彭雯丹
- 作品数：4 被引量：1H指数：1
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省教育部产学研结合项目广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 重组鲨鱼血管生成抑制因子功能活性区蛋白纯化工艺的优化被引量：1
- 2012年
- 目的优化重组鲨鱼血管生成抑制因子(Shark angiogenesis inhibition factor,SAIF)功能活性区(aSAIF)蛋白的纯化工艺。方法利用离子交换层析和镍柱亲和层析对带有组氨酸标签的融合蛋白His6-SUMO-aSAIF进行纯化。纯化后的融合蛋白经SUMO蛋白酶切除小分子泛素样修饰蛋白(Small ubiquitin-related modifier,SUMO)标鉴,再经镍柱二次亲和层析获得非融合aSAIF蛋白,采用WST-8法对其进行血管生成抑制活性检测。结果优化的纯化工艺参数为:离子交换层析采用0.2 mol/L的NaCl进行洗脱;亲和层析的洗脱液为20 mmol/L磷酸盐,500 mmol/L NaCl,250 mmol/L咪唑,pH 7.4;SUMO蛋白酶与融合蛋白的最佳酶切比例为1∶480,酶切时间为1 h。最终获得的aSAIF蛋白纯度可达95%,具有较好的抑制血管内皮细胞增殖的活性,且呈剂量依赖性。结论已成功建立了aSAIF的纯化工艺,为后续大规模生产及抑制血管生成机制的研究奠定了基础。
- 彭雯丹罗勇陈钧王亚玉黎美香谢秋玲
- 关键词：纯化工艺
- 重组鲨鱼血管抑制因子活性片段蛋白aSAIF纯化工艺及其抑制肿瘤机制研究
- 目的：在构建了重组工程菌BL21(DE3)/PET-3C/aSAIF-SUMO的基础上，对重组鲨鱼血管抑制因子（aSAIF）的高密度发酵条件及中试纯化工艺进行优化，初步探讨其抑制肿瘤生长及血管生成的机制。 方法：在5L发...
- 彭雯丹
- 关键词：血管生成纯化工艺研究
- 文献传递
- 利用高通量生物反应器优化一种CHO细胞无血清培养基
- 2011年
- 研究以DMEM/F12(1:1 V/V)培养基为基础,添加不同添加剂优化一种适宜CHO DG44细胞生长的廉价培养基。以细胞密度和细胞活率为主要指标,对DMEM/F12(1:1 V/V)培养基进行了优化。通过正交试验和单因素试验筛选出了CHO DG44细胞生长的最佳培养基。正交试验结果表明添加8mg/L Insulin、10mg/L Transferrin、12mM Glutamine、9mg/L Ethanolamine、9mg/L Sodium selenite、0.5×Lipids、0.5×Vitamin,对细胞生长有较好促进作用,细胞密度从0.6×106 cells/mL上升到1.8×106 cells/mL。在此基础上添加2.5g/L Malt Peptone和2.5g/L YeastExtract可使细胞密度达到2.65×106 cells/mL,基本上达到商业培养基的培养效果,而成本降低了约60%。
- 陈先金彭雯丹郭欣泳陈小佳谢秋玲
- 关键词：CHO细胞无血清培养基
- 乳腺癌细胞中人血小板衍生生长因子受体β启动子的基础活性研究
- 2011年
- 目的:探讨低迁移表型的乳腺癌细胞MCF-7和高迁移表型的乳腺癌细胞MDA-MB-231中血小板衍生生长因子β启动子的基础活性及转录调控差异。方法:Real-Time PCR,Weastern blot等技术检测PDGFRβ在2株细胞中的转录和表达差异。双荧光报告系统检测PDGFRβ启动子各缺失突变片段在2株细胞中的活性,筛选差异片段。生物信息学预测启动子区可能存在的转录因子。凝胶迁移实验研究转录因子在两株乳腺癌细胞中对PDGFRβ启动子的调节活性。结果:两株细胞中都有PDGFRβ的内源性表达,且在MDA-MB-231中表达较高。在2株细胞中找到了人PDGFRB启动子的重要活性调节区,(+539bp,+1457bp)在2株细胞中均呈负调控,(+54bp,+539bp)在两株细胞中均呈正调控,(-983bp,+54bp)在MDA-MB-231中呈显著正调控,在MCF-7中没有活性。转录因子AP1的转录活性和与DNA的结合活性在MDA-MB-231中均高于MCF-7。结论:不同迁移表型的乳腺癌细胞中PDGFRβ存在不同的表达调控机制,PDGFRβ启动子活性片段(-983bp,+54bp)在两株细胞中存在显著活性差异。转录因子AP-1在两株细胞中有表达水平和结合活性差异。
- 谢秋玲卢加刘兰张传宇郭欣泳彭雯丹陈小佳
- 关键词：PROMOTER人乳腺癌细胞MCF-7MDA-MB-231AP-1
