病患者线粒体DNA蛋白编码基因多态性分析
- 目的 分析浙江省2型糖尿病(T2DM)患者线粒体DNA (mtDNA)蛋白编码基因的多态性.方法 收集浙江省2型糖尿病散发病例224例及109例性别、年龄匹配的健康对照者.提取所有受试者全血基因组DNA,采用PCR扩增1...
- 叶薇沈飞霞季敬璋汪大望管敏鑫吕建新
- 关键词：糖尿病线粒体蛋白编码基因
- 浙南海域野生坛紫菜遗传多样性的ISSR分析被引量：3
- 2012年
- 目的:研究浙南海域野生坛紫菜的遗传多样性。方法:采用简单序列重复区间扩增多态性(ISSR)分子标记技术,分析采自浙江南部海域的苍南铁钉岛、洞头竹屿岛、南麂列岛、温岭斜头岛等地坛紫菜(Porphyra haitanesis)的4个野生种群。结果:6条ISSR引物共获得268个位点,257个多态位点,4个种群野生坛紫菜多态位点百分率(PPL)为95.90%,等位基因数(Na)为1.8031,有效等位基因数(Ne)为1.5326,Nei’s基因多样性(H)为0.1618,Shannon’s指数(I)为0.3509,均高于个体水平;种群内和种群间Nei’s基因多样性计算遗传分化水平(Gst)为0.2832,种群间的基因交流为Nm=2.3591,表明野生坛紫菜种群间存在着较高的遗传多样性,遗传变异中有28.32%发生于群体间。108株坛紫菜的聚类分析结果同样也表明坛紫菜种群间的遗传分化水平较低,遗传变异主要存在于种群的个体间。结论:浙南海域野生坛紫菜种群间遗传差异较大,遗传多样性水平较高,个体间的遗传差异较小。表明目前浙南野生坛紫菜的种质资源较好。
- 王金丹叶薇南春容林少珍
- 关键词：坛紫菜ISSR标记遗传分化
- 线粒体基因MTATP6变异与2型糖尿病的相关性研究
- 本文研究线粒体基因 MTATP6的变异与2型糖尿病(T2DM)及其慢性并发症之间的相关性。选取浙江籍汉族人群中确诊为 T2DM 的无血缘关系患者254名以及165名年龄匹配的健康体检者。提取全血基因组 DNA,PCR 扩...
- 叶薇吕建新
- 文献传递
- 高效液相色谱法检测细胞能量代谢物质的方法建立与应用被引量：12
- 2012年
- 建立高效液相色谱法(HPLC)测定细胞中ATP、ADP和AMP含量的方法,以比较高糖培养的MRC-5细胞和D-半乳糖诱导的拟衰老MRC-5细胞能量代谢水平。体外培养的细胞经高氯酸裂解后,用反向HPLC法检测两组细胞ATP、ADP和AMP的含量。HPLC系统采用Ecosil C18反相柱(4.6*250mm 5μm pH 2～8),流动相为15mM磷酸二氢钾缓冲液和10%甲醇,流速0.5mL/min,紫外检测波长为254nm;检测温度为25℃,进样量20μL。以标准曲线法计算ATP、ADP和AMP含量,并计算腺苷酸能荷(EC)。结果显示拟衰老细胞的ATP含量及EC较对照组显著降低,而AMP含量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05),但两组之间的ADP含量没有明显差别。结果表明高效液相色谱法可检测出不同状态细胞能量物质的差异,其具有操作简便、快速、重现性好等特点,可以作为线粒体能量代谢功能的评估方法之一。
- 郑屹陈赛慧叶薇吕建新
- 关键词：高效液相色谱法ATPADPAMP细胞能量代谢
