郑屹
- 作品数：2 被引量：20H指数：2
- 供职机构：温州医学院检验医学院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划浙江省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 衰老过程中线粒体顺乌头酸酶活性变化对能量合成的影响被引量：8
- 2013年
- 目的:利用自然衰老雄性SD大鼠和D-半乳糖(D-Gal)诱导的细胞衰老模型,研究在衰老细胞中线粒体顺乌头酸酶(mitochondrial aconitase,ACO2)活性的变化及其对能量合成的影响。方法:利用55 mmol/L D-Gal诱导人胚肺成纤维细胞MRC-5衰老,并采用蔗糖连续密度梯度离心法分离大鼠脑组织和MRC-5细胞的线粒体;ACO2活性根据反应产物NADPH在340 nm的吸光度变化率进行检测,其表达水平分析分别用荧光定量PCR和Western blotting完成;利用试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量以反映细胞氧化还原状态;组织铁含量的检测则通过菲咯嗪法进行;线粒体膜电位及腺苷酸含量分别应用JC-1荧光探针法和高效液相色谱法检测,并计算能荷。结果:随着大鼠月龄增加,ACO2活性逐渐下降,表达水平无明显差异,组织铁水平逐渐升高;体外氧化应激实验显示ACO2活性随H2O2处理浓度和时间增加而下降;细胞衰老模型中,SOD活性降低,MDA含量升高,ACO2活性下降而表达水平未变;自然衰老大鼠和细胞衰老模型中,线粒体膜电位、ATP合成与能荷呈明显下降趋势。结论:衰老过程中,随着氧化压力增加,氧化应激敏感的ACO2活性下降,影响三羧酸循环效率,同时伴线粒体膜电位下降,进而使得能量合成降低。
- 叶薇陈赛慧郝东杰郑屹曹建明吕建新
- 关键词：衰老线粒体氧化性应激
- 高效液相色谱法检测细胞能量代谢物质的方法建立与应用被引量：12
- 2012年
- 建立高效液相色谱法(HPLC)测定细胞中ATP、ADP和AMP含量的方法,以比较高糖培养的MRC-5细胞和D-半乳糖诱导的拟衰老MRC-5细胞能量代谢水平。体外培养的细胞经高氯酸裂解后,用反向HPLC法检测两组细胞ATP、ADP和AMP的含量。HPLC系统采用Ecosil C18反相柱(4.6*250mm 5μm pH 2～8),流动相为15mM磷酸二氢钾缓冲液和10%甲醇,流速0.5mL/min,紫外检测波长为254nm;检测温度为25℃,进样量20μL。以标准曲线法计算ATP、ADP和AMP含量,并计算腺苷酸能荷(EC)。结果显示拟衰老细胞的ATP含量及EC较对照组显著降低,而AMP含量明显升高,差异具有统计学意义(p<0.05),但两组之间的ADP含量没有明显差别。结果表明高效液相色谱法可检测出不同状态细胞能量物质的差异,其具有操作简便、快速、重现性好等特点,可以作为线粒体能量代谢功能的评估方法之一。
- 郑屹陈赛慧叶薇吕建新
- 关键词：高效液相色谱法ATPADPAMP细胞能量代谢
