谢大兴
- 作品数：39 被引量：192H指数：8
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金卫生部临床学科重点项目国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用Sub-G1法和PA法分析HL-60细胞自发凋亡的周期特异性被引量：1
- 2002年
- 分别用Sub G1法和PA法对人类早幼粒细胞急性白血病细胞株 (HL 6 0 )的自发凋亡进行检测 ,发现HL 6 0细胞自发凋亡时 ,在DNA直方图上 ,G1峰前出现亚G1峰 (Sub G1峰 ) ,G1期细胞增加 ,S期和G2 /M期细胞减少。同时G1期细胞发生自发凋亡 ,而S期 ,G1期细胞少有凋亡发生。
- 王家顿谢大兴陈金明张天民龚建平
- 关键词：流式细胞术细胞周期HL-60细胞白血病肿瘤细胞
- MOLT-4细胞凋亡不同阶段活性Caspase-3在细胞内的空间位相移行被引量：16
- 2004年
- 背景与目的:在细胞凋亡过程中,位于细胞浆中的Caspase-3酶原是由什么方式引起细胞形态序贯性变化的问题还没有完全阐明,本研究旨在探讨放射诱导的MOLT-4细胞凋亡不同阶段活性Caspase-3在细胞内的空间分布、细胞形态的变化以及二者的关系。方法:10GyX射线照射诱导MOLT-4细胞。亚G1峰法和凝胶电泳检测凋亡细胞中DNA变化。膜联蛋白V标记细胞膜,带荧光素的Caspase抑制剂(fluorochromeinhibitorofcaspase,FLICA)标记活性Caspase,并用流式细胞仪检测。应用共聚焦显微镜观察MOLT-4细胞凋亡形态及活性Caspase-3在细胞内的分布。免疫印迹检测Caspase-3的表达。结果:X射线10Gy照射后,MOLT-4细胞出现细胞膜翻转、凋亡小体等典型的细胞凋亡特征。其凋亡过程中Caspase-3激活,4h其活性明显增加。在细胞内,活性Caspase-3由靠近细胞膜的胞浆面向细胞浆、胞核移行,与细胞凋亡的形态学变化相吻合,在时间上早于细胞膜翻转。结论:X线照射后MOLT-4细胞中Caspase-3激活,且其亚细胞分布与细胞凋亡的形态学变化相吻合。活性Caspase-3在凋亡细胞中空间位相的移行是放射诱导的细胞凋亡机制之一。
- 冯永东谢大兴覃吉超钟以胜李小兰肖薇吴剑宏陶德定胡俊波龚建平
- 关键词：细胞凋亡CASPASE-3细胞内定位激光扫描共聚焦显微镜MOLT-4
- Cyclins非时相性表达和MDR1与胃肠道恶性肿瘤分期的研究被引量：1
- 2007年
- 目的：研究胃肠道恶性肿瘤的4种主要Cyclins的表达规律，以此为依据对恶性肿瘤进行分型，并结合肿瘤标本中MDR1（多药耐药基因）的表达情况，与肿瘤TNM分期进行相关性研究。方法：使用流式细胞术分析新鲜手术获取的肿瘤标本的CyclinD1，E，A，B1及与MDR1表达情况，再记录术后病理报告进行TNM分期。结果：根据4种主要Cyclins的表达情况对恶性消化道肿瘤分为Ⅰ～Ⅳ型cyclin非时相性表达类型，此Ⅰ～Ⅳ型细胞周期类型与TNM分期有一致性（Kappa值为0．599，P〈0．01），Ⅰ～Ⅳ型细胞周期类型中MDR1的表达水平逐渐增高（Spearman相关系数0．495，P〈0．01）。结论：根据4种主要Cyclins（Cyclin D1，E，A，B1）的表达情况对胃肠肿瘤进行的分型具有与TNM分期相同的意义，可以说是对“分子分期”的一种探索。在消化道肿瘤中，MDR1与肿瘤细胞周期破坏类型有关，对治疗具有指导意义。
- 郭勇覃吉超周毅何小军李伟华谢大兴龚建平
- 关键词：胃肠肿瘤细胞周期蛋白类MDR肿瘤分期
- 一种新的双向电泳蛋白样品制备方法被引量：3
- 2006年
- 目的探讨双向凝胶电泳(2-DE)样品裂解液对蛋白质分离和双向凝胶电泳结果的影响。方法以MOLT-4细胞为例,采用3种溶解性能不同的裂解液提取细胞中的蛋白质组,并分别进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果通过对2-D PAGE图谱的比较分析,发现采用8 mol/L Urea,2 mol/L Thiourea,4%CHAPS,1%NP-40,4%TritonX-100,65 mmol/L DTT,0.5 mmol/L PMSF,0.5%pharmalyte 3-10,能获得质量较高的2-DE图谱。结论采用高浓度脲、三去污裂解液有利于获得优质的蛋白质样品,从而提高蛋白质提取率和双向电泳分辨率等。
- 李小兰谢大兴肖徽吴剑宏姚静冯永东陶德定刘双又胡俊波龚建平
- 关键词：蛋白质组双向电泳固相PH梯度MOLT-4细胞
- 大鼠脑缺血再灌注后神经细胞的细胞周期特征的比较研究被引量：5
- 2006年
- 目的比较观察大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞和神经元细胞周期的变化特征。方法采用线栓法大鼠大脑中动脉栓塞模型,利用流式细胞技术检测假手术组和缺血再灌注后不同时间点各组大脑皮层和海马中星形胶质细胞和神经元细胞周期的异常激活和动态变化。结果缺血后大脑皮层中神经元24h时即发生明显细胞周期变化,而3d时进入细胞周期的星形胶质细胞才明显增加;海马中星形胶质细胞却先于神经元进入细胞周期,于24h时细胞周期即发生明显变化,与假手术组比较有显著差异(P<0.01)。结论在不同脑区星形胶质细胞和神经元两者对缺血性脑损伤的敏感性互不相同,并且不同脑区的星形胶质细胞对缺血性脑损伤的敏感性也有不同,脑缺血后2种细胞均出现细胞周期的异常激活。
- 王萍王伟谢敏杰喻志源徐运兰张贵斌田代实谢大兴
- 关键词：细胞周期脑缺血流式细胞术
- 灭活细胞周期检测点激酶基因对顺铂诱导肺癌细胞凋亡的影响被引量：1
- 2009年
- 目的观察顺铂（DDP）作用下肺癌A549细胞系的细胞周期和凋亡的动力学特点，以及灭活细胞周期检测点激酶1（Chk1）和细胞周期检测点激酶2（Chk2）基因对DDP诱导的肺癌细胞凋亡的影响。方法优化转染条件后，将肺癌A549细胞分为8组进行转染，分别为正常组（未经任何处理的A549细胞）、对照组（A549细胞接受10μmol／L的DDP作用12h）、转染Chk1正义寡核苷酸链（sODN）组、转染Chk1反义寡核苷酸链（AsODN）组、转染Chk2sODN组、转染Chk2AsODN组、联合转染Chk1和Chk2sODN组以及联合转染Chk1和Chk2AsODN组，其中后6组转染24h后再以10μmol／L的DDP处理12h。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot法，检测转染Chk1或Chk2sODN、AsODN后，A549细胞中Chk1或Chk2mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞仪Annexin V-FITC法和Sub-G1法，检测转染Chk1和（或）Chk2 sODN、AsODN后，DDP作用下A549细胞的细胞周期和凋亡变化。结果10μmol／L的DDP作用12h后，非同步化处理的A549细胞出现了明显的S期阻滞现象。转染24h后，Chk1或Chk2AsODN可明显抑制A549细胞中Chk1mRNA和蛋白或Chk2 mRNA和蛋白的表达。与单独转染Chk1或Chk2sODN组相比，单独转染Chk1或Chk2 AsODN组DDP诱导下A549细胞的凋亡率约提高了1—2倍（P〈0．05）；但联合转染Chk1和Chk2 AsODN组与单独转染Chk1 AsODN或Chk2 AsODN组相比，A549细胞凋亡率的差异无统计学意义（P=0．521和P=0．339）。结论灭活Chk1和Chk2基因引起化疗增敏的机制可能是通过解除S期阻滞这种肿瘤细胞的自我保护机制实现的，Chk1和Chk2基因可作为肺癌化疗药物增敏治疗的有效靶点。
- 叶飞谢大兴卢运萍高庆蕾
- 关键词：化学疗法CHK1CHK2细胞周期凋亡
- 细胞周期特异性细胞凋亡的形态学观察被引量：2
- 2005年
- 目的观察喜树碱诱导Molt-4细胞凋亡形态的细胞周期时相性变化,建立一种新的细胞周期特异性细胞凋亡分析方法。方法以凋亡诱导剂喜树碱(终浓度为0.15μmol/L)影响下的Molt-4细胞为检测对象,应用流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期的变化;用琼脂糖凝胶电泳的方法探测断裂的DNA片段存在,进一步证实细胞凋亡的存在;碘化丙啶(PI)染色后,再应用流式分选术结合激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microsope,LSCM)观察各期细胞形态从而对已凋亡细胞进行形态学确认。结果①琼脂糖凝胶电泳可见清晰的DNA梯形条带(DNAladder);②喜树碱导致Molt-4细胞周期的S期水平明显下降,并伴随有一明显的细胞凋亡峰;③只在S期细胞中可见到已凋亡细胞。以上说明喜树碱可以诱导Molt-4细胞凋亡,并细胞凋亡发生在细胞周期中的S期,与传统的结论一致。结论通过DNA直方图分选后细胞凋亡形态学分析可以对细胞凋亡的细胞周期特异性进行检测。这种方法使细胞周期特异性凋亡的分析更加可靠全面。
- 李金萍谢大兴冯永东李晓兰陶德定龚建平
- 关键词：喜树碱细胞凋亡细胞周期流式细胞术激光共聚焦显微镜
- 细胞周期检测点的流式细胞术分析被引量：8
- 2005年
- 背景与目的:真核细胞的细胞周期运行遵循着严格的时相次序,这种精密的延缓和强制的次序,由细胞监控机制——检测点来完成,检测点功能的丧失会导致肿瘤的发生。传统的细胞周期检测点分析多数基于群体细胞DNA直方图的流式细胞术。本研究以晚G1期检测点为模式,建立一种新的细胞周期检测点分析方法——Cyclins/DNA双参数流式细胞术,并评价应用该方法进行细胞周期检测点分析的可行性和优越性。方法:将紫外线照射诱导后的人类急性淋巴细胞型白血病细胞株(MOLT-4)于不同时间点收获固定,分两组进行流式细胞仪检测:一组用DNA直方图法,Modifit软件分析计算G0/G1期细胞总数;另一组应用CyclinE/DNA双参数流式细胞术对G1晚期细胞CyclinE的荧光强度、阈值及G0/G1各亚期细胞数量进行定量分析,并比较两组实验结果。结果:用DNA直方图法观察到紫外线照射后0～4hG0/G1期细胞总数基本不变(5300～5500),6h后开始上升(6241,12.6%)。而用CyclinE/DNA双参数法观察到:(1)G1晚期细胞的CyclinE荧光强度于照射后短时间内便开始变化,1h上升为341.2(对照295.1,15.6%),6h上升为577.6(95.7%),此时CyclinE阈值上升到5.4(0h为2.0);(2)G0/G1各亚期细胞数目变化趋势不明显:G1晚期细胞数6h时略为减少(此时凋亡率为5.61%),G1早期细胞数缓慢上升。结论:CyclinE/DNA双参数流式细胞术将CyclinE的荧光强度及表达阈值定量化,对于细胞晚G1期检测点的检测比传统的DNA直方图法更为敏感和精确。
- 谢大兴吴剑宏冯永东李小兰陶德定龚建平
- 关键词：流式细胞术细胞周期细胞周期检测点细胞周期素
- 流式细胞术的凋亡检测技术在人胃肠实体瘤药敏试验中的应用被引量：4
- 2007年
- 目的化疗药能诱导肿瘤细胞凋亡,据此将流式细胞术的经典凋亡检测技术应用到临床特异性抗肿瘤药物的筛查,实现快速,准确的药物敏感性报告。方法应用流式细胞术的An- nexin V/PI技术,检测67例临床手术切除的胃肠肿瘤在不同化疗药物诱导下发生的凋亡。结果7种化疗药物诱导的胃肠肿瘤凋亡率有显著差异,胃癌的凋亡率以紫杉醇,丝裂霉素,氟尿嘧啶最高;而大肠癌以氟尿嘧啶,丝裂霉素,奥沙利铂诱导的凋亡率最高。联合化疗方案,胃癌以氟尿嘧啶联合紫杉醇的敏感率及凋亡率最高;大肠癌以氟尿嘧啶联合奥沙利铂的敏感率及凋亡率最高。结论不同肿瘤或同一肿瘤的不同个体,对化疗药物的敏感性均不同。临床可应用凋亡检测技术作为快速的药物敏感性检测方法,为肿瘤化疗筛选合适的个体化有效方案,避免无效化疗。
- 姚静谢大兴吴剑宏李小兰肖徽陶德定龚建平
- 关键词：流式细胞术脱噬作用药物敏感性
- 胃癌第5转移的基本规律
- 研究目的:2013年,基于初步研究的数据,我们提出了胃癌的第5转移假说。假说认为,已有的胃癌四大转移,直接侵犯,腹膜播散,血行转移,淋巴扩散均存在于特定的空间或腔隙内(cavity),如果系膜腔隙被证实,其内极有可能也存...
- 谢大兴刘亮海山龚建平
- 文献传递
