罗勇
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：广东省生物工程药物重点实验室更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组鲨鱼血管生成抑制因子功能活性区蛋白纯化工艺的优化被引量：1
- 2012年
- 目的优化重组鲨鱼血管生成抑制因子(Shark angiogenesis inhibition factor,SAIF)功能活性区(aSAIF)蛋白的纯化工艺。方法利用离子交换层析和镍柱亲和层析对带有组氨酸标签的融合蛋白His6-SUMO-aSAIF进行纯化。纯化后的融合蛋白经SUMO蛋白酶切除小分子泛素样修饰蛋白(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)标鉴,再经镍柱二次亲和层析获得非融合aSAIF蛋白,采用WST-8法对其进行血管生成抑制活性检测。结果优化的纯化工艺参数为:离子交换层析采用0.2 mol/L的NaCl进行洗脱;亲和层析的洗脱液为20 mmol/L磷酸盐,500 mmol/L NaCl,250 mmol/L咪唑,pH 7.4;SUMO蛋白酶与融合蛋白的最佳酶切比例为1∶480,酶切时间为1 h。最终获得的aSAIF蛋白纯度可达95%,具有较好的抑制血管内皮细胞增殖的活性,且呈剂量依赖性。结论已成功建立了aSAIF的纯化工艺,为后续大规模生产及抑制血管生成机制的研究奠定了基础。
- 彭雯丹罗勇陈钧王亚玉黎美香谢秋玲
- 关键词：纯化工艺
