王皓
- 作品数：83 被引量：169H指数：6
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学经济管理更多>>
- 抗CTLA-4嵌合抗体的制备及生物学活性鉴定被引量：1
- 2012年
- 制备新型抗CTLA-4人鼠嵌合抗体并进行活性鉴定。通过杂交瘤技术获得高亲和力小鼠抗人CTLA-4单克隆抗体22G11和16C11;利用分子克隆技术将鼠源抗体可变区基因与人源抗体恒定区拼接后,最终通过CHO-K1工程株细胞表达高亲和力抗CTLA-4嵌合抗体。经SDS-PAGE电泳显示最终获得了纯度高于90%的CTLA-4嵌合抗体c22G11和c16C11,抗原结合活性结果表明两株嵌合抗体都能很好地与Jurkat细胞结合,竞争抑制实验表明它们都能与各自对应的鼠源抗体竞争。据此,本实验获得了两株抗人CTLA-4胞外区的高亲和力和特异性嵌合抗体。
- 许静李晶杨扬郭怀祖钱卫珠张大鹏王皓
- 关键词：CTLA-4单克隆抗体免疫原性嵌合抗体
- 含有效B细胞活化因子基因启动子的重组质粒及其制备方法和用途
- 本发明涉及生物医药工程技术领域。目前有关B细胞活化因子(BAFF)基因上游调控元件的准确定位及其与相应的DNA结合蛋白的相互作用的研究尚属空白，更未见任何有关病理条件下BAFF基因调控元件的功能变化的报道。本发明提供一种...
- 仲人前周琳孔宪涛高春芳王皓屠小卿陆慧琦
- 文献传递
- 双功能VEGF受体融合蛋白突变体的生物学活性研究被引量：1
- 2010年
- 为了研制出能同时阻断肿瘤血管与淋巴管生成的抗肿瘤制剂,我们设计构建了同时包含VEGFR1和VEGFR3功能域的基因工程双功能融合受体(VEGFRIg)。为了改善VEGFRIg的血浆半衰期以增强其抗肿瘤疗效,我们选择VEGFRIg的3个碱性氨基酸进行突变诱导获得了双功能受体的突变体VEGFRIgm。研究结果表明,VEGFRIgm具有与VEGFRIg相似的与VEGF-A和VEGF-C结合的能力,能有效地抑制VEGF-A诱导的人脐静脉内皮细胞增殖及VEGF-C诱导的人皮肤淋巴内皮细胞增殖。进一步研究表明,VEGFRIgm在小鼠体内的半衰期比VEGFRIg显著延长,提示其可能发展成为一个新型的高效抗肿瘤药物。
- 王韬张大鹏杨扬许静石金平钱卫珠李博华魏于全王皓
- 关键词：血管内皮生长因子受体血管内皮细胞淋巴管内皮细胞半衰期抗肿瘤活性
- 高效转染人T细胞的逆转录病毒载体系统的构建及应用被引量：4
- 2006年
- 目的：构建能高效转染人T细胞并带有快速筛选标签的逆转录病毒载体系统，并与传统的逆转录病毒载体系统做比较。方法：首先在原载体pCMMP-EGFP的基础上，构建携带内部核糖体进入位点（IRES）基因的逆转录病毒载体pCMMP-IRES-GFP。将嵌合T细胞受体基因插入该载体中，与另外两个辅助载体pMD．MLVgag．pol和pHDM．G共同转染包装细胞293T。48h后收培养上清，高速离心病毒。同时将嵌合T细胞受体基因插入传统的逆转录病毒载体pLXSN中，并转染包装细胞PA317，用G418加压筛选出转染的PA317细胞克隆。扩大培养48h后，收细胞培养上清即为病毒液，分别用上述两种方法得到的病，譬液感染NIH333细胞，检测病毒的滴度。取适量病毒液感染川PHA激活后的人原代T细胞，48h后在荧光显微镜下观察绿色荧光，并用流式细胞术（FCM）检测病毒感染的效率。结果：成功地构建逆转录病毒载体pCMMP—IRES-GFP。将目的基因插入该载体中，与pMD．MLVgag．pol和pHDM．G共同转染包装细胞293T。培养48h后，离心收获浓缩的上清中含有滴度为2．15×10^11VP／L的病毒。以其感染用PHA激活后的人原代T细胞48h后，在荧光显微镜下能观察到绿色荧光蛋白（GFP）的表达。FCM检测病毒对T细胞的感染效率为50％～60％，并可用FCM进行分选。而用pLXSN载体转染的PA317细胞，包装得到的病毒滴度为6．43×10^9VP／L，病毒感染T细胞的效率仅为5％～10％。结论：构建了能高效转染T细胞并带有快速筛选标签的逆转录病毒载体系统，为T细胞的基础与临床研究打下了基础。
- 张瑞萍云琳彭玲陆斌周倩王皓郭亚军
- 关键词：逆转录病毒载体T细胞内部核糖体进入位点
- 一种适用于评价CD20抗体体内外抗肿瘤效应模型的建立
- 2010年
- 研究通过基因转染的方法建立了稳定表达不同水平人CD20分子的小鼠骨髓瘤细胞克隆:CD20高表达(NS1-CD20H)、中表达(NS1-CD20M)和低表达(NS1-CD20L)的NS-1细胞株。利用建立的CD20分子高、中、低表达的NS-1细胞系,我们初步研究了CD20分子表达水平与CD20抗体杀伤活性的关系。实验结果表明,随着CD20分子表达水平的提高,CD20抗体(Rituximab和2F2)的CDC和ADCC作用均相应增强。2F2抗体具有与Rituximab相似的ADCC作用。对于CD20高表达细胞,2F2抗体显示出和Rituximab相似的CDC活性。但对于CD20低表达的NS-1细胞,2F2的CDC活性远强于Rituximab。体内实验结果表明对于荷有NS1-CD20L的小鼠,Rituximab不能显示出抗肿瘤活性,而2F2则具有显著的抗肿瘤作用。由于这两个抗体有相似的ADCC活性,实验结果提示CDC可能是CD20抗体的重要作用机制之一。我们建立的不同程度表达CD20的NS-1细胞克隆可以成为一种新型的CD20抗体活性评价模型,并有助于进一步阐明CD20抗体的作用机制。
- 刘广洛钱卫珠李博华杨扬许静王皓
- 关键词：CD20RITUXIMAB单克隆抗体B细胞非霍奇金淋巴瘤
- TGFβ1检测在慢性肝病肝纤维化诊断中的初步应用被引量：12
- 2002年
- 目的 探讨血清TGFβ1水平检测在慢性肝病肝纤维化的诊断意义及其影响因素。 方法 采用双抗体夹心ELISA法检测 2 0例正常人血清、10例正常人血浆及 76例慢性肝病患者血清TGFβ1水平 ,比较正常人与慢性肝病患者、正常人血清与血浆TGFβ1水平及慢性肝病患者血清TGFβ1水平与肝穿病理检查结果的相关性。 结果 慢性肝病在纤维化早期及炎症改变期TGFβ1水平较正常人显著上升 ,但在不同的炎症、纤维化级期间TGFβ1水平无显著差异 ,慢性肝病患者血清TGFβ1水平与其血小板计数高度相关。正常人血清TGFβ1水平较血浆值高近 4倍 ( 2 1.4± 10 .4μg/L对 4.8± 3.0 μg/L) ,两者间有显著差异 (P <0 .0 1)。 结论 TGFβ1水平可反映肝脏的炎症和早期纤维化性改变 ;血小板数及标本血清、血浆的选择将影响TGFβ1检测水平。虽然血清TGFβ1水平在一定程度上反映慢性肝病肝脏炎症及纤维化性改变 ,但选用血浆更能准确反映体内TGFβ1的真实水平。
- 高春芳徐玲玲王皓赵文静孔宪涛
- 关键词：TGFΒ1肝纤维化血清血浆
- 包裹紫杉醇和连接SM5-1单链抗体的PLGA纳米球的制备和抗肿瘤研究
- 目的靶向纳米药物是将包裹药物的纳米药物连接上靶向性配体制备而成一种具有靶向性的药物。靶向纳米药物可以特异性靶向肿瘤细胞,而且其毒副作用较小。本研究的目的是制备一种包裹紫杉醇和连接带多聚赖氨酸(polylys)的SM5-1...
- 王皓高洁寇庚李博华钟延强郭亚军
- 关键词：纳米药物紫杉醇单链抗体
- 文献传递
- 抗CD3人源化抗体恒定区突变体的制备及其生物学活性被引量：1
- 2004年
- 为了降低抗CD3人源化抗体hu12F6对T细胞的激活作用以克服首剂效应 ,构建了恒定区特定位点突变的hu12F6重链表达载体 ,将其与hu12F6的轻链表达载体共转染CHO细胞 .ELISA和RT PCR证实 ,恒定区特定位点突变的人源化抗体hu12F6m在CHO细胞中获得了表达 .竞争抑制实验证实hu12F6m具有与原鼠源抗体及hu12F6相似的特异性和亲和力 .增殖实验表明hu12F6m对T细胞的刺激作用明显弱于hu12F6 .实验结果为深入探讨hu12F6m的生物学特性奠定了基础 .
- 李博华王皓杨扬陆斌王华菁张大鹏钱卫珠季军捷李晓东郭亚军
- 关键词：CD3人源化抗体定点突变首剂效应
- 内皮细胞选择素及其配体在肝癌转移中的作用被引量：2
- 1996年
- 目的：研究内皮细胞选择素及其配体在肝癌转移中的作用。方法：采用地高辛标记探针原位杂交的方法，检测了正常肝脏、肝癌组织及癌旁肝组织中内皮细胞选择素（Ｅ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ）及其配体合成的关键酶岩藻糖转移酶（Ｆｕｃ－Ｔ）的转录水平。结果：Ｅ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ的转录只局限于内皮细胞，且在肝癌及正常肝组织之间没有差别；但Ｆｕｃ－Ｔ的转录水平在肝癌与正常肝组织之间差别明显，表现为多发肝癌中子瘤的水平明显高于母瘤，母瘤明显高于单发肝癌，单发肝癌明显高于癌旁组织，而癌旁组织又明显高于正常肝组织。结论：Ｅ－Ｓｅｌｅｃｔｉｎ与其配体的相互粘附，在肝癌的转移中起了重要作用。
- 谢天培吴孟超顾天爵范俊刘彦君王皓王华菁郭亚军
- 关键词：肿瘤转移岩藻糖转移酶肝肿瘤
- 肝癌组织中神经节苷脂谱改变的机理研究被引量：2
- 1996年
- 目的：检测肝癌组织中唾液酸酶的活性，探讨肝癌组织中神经节苷脂谱改变（ＧＤ３含量增加）的机理。方法：以蓖麻凝集素Ⅱ与乳糖基的特异结合为基础，用神经节苷脂ＧＭ３作为水解底物包被于９６孔板，在唾液酸酶的作用下，糖链末端的唾液酸被切除而暴露出乳糖残基，用生物素标记的蓖麻凝集素与后者结合，再用ＡＢＣ法测定结合量即可检测唾液酸酶活性。结果：肝癌组织中不管是可溶性的还是膜结合性的唾液酸酶，其活性都明显低于其癌旁组织。结论：肝癌组织中神经节苷脂ＧＤ３增加的原因不仅与ＧＤ３合成酶活性的增高有关，还与其水解酶唾液酸酶活性的降低相关。
- 谢天培沈锋施乐华刘彦君王华菁王皓钱卫珠郭亚军吴孟超
- 关键词：肝肿瘤神经节苷脂唾液酸酶
