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缺失E3L基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选被引量：4: 2011年; 通过在E3L同源重组臂中插入含有增强型痘苗病毒早晚期启动子(pE/L)、增强型绿色荧光蛋白基因和同向Loxp(Locus of X-over P1)序列的表达盒构建穿梭质粒pTE-EGFP。利用pTE-EGFP和野生型天坛株痘苗病毒共转染仓鼠肾细胞(BHK-21),通过对绿色荧光蚀斑的10次筛选,构建缺失E3L基因并含有EGFP基因的重组痘苗病毒rTTVV-TE--EGFP+。利用rTTVV-TE--EGFP+和含有Cre(Cyclization recombination)重组酶基因的重组质粒pVAX1-Cre共转染BHK-21细胞,通过对无荧光蚀斑的10次筛选,构建无筛选标记的天坛株痘苗病毒减毒株rTTVV-TE--,并利用聚合酶链式反应(PCR)对其进行鉴定。鉴定结果显示,rTTVV-TE--中无E3L基因转录和EGFP基因表达。以上结果说明,所构建的痘苗病毒减毒株rTTVV-TE--完全缺失了E3L基因和外源筛选标记EGFP基因,且具有良好的遗传稳定性。; 王宇航李霄王浩然阚式绂王卓越齐延新吴娜杜寿文金宁一; 关键词：病毒载体

表达Apoptin基因抗肿瘤双特异性重组腺病毒的构建及鉴定: 为了开展靶向性重组腺病毒进行基因治疗的研究,构建了三种穿梭质粒pAd-VP3,pAd–VT和pAd-VP,每种载体均含有Apoptin基因,其中pAd–VT和pAd–VP为双特异性抗肿瘤重组腺病毒,他们分别含有hTERT...; 王卓越李霄阚式绂王宇航齐延新金宁一; 关键词：腺病毒载体 HTERT启动子基因治疗; 文献传递

反转录病毒载体介导的EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中的表达被引量：1: 2011年; 为了构建携带报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的反转录病毒载体,并观察EGFP基因在SP2/0小鼠骨髓瘤细胞中的表达情况。试验将增强型绿色免疫荧光基因片段定向插入反转录病毒载体pFB-neo,获得重组反转录病毒质粒pFB-NE,利用三质粒共转染系统,将含有目的基因的重组反转录病毒质粒pFB-NE以及含有辅助病毒gag-pol和env基因的质粒pVPack-GP、pVPack-10A1共转染HEK-293细胞,用产生的重组反转录病毒感染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0,并在荧光显微镜下观察EGFP基因的表达。结果表明:重组反转录病毒载体pFB-NE构建正确,重组病毒包装成功,EGFP基因在细胞中能够稳定表达。; 王婧李昌李林溪胡博丛艳昭任大勇王卓越杜寿文金宁一; 关键词：反转录病毒载体

E3L缺失型天坛株痘苗病毒减毒载体的构建及筛选: 利用PCR技术、DNA克隆技术构建携带有痘病毒早晚期强力复合启动子(PE/L)、天坛株痘苗病毒E3L基因外两侧同源重组臂、绿色荧光蛋白(EGFP)、loxp序列的穿梭质粒pSK-PTE-EGFP及用于敲除EGFP基因的质...; 王宇航李霄阚式绂王卓越齐延新杜寿文金宁一; 关键词：重组痘苗病毒减毒; 文献传递

利用Cre-loxp系统及EGFP/Brdu双筛选标记构建天坛株痘苗病毒TK基因缺失痘苗病毒载体: 目的研究去除重组痘苗病毒中的筛选基因EGFP,构建一株更加便于筛选的痘苗病毒载体。针对痘苗病毒天坛株复制非必需区TK,利用Cre-loxp系统构建了穿梭载体pSK-PTK-EGFP,与TTVV共转(感)染BHK细胞,通过...; 阚式绂金宁一李霄王宇航刘立明王卓越齐延新王金辉刘广臣

E3L缺失型天坛株痘苗病毒减毒载体的构建及筛选: 利用PCR技术、DNA克隆技术构建携带有痘病毒早晚期强力复合启动子(PE/L)、天坛株痘苗病毒E3L基因外两侧同源重组臂、绿色荧光蛋白(EGFP)、loxp序列的穿梭质粒pSK-PTE-EGFP及用于敲除EGFP基因的质...; 王宇航李霄阚式绂王卓越齐延新杜寿文金宁一; 关键词：重组痘苗病毒减毒; 文献传递

利用Cre-loxp系统及EGFP/Brdu双筛选标记构建天坛株痘苗病毒TK基因缺失痘苗病毒载体: 研究去除重组痘苗病毒中的筛选基因EGFP，构建一株更加便于筛选的痘苗病毒载体。针对痘苗病毒天坛株复制非必需区TK，利用Cre-loxp系统构建了穿梭载体pSK-PTK-EGFP，与TTVV共转(感)染BHK细胞，通过同源...; 阚式绂金宁一李霄王宇航刘立明王卓越齐延新王金辉刘广臣; 关键词：基因缺失病毒载体

重组腺病毒Ad-VT的安全性评价: 重组腺病毒Ad-VT为一种具有特异性杀伤肿瘤细胞和特异性复制能力的双特异性抗肿瘤重组腺病毒。有希望成为一种安全、特异、有效的治疗肿瘤的临床候选药物，极具有开发前景。药物的安全性、有效性和质量可控制性是药品属性的三个基本...; 王卓越; 关键词：急性毒性试验长期毒性试验; 文献传递

表达鸡新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶基因的重组腺病毒对肝癌细胞HepG-2的抑制作用被引量：6: 2010年; 目的探讨表达鸡新城疫病毒(NDV)血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的重组腺病毒Ad-HN对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用。方法应用Ad-HN感染HepG-2细胞,采用MTT法检测Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制作用;AnnexinV染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡;AO/EB染色法和DAPI染色法对Ad-HN感染的肿瘤细胞及细胞核进行形态学观察;底物显色法检测Caspase1、Caspase3、Caspase6和Caspase8活性的变化。结果Ad-HN能够有效抑制HepG-2细胞的增殖,当感染剂量为100MOI,作用时间为48h时,Ad-HN对HepG-2细胞增殖的抑制率达峰值(17.20%～35.04%);AnnexinV染色结果显示,Ad-HN感染48h后HepG-2细胞凋亡率为29.39%;Ad-HN感染导致HepG-2细胞呈现细胞浓缩、细胞核皱缩进而碎裂等凋亡特征;Ad-HN感染可显著上调HepG-2细胞的Caspase酶活性。结论Ad-HN能够诱导HepG-2细胞凋亡,并对HepG-2细胞产生抑制效应。; 温中梅李霄刘妍高鹏阚式绂王卓越王宇航彭丽萍金宁一; 关键词：新城疫病毒重组腺病毒肝癌抗肿瘤作用

反转录病毒介导的稳定表达HIV-1 Gag蛋白和增强型绿色荧光蛋白细胞系的建立被引量：4: 2011年; 本研究旨在建立中国流行株人免疫缺陷病毒(HIV-1)衣壳蛋白(Gag)哺乳动物稳定表达细胞系。将HIV-1核心蛋白基因gag和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP依次串联插入反转录病毒载体pFB-neo,构建重组反转录病毒载体pFB-gag-EGFP,并与含有辅助病毒gag-pol和env基因的质粒pVPack-GP、pVPack-10A1共转染HEK293T细胞,包装出的反转录病毒感染小鼠骨髓瘤细胞SP2/0。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白EGFP表达,验证HIV-1核心蛋白Gag表达,G418抗性筛选阳性细胞。结果表明,HIV-1核心蛋白Gag和增强型绿色荧光蛋白可在SP2/0细胞中稳定表达,HIV-1核心蛋白gag基因稳定表达细胞系成功建立,为抗AIDS治疗用基因工程制剂及靶向药物的活性检测提供了理想方法。; 王婧李昌李林溪胡博丛艳昭任大勇王卓越杜寿文金宁一; 关键词：反转录病毒载体人免疫缺陷病毒核心蛋白增强型绿色荧光蛋白

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王卓越