- 稳定表达NGF、BDNF和NT3星形胶质细胞系的建立及其鉴定被引量：4
- 2005年
- 目的 :探讨星形胶质细胞直接作为转基因靶细胞进行目的基因的表达。方法 :克隆大鼠 NGF、BDNF和 NT3基因 ,构建真核表达载体 ;3种重组载体分别转染星形胶质细胞 ,G4 18筛选后获得阳性克隆细胞进行扩大培养 ;取基因修饰星形胶质细胞培养液上清培养 PC12细胞或 Trk B- PC12细胞 ;用 Western blotting杂交或免疫组织化学方法检测基因靶细胞目的基因的表达及其水平。结果 :经 G4 18筛选后 ,转染 NGF、BDNF和 NT3基因修饰星形胶质细胞呈 G4 18抗性 ;转染 NGF和 NT3基因条件培养液上清培养的 PC12细胞 ,数量增多 ,突起明显变长 ,转染 BDNF基因条件培养液上清培养的 Trk B- PC12细胞 ,同样数量增多 ,突起明显变长。大部分 G4 18抗性的基因靶细胞出现 NGF、BDNF和 NT3免疫染色阳性。Western blotting杂交显示有相应分子量大小的蛋白条带出现。结论 :星形胶质细胞直接作为基因靶细胞能有效地表达和分泌有生物学活性的 NGF、 BDNF和 NT3。
- 马丽娜遇红梅赵文静洛涛陈森野元裕古川昭荣
- 关键词：星形细胞
- 胶原和微载体基质在脑星形胶质细胞培养中的应用
- 2005年
- 目的:研究脑星形胶质细胞在用一定量胶原、微载体基质制备的细胞培养环境中微载体上的贴壁分布,探讨胶原、微载体基质及其浓度与细胞生长的关系,并筛选出最佳技术参数。方法:以乳化的微小球形颗粒载体为基质,用一定浓度胶原、微载体基质制备细胞培养微载体环境,对大鼠脑星形胶质细胞进行囊化高密度长期培养。结果:细胞贴壁率与胶原、微载体培养环境中胶原浓度有关,不同浓度胶原包埋微载体培养环境条件对细胞生长影响不同。在胶原、微载体基质培养环境下培养7d后,脑星形胶质细胞密度由2×10 5/15 m m平皿达到18×10 5/15 mm平皿,培养6个月后达到4 0×10 5/15 m m平皿,在该培养条件下所能达到的细胞最大密度明显高于常规培养,并以很高的细胞存活率维持更长时间。此时微载体量为4 g·L- 1 ,胶原溶液与微载体的比例为1∶3。结论:在合适的培养条件下,细胞能维持在有限体积培养液中高密度长期生长。
- 马丽娜雒涛赵文静陈森
- 关键词：胶原微载体细胞培养星形细胞
