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赖型钩体flaB2与VR1012中的CpG基序分析: 2003年; 目的　对问号赖型钩端螺旋体 (赖型钩体 ) DNA疫苗〔包括内鞭毛蛋白基因 (fla B2 )和质粒 DNA表达载体 (VR10 12 )〕的 Cp G基序 (Cp G motifs)进行分析 ,为 DNA疫苗免疫机制的阐明和提高 DNA疫苗的效能奠定基础。方法　以 fla B2与 VR10 12构建重组 DNA的免疫原 ,对 fla B2及 VR10 12全核苷酸序列进行计算机分析 (分类、计数和定位 )。结果　 Cp G的“C”的侧翼为两个嘌呤 ,“G”的侧翼为两个嘧啶 ,在 fla B2中共 3个 ,分别为GACGCT,GACGTC和 GACGCC;在 VR10 12中共 11个 ,分别为 GACGTC1个 ,GACGCT2个 ,GACGCC1个 ,GACGTT1个 ,GGCGTT2个 ,GGCGCT2个 ,GGCGCC1个 ,AACGCT1个 ,其中特别重要的 TGACGTCA4个和 TAACGCCA有 1个 ,位于 5′端 4 5 6～ 4 6 3;5 0 9～ 5 16 ;5 92～ 5 99;778～ 785和 4 86～ 4 93;4个 TGACGTCA和 1个TAACGCCA均位于 5′端且相对集中。结论　赖型钩体 fla B2与 VR10 12构成的 DNA疫苗含有 TGACGTCA等Cp G,这些基序又称免疫刺激序列 ,构成了; 戴保民游自立何泼王敏王雅静; 关键词：钩端螺旋体 DNA疫苗核苷酸序列分析 CPG基序

问号赖型钩端螺旋体内鞭毛蛋白与外膜蛋白基因融合DNA疫苗载体的构建被引量：1: 2002年; 目的　为增强问号赖型钩端螺旋体 (钩体 0 17株 ) DNA疫苗内鞭毛蛋白基因 (fla B2 )与外膜抗原基因 (omp L1 )的免疫保护作用 ,构建一种能表达 fla B2 与 om p L1 蛋白融合蛋白的 DNA疫苗载体。方法　通过聚合酶链反应分别扩增 0 17钩体 fla B2 与 omp L1 片段并进行融合 ,获得的嵌合基因 om p L1 - fla B2 中含有 10个氨其酸的中间接头序列 ,以维持其空间构象。结果　经酶切鉴定 ,证实有一 1.8kb片段插入载体 ,其 fla B2 及 om p L1 DNA测序结果与文献报道的一致。结论　表达 0 17株钩体 fla B2 与 om p L1 抗原融合蛋白的; 王敏戴保民游自立方之茂王雅静; 关键词：外膜蛋白基因融合 DNA疫苗

问号澳洲型钩端螺旋体复合抗原基因ompL_1/flaB_2表达质粒的构建: 2002年; 目的　为增强澳洲型钩端螺旋体 (简称澳洲型钩体 ) 6 0 7株抗原的免疫原性 ,而构建其外膜蛋白抗原基因ompL1和内鞭毛抗原基因flaB2 的复合抗原基因重组质粒。方法　通过聚合酶链反应扩增ompL1及flaB2 ,将其分别克隆到pcD NA3 1/Myc-His(+)载体T7启动子下游 ,进行序列测定分析 ,在此基础上将ompL1及flaB2 同时克隆至表达载体 pcD NA3 1/Myc -His(+) ,构建成A - pcLMF1复合抗原基因表达质粒。结果　澳洲型钩体 6 0 7株的ompL1及flaB2 与报道的其它株钩体的序列呈很高的同源性。澳洲型钩体重组质粒A -pcLMF1经酶切鉴定证实 :有一 1 8kb片段插入。结论　澳洲型钩体复合抗原基因ompL1/flaB2; 王敏戴保民游自立; 关键词：外膜钩端螺旋体病

一种钩端螺旋体DNA疫苗的免疫原性和免疫保护性研究被引量：13: 1999年; 为了研究赖型钩体内鞭毛蛋白基因在动物体内的表达及其免疫保护性，采用ＰＣＲ扩增内鞭毛蛋白编码基因，以表达质粒ＶＲ１０１２为载体，构建了含有钩体的内鞭毛基因的重组质粒。在新西兰大白兔四头肌内注射该重组质粒ＤＮＡ５００μｇ／只，重复３次，每次间隔３周，于每次注射前和末次注射后３周，检测血清抗赖型钩体抗体效价。结果显示：在第１次加强免疫注射后３周，试验组血清抗体效价显著增高。豚鼠免疫保护试验表明，该ＤＮＡ重组质粒有明显免疫保护作用，在无佐剂条件下试验组存活率为９０％（９／１０只）。本研究为钩体核酸疫苗研制奠定了基础。; 游自立戴保民陈庄阎和平方之茂方之茂刘家福; 关键词：钩端螺旋体 DNA疫苗免疫原性免疫保护

问号赖型钩体与七日热型钩体内鞭毛蛋白基因的克隆及序列分析: 2002年; 目的　筛选钩体核酸疫苗的候选株 ,并从基因水平解释钩体血清型的特异性。方法　通过 PCR方法扩增赖型 0 17株及七日热型 5 6 6 10株钩体的内鞭毛蛋白 (fla B)基因 ;经 T/A快速克隆法将 PCR产物连接于PGEM- T Easy Vector载体。用 α-互补法、PCR法及酶切分析鉴定重组质粒 ,获得了重组质粒 p DHTF0 17和p DHTF6 10 ;双脱氧终止法对两个重组质粒中的克隆化 fla B基因进行测序。结果　两型 fla B基因长 85 2 bp,编码2 83个氨基酸。两个基因的限制性内切酶位点相似 ,含多个常见酶切位点。基因编码的蛋白质预测相对分子质量为31.3× 10 3。结论　几个血清型的 fla B基因同源性达 90 %～ 99%。; 何泼戴保民乔中东游自立方之茂; 关键词：赖型钩体钩端螺旋体病

赖型钩体pD C 38核酸序列测定及其与流感伤寒型钩体外膜蛋白基因om pL 1核酸序列的类似性匹配被引量：2: 1999年; 为了探讨赖型钩体ｐＤＣ３８插入片段基因组ＤＮＡ编码、位置与ｏｍｐＬ１基因的关系，作者采用在流感伤寒型钩体外膜蛋白基因ｏｍｐＬ１首尾区段设计一对引物，以ｐＤＣ３８插入片段作模板进行ＰＣＲ扩增、测定和类似性匹配（ａｌｉｇｎｍｅｎｔ）。结果发现：ｐＤＣ３８含有２．７ｋｂ和３．０ｋｂ两个插入片段，３．０ｋｂ片段含有１个ｏｍｐＬ１基因全拷贝。结论：类似性匹配表明，ｐＤＣ３８和ｏｍｐＬ１相同碱基８６４个（９０％），碱基变异（不配对）９６（１０％）个，ｐＤＣ３８可用于钩体诊断、分类、鉴定、疫苗和发病机理的研究。; 戴保民陈庄DavidA.Haake游自立方之茂; 关键词：钩端螺旋体病外膜蛋白基因

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