雒丽娜
- 作品数：5 被引量：19H指数：3
- 供职机构：宁夏大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 利用重叠延伸PCR技术进行定点突变研究(英文)被引量：4
- 2012年
- [目的]建立一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。[方法]以重组人组织型纤溶酶原激活剂rPA(Reteplase)基因为模板,采用重叠延伸PCR技术对3个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到克隆载体pEASY-Blunt上,并通过测序验证突变结果。[结果]测序结果表明3个位点的突变结果与预期完全一致,即第10位引入单个碱基A、第137位碱基C突变为G以及第686位碱基G突变为A,通过重叠延伸PCR技术一次引入3个突变碱基,100%的实现目的位点的定点突变。[结论]该研究成功实现目的位点的定点突变,为rPA基因的进一步克隆和功能研究奠定了基础。同时也表明重叠延伸PCR技术是一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。
- 雒丽娜王盛王玉炯
- 关键词：定点突变
- 利用重叠延伸PCR技术进行定点突变研究被引量：12
- 2012年
- [目的]建立一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。[方法]以重组人组织型纤溶酶原激活剂rPA(Reteplase)基因为模板,采用重叠延伸PCR技术对3个位点进行定点突变,将突变基因片段克隆到克隆载体pEASY-Blunt上,并通过测序验证突变结果。[结果]测序结果表明3个位点的突变结果与预期完全一致,即第10位引入单个碱基A、第137位碱基C突变为G以及第686位碱基G突变为A,通过重叠延伸PCR技术一次引入3个突变碱基,100%的实现目的位点的定点突变。[结论]该研究成功实现目的位点的定点突变,为rPA基因的进一步克隆和功能研究奠定了基础。同时也表明重叠延伸PCR技术是一种高效、便捷、经济的DNA定点突变方法。
- 雒丽娜王盛王玉炯
- 关键词：定点突变
- 利用有机溶剂法快速纯化绿色荧光蛋白
- 2012年
- 介绍非色谱GFP纯化方法——有机溶剂纯化法.该方法在短时间内(30min)即可获得大量较高纯度(91.7%),且荧光光谱特征不改变的GFP蛋白.纯化过程简单,无需昂贵的仪器和设备,适合绝大多数中小实验室使用.
- 王盛董洁曾瑾曹慜张虹雒丽娜
- 关键词：绿色荧光蛋白两相系统
- TBSV病毒瞬时表达载体构建及其表达被引量：4
- 2011年
- 为了深入理解植物RNA病毒载体表达系统,初步建立了利用TBSV病毒表达载体在寄主植物烟草中表达外源蛋白的技术体系.以番茄丛矮病毒（Tomato bushy stunt virus,TBSV）为材料,构建了含报告基因sGFP的WY1,WY2等2个重组病毒表达载体,并将载体导入农杆菌GV3101用于侵染烟草植株叶片;利用农杆菌渗滤接种技术,使构建的载体在烟草本氏烟（Nicotiana benthamiana）中进行瞬时表达.结果表明,接种WY1的烟草,于接种后第2 d就可以检测到荧光信号,10~12 d时表达量达到最高.纯化后的sGFP与标准GFP相对分子质量相同且其荧光光谱也与文献报道的一致.对于感兴趣基因（Gene of interested,GOI）的表达和研究提供了一种新的途径.
- 王盛王杨李志英张虹雒丽娜董洁王玉炯
- 关键词：植物病毒番茄丛矮病毒烟草
- 利用TMV病毒载体在烟草中瞬时表达rPA(Reteplase)
- 2012年
- 构建了携带有人组织型纤溶酶原激活剂突变体rPA(Reteplase)的烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)瞬时表达载体PJL TRBO-rPA,并转入农杆菌GV3101中.利用农杆菌渗滤接种技术在烟草本氏烟(Nicotiana benthamiana)中进行表达.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹(western blotting)和纤维蛋白琼脂糖平板(fibrin-agarose plate assay,FAPA)法检测分析.结果表明,在烟草中成功地表达出了有活性的rPA.为在植物中生产Reteplase提供了一条可能的途径.
- 雒丽娜王盛
- 关键词：烟草花叶病毒
