马艳丽
- 作品数：8 被引量：73H指数：4
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- 结缔组织生长因子短发夹状RNA表达质粒的构建及其对肝星状细胞结缔组织生长因子表达的影响被引量：1
- 2006年
- 结缔组织生长因子（CTGF）是一种新发现的促成纤维细胞分裂和胶原沉积的生长因子，在肝纤维化形成中的作用逐渐受到关注。RNA干扰技术是目前最有效的基因沉默技术，能特异性抑制靶基因的转录，进而下调相应蛋白水平及功能。本研究将能在体内自主合成短发夹状RNA（shRNA）的pEGFP-CTGF表达质粒转人大鼠肝星状细胞（HSC-T6），观察其对CTGF mRNA及蛋白表达的影响。
- 主余年任万华张春清马艳丽石军赵幼安
- 关键词：肝星状细胞
- 发卡样CTGF特异性RNA干扰重组体的构建及筛选被引量：2
- 2006年
- 目的:利用Pgenesil-1质粒载体构建介导结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA表达的质粒,并筛选有效的抑制序列。方法:分别设计3对有小发夹结构的两条DNA序列及1对非特异对照序列,经退火成互补双链,再克隆至带有U6启动子的质粒载体Pgenesil-1中,构建重组体,转化DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后,进行测序分析。将构建成功的4组重组体转染HSC-T6 24 h后,通过半定量RT-PCR分析HSC-T6 CTGFmRNA的表达水平,与空白对照及仅加转染试剂组比较分析。结果:CTGF的shR-NA片段被成功克隆到Pgenesil-1质粒载体中,经酶切与测序证实构建成功,转染HSC-T6 24 h后,与空白对照组相比,通过半定量RT-PCR分析发现有两组细胞CTGFmRNA水平明显下降,24 h抑制效率分别为(74±5)%,(P<0.01);(61±3)%,(P<0.05)。转染非特异shRNA组及仅加转染试剂组CTGFmRNA表达水平无明显变化。结论:成功构建了能表达CTGFshRNA的3组重组体,并筛选出能高效抑制CTGF表达的shRNA序列,为进一步探索肝纤维化基因治疗的新途径奠定了实验基础。
- 主余华张春清任万华马艳丽赵幼安
- 关键词：结缔组织生长因子短发夹RNA
- 乙肝病毒cccDNA的研究进展被引量：1
- 2006年
- 马艳丽任万华
- 关键词：CCCDNA乙肝病毒HBV感染状态乙型肝炎病毒基因组病毒持续感染进入细胞
- 银杏叶提取物对大鼠肝星状细胞细胞因子和胶原合成及细胞增殖的影响被引量：16
- 2006年
- 目的研究银杏叶提取物抗肝纤维化的可能机理。方法用不同浓度(0,1,10,100,500μg·ml-1)的银杏叶提取物处理HSC-T6细胞24h和48h,采用RT-PCR法检测各组细胞转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达;应用流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化。结果银杏叶提取物在10,100,500μg·ml-1浓度能明显抑制TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达(P<0.01或P<0.05),在一定范围内呈剂量和时间依赖性,影响HSC-T6的细胞周期,降低其增殖活性。结论银杏叶提取物可明显抑制HSC-T6细胞的增殖,抑制细胞因子及细胞外基质成分基因的表达,由此发挥抗肝纤维化的作用。
- 主余华张春清石军任万华马艳丽
- 关键词：肝星状细胞银杏叶提取物转化生长因子-Β结缔组织生长因子胶原
- CTGF shRNA对肝星状细胞细胞因子及细胞外基质表达的影响被引量：3
- 2007年
- 目的:研究结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对肝星状细胞(HSC-T6)中TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因表达及细胞外基质分泌的影响。方法:将已构建并筛选有效含绿色荧光蛋白(EGFP)的CTGFshRNA质粒以转染试剂Metafectene转染HSC-T6,另设空质粒组、只加Metafectene组及空白对照组,24 h及48 h后,用RT-PCR法检测各组细胞中TGF-β1、CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达;放免法分析细胞上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量;流式细胞仪分析转染效率。结果:CTGFshRNA质粒在肝星状细胞的转染效率24 h、48 h分别为(60±5)%(、42±3)%;与空白对照组相比,空质粒组、脂质体组对基因表达及细胞外基质的分泌均无影响,而CTGFshRNA能明显抑制CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA的表达,降低上清液中Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白的含量(P<0.01或P<0.05),而对TGF-β1的基因表达则无影响。结论:CTGFshRNA可明显抑制肝星状细胞CTGF、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因表达及细胞外基质的分泌。
- 主余华李肖红张春清任万华赵幼安马艳丽
- 关键词：短发夹RNA转化生长因子Β结缔组织生长因子
- 银杏叶提取物治疗慢性乙型肝炎肝纤维化病人32例被引量：15
- 2007年
- 目的：探讨银杏叶提取物(GbE761)对慢性乙型肝炎病人肝组织纤维化的影响。方法：将60例慢性乙型肝炎病人分为GbE761治疗组32例,年龄(34±s 13)a,16～55 a及对照组28例,年龄(34±14)a,17～57a,对照组给予常规治疗,治疗组给予常规治疗加GbE761 20 mL,静脉滴注,每日1次,共4 wk,治疗前后分别检测肝功能、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)和转化生长因子β_1(TGF-β_1)。治疗组中5例分别于治疗前后进行肝活检术并行病理组织学检查。结果：治疗后2组的肝功能水平均较治疗前显著好转,但2组比较无差异(P>0．05)。治疗组治疗后PCⅢ,CⅣ,HA,LN及TGF-β_1水平分别下降(139±65)μg·L^(-1),(90±41)μg·L^(-1),(84±51)μg·L^(-1),(93±33)μg·L^(-1),(27±7)μg·L^(-1)(P<0．01),而对照组PCⅢ,CⅣ,HA,LN及TGF-β_1水平无明显变化(P>0．05)。治疗组5例肝活检证实,治疗后肝脏纤维化程度减轻,细胞损伤减轻。结论：GbE761对慢性乙型肝炎有显著的抗肝纤维化作用。
- 王京主余华任万华张春清马艳丽
- 关键词：肝炎乙型慢性细胞外基质转化生长因子Β银杏叶提取物
- 定量检测乙型肝炎病毒cccDNA的临床意义被引量：19
- 2006年
- 马艳丽任万华主余华孙宝泉董振芳
- 关键词：慢性乙型病毒性肝炎HBVCCCDNAHBVDNA
- 乙型肝炎病毒cccDNA定量与乙型肝炎临床及病理关系被引量：17
- 2005年
- 目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)肝组织HBVcccDNA定量与乙型肝炎的关系。方法分别采用荧光定量PCR、酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测48例CHB肝组织HBV cccDNA定量、肝组织和血清HBV DNA定量、乙型肝炎病毒标志物。同时用链霉菌抗生素蛋白-过氧化物酶连接法(SP)检测肝细胞中HBcAg表达。分析肝组织HBV cccDNA与组织和血清HBV DNA、HBeAg、肝细胞内HBcAg水平及肝脏炎症活动度的关系。结果1.肝组织HBV cccDNA定量与组织和血清HBV DNA定量呈正相关(r=0.837,P<0.001;r=0.627,P<0.005);2.肝组织HBV cccDNA定量与肝细胞内HBcAg半定量呈正相关(r=0.618,P<0.005);3.肝组织HBV cccDNA定量与肝脏炎症活动度无明显相关(P>0.05):4.HBeAg阳性较抗-HBe阳性患者肝组织HBV cccDNA定量、肝组织和血清HBV DNA定量高(P<0.05)。结论荧光定量PCR法检测肝组织HBV cccDNA定量是评价HBV复制最直接可靠的指标,在CHB的诊断和抗病毒治疗中有重要意义。但与肝组织炎症无明显相关。
- 马艳丽任万华董振芳主余华
- 关键词：慢性乙型肝炎共价闭合环状DNA
